Способ определения функционального состояния стенки сосудов

,ЯО 10 СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 010 А 33/48 Ц 50 А 61 В 10/00; С 0 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВСГС 01 ОЗЮ Ч Р"(3 ЪМЬИ 3 ТаЯа.З.Вель ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71МосковКрасного Знлогическийи ИнститутАМН СССР(561 1Вегпа 1 соП 8 гееВо 1 оупе, 19 ский ордена Трудовогоамени медицинский стоматоинститут .им; Н.А.Семашкомедицинской радиологии 5(088,8 1пегд еС а 1, 5 1 пСегпаС 1 ое оп 1 ЬгошЬоешЬо 11 еш,78, 451.(54)(57 СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ СТЕНКИ СОСУДОВ путем исследования крови до и после их пережатия, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что с целью повышения специфичности способа, в крови, вэятой иэ пальца, определяют АДФ-индукцированную агрегацию тромбоцитов, вычисляют отношение АДФ-индуцированной агрегации до и после пережатия сосуда конечности и определяют Функциональное состояние стенки сосудов по вычисленному соотношению.Изобретение относится к клинической и экспериментальной медицине иможет быть использовано для оценкифункционального сосудистого эндотелия У больных, а также в эксперименте у лабораторных животных,Известен способ определения функционального состояния сосудистойстенки беэ биопсии путем исследования крови до и после пережатия сосудов Г 11,10Однако исследование функционального состояния сосудистой стенки путем определения концентрации простациклина или его метаболитов недостаточно специфично, так как его источником могут быть не только клеткисосудистого эндотелия, но и клеткилегких, желудка и др. Кроме того,используемые с этой целью антисыворотки недостаточно специфичны и дают 20перекрестные реакции с другими простагландинами в силу близости их химического строения,Цель изобретения - повышение специфичности способа. 25Цель достигается тем, что согласно способу определения функционального состояния стенки сосудов путем,исследования крови до и после их пережатия, в крови, взятой иэ пальца, З 0определяют АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов, вычисляют отношения АДФ-индукцированной агрегациидо и после пережатия сосудов конечности иопределяют функциональноесостояние стенки сосудов по вычисленному соотношению.Способ осуществляют следующим об"разом.в. 40Две пробирки устанавливают в штатив. В пробирки вводят по 100 мл 1 мкл 13,14-ного раствора лимоннокислого натрия . Мякоть пальца руки большого протирают спиртом. После высыхания спирта обычным способом де 1лают прокол кожы глубиной 3-4 мм. Первую. каплю крови осторожно удаляют. В силиконированную микропипетку, содержащую 20 мкл 3,8-ного раствора лимоннокислого натрия, набирают 180 мкл свободно вытекающей крови. Стабилизированную кровь выдувают в первую пробирку. Кровь в пробирку осторожно перемешивают в течение Зб с. Для определения исходного количества тромбоцитов иэ первой пробирки в смеситель для красной крови до отме ки 0,5 набирают кровь и до отметки 101 - разводящую жидкость для подсчета тромбоцитов. Кровь в 60 смесителе перемешивают с разводящей жидкостью и до подсчета тромбоцитов смесителя хранят при комнатной температуре 40-60 мин вовремя, необходимое для лизиса эритроцитов. 65 На руку накладывают манжету манометра для измерения кровяного давления, определяют систолическое давление, повышают давление в манжетке на 10 мм рт,ст. Через 3 мин делают прокол кожи и набирают кровь в микро- пипетку (20 мкл). Кровь переносят во вторую пробирку и забирают пробу в смеситель для подсчета тромбоцитов.Первую и вторую пробирки Устанавливают в штатак, расположенный в центре магнитной мешалки, опускают по металлическому стержню, вводят по 30 мкл раствора АДФ (конечная концентрация в крови 0,01 мг/мл ) и включают магнитную мешалку. Через 5 мин мешалку выключают, берут кровь для подсчета тромбоцитов,Во всех пробах подсчитывают количество тромбоцитов.О степени индуцированной агрегации судят по разнице в содержании тромбоцитов в крови до введения АДФисходное количествои через 5 мин после введения АДФ. Индуцированную агрегацию рассчитываютпо формулеА ф 100:агрегация,где А - исходное количество тромбоцитов;В - количество тромбоцитов вкрови через 5 мин после добавления АДФ.У здоровых людей до венозного застоя индуцированная агрегация тромбоцитов равна 60-70.В крови, взятой после венозногозастоя, при нормальной антиагрегационной активности стенки сосудовагрегация тромбоцитов ниже, чем вкрови до застоя, что обусловленопоступлением в кровь простациклинастимулированным венозным застоем.При снижении антиагрегационныхсвойств стенки сосудов агрегациятромбоцитов в крови после венозногозастоя по своей величине приближается к агрегации тромбоцитов в кровидо застоя.По отношению степени агрегации тромбоцитов до и после венозного застоя судят об антиагрегационных свойствах стенки сосудов.При атеросклерозе, диабете, бжоге, постмастактомическом отеке и других . заболеваниях и состояниях организма функциональная активность стенки сосудов снижена, поэтому разница в степени агрегации тромбоцитов до и после веноэного застоя меньше, чем у здоровых.П р и м е р 1. Здоровый мужчина, 28 лет. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,8-ного лимоннокислого натрия,набирали 180 мкл свободно вытекающей крови. С помощью сфигмоманометра определили артериальное давление - 110 мм. Подняли давление в манжетке до 120 мм. Через 3 мин, не снимая манжетки, из прокола пальцавзяли 180 мкл крови в микропипетку,содержащую 20 мкл 3,14-ного лимонно кислого натрия. Пробы крови поместили в силконированные пробирки. Перемешивают магнитной мешалкой, подсчитали число тромбоцитов в каждой пробирке, после чего в пробирки добав Оляли АДФ в конечной концентрации0,01 мг/мл. Включили-магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали числотромбоцитов. После этого высчиталиАДФ-индуцированную агрегацию, а также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующиерезультаты: ДО пережа- После пе"р 0тия сосу- режатияда сосуда АДФ-индуцированная агрегация,58 25 Антиагрегационная активностьстенки сосудов,индекс 2,3 30 Следовательно предложенный способ выявил у здорового человека нормальную антиагрегационную активность сосудисной стенки. До пережа- После петия сосуда режатиясосуда,АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов,30 65 72 35П р и м е р 2. Здоровая женщина,34 года. Систолическое давление 105 мм рт,ст. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14-ного лимонно- кислого натрия, набирали 180 мкл свободно вытекающей крови. С помощьюсфигмоманометра определяли артериальное давление, затем подняли давление в манжетке на 10 мм. Через 3 мин, не снимая манжетки, взяли из прокола фаланги пальца 180 мкл крови в микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14-но,го лимоннокислого натрия. Пробы поместили в силиконированные пробирки, перемешали, Подсчитали число тромбоцитов в каждой пробирке. После этого 50 в пробирки добавили АДФ в конечной концентрации 0,01 мг/мл. Включили ,магнитную мешалку, Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. После этого вычислили АДФ-индуцированную агрегацию, а также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующие результаты:Антиагрегационная активностьсосудистой стенки, индекс 2,4 Послепережатия сосуда До пережатия сосуда АДФ-индуцированная агрегация, Антиагрегационная активность стенки сосудов, ин- декс 81 50 1,6 Таким образом, предложенный способ выявил снижение антиагрегационной активности стенки сосудов больного.П р и м е р 4. Больной, 58 лет, мужчина. Диагноз: атеросклероз, ишемическая болезнь сердца. В микро- пипетку, содержащую 20 мкл 3,14-ного раствора лимоннокислого натрия, набирали 180 мкл свободно вытекающей крови. С помощью сфигмоманометра определили артериальное давление 140 мм рт,ст. Подняли давление в манжетке на 10 мм.Через 4 мин, не, снимая манжетки, иэ прокола пальца взяли 280 мл крови в микропипетку, также содержащую 20 мкл 3,14-ного лимоннокислого натрия. Пробы крови поместили в силиконированные пробирки. Перемешали магнитной мешалкой. Подсчитали число тромбоцитов в каждой пробирке. После чего в пробирку добавляют АДФ в конечной концентрации 0,01 мг/мл. Включили магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. После этого насчитали АДФ-индуцированную агрегацию, а П р и м е р 3. Больной атеросклерозом, 52 года. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14-ного раствора лимоннакислого натрия, набирали 180 мкл свободно вытекающей крови. С помощью сфигмоманометра определили артериальное давление - 140 мм рт.ст. подняли давление в манжетке на 10 мм. Через 3 мин, не снимая манжетки, из прокола пальца взяли 180 мкл крови в микропипетку, также содержащую 20 мкл, 3,14-ного лимоннокислого натрия. Пробы крови поместили в силиконированные пробирки. Перемешали магнитной мешалкой. Подсчитали коли- честно тромбоцитов в каждой пробирке. После чего в пробирки добавляли АДФ в конечной концентрации0,01 мк/мл . Включили магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. После этого высчитали АДФ-индуцированную агрегацию, а также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующие результаты:1084010 До нережа- После петия сосуда режатия со- суда Здоровая конечность 30 60 До пережа- После петия сосуда режатия со- суда АДФ-индуцированная агрегация, ВАнтиагрегационная активность стенкисосуца, индекс 90 80 Составитель З.Вальковская Редактор В.Ковтун Техред Т.Дубинчак КоРРектоРА,тяскоЗаказ 1853/5 Тираж 688 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующие результаты:До пережа- После перетия сосуда жатия сосуда5 АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, В 84Антиагрегаци онная активность стенкисосудов, индекс 1,4Таким образом, обнаружено сниже ние антиагрегационной активности сосудистой стенки у больного с ишемической болезнью сердца.П р и м е р 5. Больная, 51 год.Диагноз: отек левой верхней конечности 1 У-ой степени, состояние после комбинированного лечения рака молочной железы, Операция была произведена в 1977 г. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14-ного раствора лимоннокислого натрия из здоровой и отечной конечности набирали по 180 мкл свободно вытекающей крови, С помощью сфигмоманометра определяли артериальное давление на здоровой руке160 мм рт.ст. и на отечной конечности - 130 мм рт,ст, В обеих конечностях подняли давление на 10 мм, Через 3 мин, не снимая манжетки, из прокола пальца взяли 180 мкл крови в микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14- ного раствора цитрата натрия. Пробы крови поместили в силиконированные пробирки. Подсчитали число тромбоцитов в каждой пробирке. После этого в пробирки добавили АДФ в конечной 40 концентрации 0,01 мг/мл. Включили магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. Через 20 мин подсчет повторили. Вычислили спонтанную и индуцированную агрега цию, а также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующие результаты: АДФ-индуцированная агрегация, В 73Антиагрегационная активность стенкисосуда, индекс 2,4Конечность с постмастэктомическимотеком Таким образом, предложенный способ позволил установить и количественно характеризовать степень нарушения функционального состояния сосудистой стенки конечности с постастэктрмическим отеком. Предложенный способ, следовательно, может явиться индикатором степени реабилитации микроциркуляторных процессов в отечной конечности после операции. Приведенные. примеры свидетельствуют о том, что предложенный способ может количественно оценить .функциональное состояние стенки сосудов у различного контингента больных на малом объеме крови - 0,36 мл, вместо 4,0 мл традиционным методом. Подобное уменьшение расхода крови на одно определение открывает воэможность для многократного использования способа в процессе лечения и внедрения способа в терапевтическую, хирургическую, онкологическую и педиатрическую практику,