Способ определения регенерационного процесса в печени

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 0, 01 10/О ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(56) 1. Сидорова В.Ф. Постнатальный рост и восстановление внутренних органов у позвоночных, М., Наука, 1969, с. 15.2. Карташов О.Я., Максимова А,А. Функциональная морФология печени. Рига, Зинатне, 1979, с.94. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕГЕНЕРАЦИОННОГО ПРОЦЕССА Б ПЕЧЕНИ путем гистологического исследования ткани и определения митотической активности гепатоцитов, о т л и ч а ю ю,ЯО,1 О 81466 Д щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа путем оценки степени выраженности регенерационного процесса, дополнительно определяют количество нормальных гепатоцитов и объем их ядер и при увеличении митотической активности и одновременном уменьшении количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер определяют слабую степень регенерационного процесса, при увеличении митотической активности и объема ядер и уменьшении количества нормальных гепатоцитов определяют среднюю степень регенерационного про, цесса и при увеличении митотической активности и уменьшении количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер определяют выраженную степень регенерационного процесса.Изобретение относится к медицине и касается оценки состояний печени при патологических процессах.Известен способ определения регенерационного процесса в печени, вклю.чающий подсчет митотически делящихся гепатоцитов в нормальной печенипри постнатальном росте животного 11Однако известный способ не даетвоэможность оценить степень регенерации патологически измененной печени.Наиболее близким по техническойсущности к изобретению является способ определения регенерационногопроцесса в печени путем гистологического исследования ткани и определения митотической активности гепатоцитов при разлкчньцс функциональных состояниях органа 23,Недостатком этого способа определения регенерационного процесса 20в печени является невозможностьоценки степени выраженности регенерационного процесса в патологически измененной печени.Целью изобретения является повышение точности способа путем оценки степени выраженности регенерационного процесса.Указанная цель достигается тем,. что согласно способу определения; 30регенерационного процесса в печенипутем гистологического исследованияткани и определения митотическойактивности гепатоцитов, дополнительно определяют количество нормальных гепатоцитов и объем их ядер ипри увеличении митотической активности и одновременном уменьшенииколичества нормальных гепатоцитови объема их ядер бпределяют слабую 40степень регенерационного процесса,.при увеличении митотичвской активности и объема ядер к уменьшенииколичества нормальных гепатоцитовопределяют среднюю степень регенерационного процесса и при увеличениимитотической активности и уменьшенииколичества нормальных гепатоцитови объема их ядер определяют выраженную степень регенерационного процесса.50Способ осуществляют следующимобразом.Кусочки печени фиксировали в 10 ном нейтральном формалине,. послечего приготавливали парафиновые 55срезы общепринятым методом. Последепарафинирования срезы окрашивалигематоксилин-зозином и с помощьюокулярной морфометрической сеткипод микроскопом при увеличении в 601350 раз подсчитывали количествонормальных гецатоцитов, которые имели ядро, неповрежденную ядерную кклеточную оболочку и белок в цитоплазме.Кроме того,. подсчитывали колкчество митоэов в среднем на 10 тыс.гепатоцитов,Суммарный .объем ядер гепатоцитов определяли по среднему числуузлов сетки, попавших на ядра пркмногих случайных наложениях сеткина иэображение пРепарата, и выражали в условных, единицах, при этомподсчитывали количество ядер, находящихся на площади препарата, ограниченной сеткой. После подсчетаобщего количества и суммарного объема ядер гепатоцитов на площадипрепарата, ограниченной сеткой, вычислялк средний объем ядра гепатоцита, который также выражали в услов- ,ных единицах.С помощью регресионного анализабыли выведены уравнения связи видаУйВО+ВХ +В 2 Х 2для каждой велйчийы, где В В иВ 2 - коэффициенты регрессий для изменения мктотической активности гепатоцитов У , количества нормаль 1 фных гепатоцктов У и объемов их ядер.У 5 в зависимости от продолжительности временк наблюдения Х и количества инъекций препарата, стимулирующего регенерацию Х.Каждая из величин не являлась линейной комбинацией остальных незавиеимых переменных, Интервалы междузначениями верхнего и нижнего уровня были не меньше и не равны ошибке, с которой они задавалисьВеличины Х и Х изменялись от -1 до +1,Х="1, Х 2 -1, соответствовали начальной гранйчной точке эксперимента.Аналогично рассчитывалк конечнуюграничную точку.Уравнение регрессии определены по,результатам эксперимента в граничныхточках. Коэффициенты уравненийсвидетельствуют о том, на скольковелико влияние переменной на изменение функции, Количество митотически делящихся гепатоцитов подсчитывается по уравнению.У: 0,885+0,332 Х+0,541 Х ,(1)Количество нормальных гепатоцйтовизменяется по уравнениюУ-" 5,340+0,333 Х+ 0,465 Х . (2)Объем ядер гепатоцитов изменяетсяпо уравнениюУ,280+0,022 Х,. +0,020 Х 2, (3)Изменение митотической активности гепатоцитов МИ, количества нормальных клеток К и объема кх ядерОЯ взависимостй от степени выраженности регенерационного процессапредставлено в табл.1.1081466 Таблица 1 ОЯ МИ К нг. 0,1-0,11 0,27-0,48 0,14-0,26 0,22-0,23 СлабаяЮредняяВыраженная 0,24-1, 03 1,05-6,63 0,12-0,13 0,2"0,21 Интактные животные 75 85 МК на 100 г массы в течение 25 3 сут. с интервалом 24 ч. При изучении действия хориогонина на,вос .становителвные процессы в печенивыявлялось его выраженное стимулирукзцее регенерацию свойство.30Изменение митотической активности, количества нормальных гепатоцитов и объема их ядер у экспериментальных животных после введенияхориогонина ХГ представлено втабл. 2. Таблица 2 Показатели регенерации Группы животных КНГ МИ ОЯ 1, 03+0,14 4, О+О, б 0480,05 С гепатитом,С гепатитом, получившие 1 раз ХГн 6,2 Ф 0,6 2,110,2 0,26+0,84 С гепатитом, получившие 2 раза ХГр 0,27+0,05 0,198,05 5,80,4 С гепатитом, получившие 3 раза ХГг 01+0,02 4,5+0,2 0,3310,04 Показатели регенерационногопроцесса П р и м е р 1. Для экспериментальных исследований были использованы беспородные йрысы.Патологию печени вызывали 20- кратными инъекциями ССРА в дозе 0,2 мл в 0,1 мл косточкового масла на крысу при введении 4 раза в неделю. В печени раэвивалисб явления,. сходные с хроническим персистируэтцим гепатитом человека.Для дальнейшей стимуляции регенерационного процесса в печени животным вводили хориогонин в дозе 3,4-4,04,1-5,85,9-8, 58,54-8,6 Степень выраженностирегенерацио нногорежима1081466 Составитель Л.СтебаеваТехред С.Мигунова Корректор В, Бутяга Редактор В.Данко Заказ 1522/35 Тираж 823 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 11 3035, Москва, Ж, Рвунская наб., д. 4/5филиал ппп патент, г. Ужгород, ул. проектная, 4 Данные, получерные в эксперименте, послужили основанием для исполь. эования хориогонина в комплексе с другими биологически активными веществами для лечения хронических гепатитов у детей. Его примеАение в различных дозах под контролем состояния печени позволило установить, что дозы 75 85 МК на 100 г массы ребенка оказывают такой же выраженный стимулирукщий эффект, как и дозы 160 170 МЕ, что позволило снизить лечебную дозу препарата.Предлагаемый способ определения регенерационного процесса в печени позволяет наряду с контролем за лечением больных также ускорить и уточнить оценку процесса регенераю ции в печени в 4-5 раза по сравнению с известным способом.