Способ моделирования хронического тонзиллита

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 09) 01) В 10 КОМИТЕТ СССР ТЕНИЙ И ОТКРЫТ ГОСУД АРСТВЕНН ПО ДЕЛАМ ИЗО САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВИДЕТЕЛ ледоваогии,икова ентальиллит.в УССРчениевонзилзда- хрородимарьков. тельский институт микробиолвакцин и сывороток им. Мечи(56) 1. Гюллинг Э.В. Экснеримный острый и хронический тонэТруды )й съезда отолярингологоКиев, 1965, с. 108-111.2. Киселев В.И., Гладкий ИТесленко-Пономаренко Е.ф, Знавирусно-микробной ассоциацииэтиопатогенезе хронического тлита, Сообщение Ц к вопросу сния модели экспериментальногонического тонэиллита. - В кн.Актуальные вопросы лечения, плактики, диагностики ревматизи гипертонической болезни, Ха1971, с. 60-63.(54)(57) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТОНЗИЛЛИТА путем сниженияиммунореактивности организма с последующим введением в ткань миндалин .аденовирусно-микробного," материала, ь т л и ч а ю щ и й с ятем что, с целью увеличения длительности воспалительного процесса,снижение иммунореактивности осуще-,ствляют путем многократного введения антигена из ткани миндалин допоявления в сыворотке крови специфических антител в титрах 1:2561:512 с последующим внутритонэиллярным введением гиповирулентноговарианта референс-штамма стрептококка Даше в дозе 10-20 млн. микробных тел.30 Изобретение относится к медицинеа именно к отаринолярингологии, иможет найти применение при разработке способов лечения хронического тонзиллита,Известен способ моделирования5хронического тонэиллита путем инФильтрации миндалин вирулентнойстрептококковой культурой со стимулятором фрейнда 1 1,Однако известный способ являет- . 10ся неадекватным .возникновению тонэиллита у человека.Известен способ моделированияхронического тонзиллита путем снижения иммунореактивности организмас последующим введением аденовирусно-микробного материала 2 3.Указанный способ является кратковременным.Цель изобретения - увеличениедлительности воспалительного процесса.Указанная цель достигается тем,что при осуществлении способа путемснижения иммунореактивности организма с последующим введением вткань миндалин аденовирусно-микробного материала, снижение иммунореактивности осуществляют путеммногократного введения антигена .из ткани миндалин до появления всыворотке крови специфических антител в титрах 1:256 - 1:512 с последующим внутритонзиллярным введением гиповирулентного варианта референс-штамма сто птококка Даше в35дозе 10-20 мпн. микробных тел.1Первая стадия. Приготовлениетканевого антигена для иммунизацииживотных.Тканевой антиген готовят из миндалин человека, удаленных во время оперативных вмешательств. Миндалины удаляют в стерильных условиях, отмывают Физиологическим раствором, взвешивают и раэмельчают в блендоре с небольшим количеством физиологического раствора до состояния тонкойэмульсии. Затем эмульсию заливаютфизиологическим раствором до соотношения 1,0 г .ткани на 10 мл 50физраствора; рН эмульсии доводятдо 8,0-8,5 с помощью 0,2-1-ногораствора едкого натра. Материал оставляют при 4-6 С в течение 2 ч сопериодическим перемешиванием. ЗатемрН доводят до 8,0 и подвергают.центрифугированию в течение 40 минпри 4000 об/мин. Осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость подкисляют слабым раствором уксусной кислоты до рН 6,0. Образовавшийся осадок удаляют центрифугированием,а надосадочную жидкость подкисляютдо рН 4,5. Выпавший осадок удаляютцентрифугированием, промывают подкисленной до рН 5 4,5 дистиллиро ванной водой и затем растворяют в дистиллированной воде, подщелачивают 1-ным раствором едкого натра до рН 7, 2. Всю.обработку ткани ведут в стериль ных условиях и на холоде. Концервацию материала осуществляют путем добавления раствора формалина до 0,2-ной концентрации. Антиген хранят при 4-бфС до 2 мес. В приготовленном антигене микрометодом по Къельдалю определяют количество азота и пересчитывают на белок, количество которого колеблется от 7 до 10 мг-.Вторая стадия. В качестве тест- микроба для внутритонзиллярного заражения; животных используют референс-штамм. стрептококка Даше, который при внутривенном и внутрибрюшинном введении в дозе 500 - 1000 мпн. микробных тел белым мышам весом 15-20 г вызывает 95 100-ную гибель от септикопиемии, а при внутритонзиллярном введении, например, кроликам в дозах 10 20 мпн. микробных тел - флегманоэное поражение.Используемый штамм стрептококка Даше направлено культивируют на средах в присутствии повышающихся концентраций антибиотиков, снижая тем самым вирулентность в 10 20 раз. В опытах используют антибиотикорезистентные генерации микроорганизмов, не вызывающие у контрольных животных развития Флегманозного поражения слизистых при внутритонзиллярном заражении в дозах 10-20 мпн. микробных тел.Третья стадия. Воспроизведение хроничесйого тонэиллита у кроликов.Кроликам весом 2,5-3,0 кг подкожно пятикратно вводят тканевый антиген с интервалом между инъекциями в 3 для по следующей схеме: первая инъекция - 1 мп тканевого антигена, содержащего 2 мг белка; вторая инъекция - 1 мп тканевого антигена, содержащего 4 мг белка; треться инъекция - 1 мл тканевого антигена, .содержащего 6 мг белка; четвертая инъекция - 1 мл тканевого антигена, содержащего 8 мг белка; пятая инъекция - 1 мл тканевого антигена, содержащего 10 мг белка.1Через 7 сут после последней инъекции антигена производят пробный забор крови с целью определения титра противотканевых сывороточных . антител. В опытах используют животных с титрами антител в пределах 1:256 - 1:512. При отсутствии таковых животным однократно вводят подкожно тканевой антиген в дозе, содержащей 10 мг белка.Через 7 сут после последней инъекции антигена в основание миндалинпри помощи инъекционной иглы под10697 В 1 25 Таблица еские изменен Наличие диффузной лнмфоидно. - плазмоклеточной.инфильтрации, мн жественных инфильтратов в паренхиме миндалин иногда с участками размягчения в центре. Кровеносны сосуды резко расширены, переполн ны кровью, фолликулы с активными центрами размножения дла гаеры с единительнойожественных иферативные ваты с активныминия, диффуэнаическая инфил 3 Разрастание со ткани, наличие м фильтратов, проли кулиты, фолликули центрами размнож лим о-плазмафоидн я контролем зрения вводят 10 млн в0,1 мл микробных тел суточнойстрептококковой культуры авирулентного варианта референс-штамма Даше.В опыт для воспроизведения хронического тонзиллита взято 15 кроликов. Наблюдение за животными проводилось в течение 6 мес с моментазаражения: первые 10 дней животныхосматривали через 1 день, в последующем - еженедельно.10После введения в миндалины стрептококковой культуры на следующийдень отмечалось ухудшение общегосостояния, гиподинамия, отказ отпищи. При осмотре области зева наблюдались некоторые проявления ост-рого воспалительного процесса: увеличение и гиперемия миндалин, иногда с наличием пленчатых налетовбелесоватого цвета. , 20На 3-5 сут. как общие, так иместные признаки острого тонэиллитаисчезали. Стрептококковая культурас поверхности миндалин выделяласьв течение 7-15 дней..В тканях миндалин кроликов,удаленных в разные сроки (1,5 - 3,61и 12 мес после инфицирования миндалин стрептококковой культурой, регистрировались катоморфологическиеизменения, характерные для хронического тонзиллита. Эти измененияотмечались, в основном, в паренхимеминдалин и проявлялись значительнымразрастанием соединительной тканикапсулы и трабекул миндалины, наличием множественных инфильтратов,иногда с участками размягчения вцентре (см. табл. 1 1.В лимфоидной ткани миндалйй вовсех случаях выявляли гиперплазию 40 фолликулов с активными .центрами размножения. На отдельных участках фолликулы атрофированы, замещены соединительной тканью.Кровеносные сосуды паренхимы в одних местах расширены, просвет их заполнен форменными элементами крови, в других местах просвет со.- судов сужен, стенки их утолщены, местами отмечено формирование пеоиваскулярных инфильтратов. Иммунологические изменения представлены в табл. 2. Иммунологические исследования проводились с кровью 10 кроликов, у которых хронический, тонзиллит воспроизводился предлагаемым способом, кроликов у которых воспалительный процесс в миндалинах вызван по известному способу и 6 здоровых животных, составивших контрольную группу.Использование предлагаемого способа моделирования хронического тон: зиллита у кроликов обеспечит воспроизведение патоморфологических признаков и клиническое течение (до 12 мес 1, максимал но приближенное к хроническому тонэиллиту чело; века, что особенно важно при решении актуальных научных проблем в области оторинолярингологии. Предлагаемый способ моделирования хронического тонзиллита представит возможность разработать и широко внедрить в практику здравоохранения более эффективные методы профилактики и лечения хронического тонзиллита, что имеет большое социальное зна значение.1069781 Гродолжение табл. 1 Наличие идентичных инфильтратов, разрастание соединительной ткани капсулы и трабекул, атрофиля фолликулов, в некоторых случаях замещение их соединительной тканью Единичные крупные фолликулы с активными центрами размножения, выражены явления фопустошенияф и замещения фолликулов соединительной тканью. Стенки кровеносныхсосудов склерозированы, просвет их сужен, умеренная лимфоидно-плаэмоклеточная инфильтрация Кровеносные сосуды всех калибров резко расширены, переполнены кровью. Границы между фолликулами нечеткие, в самих фолликулах выражены актив. - ные центры размножения. В межфолликулярной ткани и в зпителии - диффузная лимфоидно-плаэматическая инФильтрация 1,5 Прототип Эпителий и межфолликулярная ткань умеренно инфильтрованы лимфоцитами и плаэматическими клетками. Фолликулы обычной формы, .активные центры размножения отсутствуют. Кровеносные сосуды беэ видимых изменений То же Т б л а ица 2Иммунологические изменения при моделировании хронического тонзиллита по предлагаемому и известному способам Реакция бласттрансформации лимфоцитов РБТЛ ) Время взятия материала после инфицирования,мес Предлагаемый способ Прототип Контроль 1,5 23,4 + 4,80,173 + 0,042 23,1 + 4,8 0,11 + 0,033 67,8 + 4,30,173 + 0,053 121,5 0,162 + 0,051 0,13 + 0,025 0,292 + 0,069 0,309 + 0,027 0,105 + 0,12 12 0,085 + 0,03 ВНИИПИ Заказ 11598/7 Тираж 688 Подписное Филиал ППП фПатент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 31,0 + 2,8 32,4 + 3,9 46,3 + 1,9 0,321 + 0,056 0,297 + 0,071 О,311 + 0,830 23,8 + 6,9 34,2 + 2,1 19,7 + 6,8 21,7 + 4,2 0,24 + 1,8 29,9 + 0,6