Способ получения бактериальных амилаз

Сфюз СоветскихСецнапнстнческнхРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ п 990812(51)М. Кл. С 12 й 932 С 12 й 1/20 Гесудаустееиай кфаитет СССР аф еяаа, изи 4 Ретеиий и еткаьпяй(088.8) Опубликовано 23,01,83, Бюллетень М 3Дата опубликования описания 23,01,83 В, И, Сухаревич, Н, М. Павловец, В. И, Яковлев, Э. С. Стаи И,.И. КюдуласЛенинградский ордена Октябрьской Революции и орфвттяяТрудового Красного Знамени технологический инст тим. Ленсовета(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ АМИЛАЗ Изобретение относится к области промыш 1. ленной микробиологии, а именно к техноло-гии получения бактериального ферментногопрепарата амилосубтилина, который широкоприменяется в животноводстве, пищевой и5 легкой промышленности.Известны способы получения бактериальиых амилаз путем культивирования продуцентовна питательных средах, содержащихисточники углерода, азота, фосфора, магния,калия, натрия, кальция, микроэлементы инеобходимые факторы роста (кукурузныйэкстракт, гидролизаты дрожжей) 1.Известен также способ получения бактериальных амилаз путем глубинного культиви-, 15 рования бактерий в жидкой аэрируемой среде следующего состава, вес.%: крахмал 24,0; кукурузный экстракт. (50% с,в.) - 1,20; сухие пивные дрожжи 0,24; лактоза 0,30;магний сернокислый 0,015; калий сернокислый" 200,30; аммоний фосфорнокислый 2-х замещенный 0,84; натрий хлористый 0,03; медь сернокислая 0,00039; окись кальция 0,012; кальций углекислый 0,03; амилосубтилинГЭХ 0,165; вода до 100 мл, рН 6,2 - 6,4 (21.Недостатками известного способа являетсядлительность процесса (56 - 70 ч) и недостаточ.но полное использование источника углерода.Известно, что с увеличением концентрациипитательных веществ абсолютный выход продукта увеличивается, но степень потребления,например, углеродсодержащих веществ снижается. Увеличить выход продукта от вне.сенных питательных веществ возможно засчет оптимизации условий культивирования.Целью изобретения является увеличениевыхода целевого продукта, йовышение эффек.тивности использования утлеродсодержащегосубстрата и сокращение времени ферментацин,Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения бактериальных амилаз путем глубинного: культивирования бактерий рода Вас 1 Ьа в жидкой питатель. ной аэрируемой среде, содержащей источник углерода, азота, необходимые факторы роста,35 Одновременно с посевом вносят и0,001% феррицианид калия в виде стериль. 50 ного водяного раствора. При добавлении восстановителя ОВН среды снижается на 40 мВ по сравнению с его уровнем в контроле - в среде без восстановителя.Выращивание продуцента проводят в кол у бах с 50 мл среды на качалке при37 С. Через 48 ч культивирования опре.деляют выход фермента. 3 9908 а также минеральные соли и воду, в питатель. ную среду перед культивированием одновре. менно с посевным материалом дополнитель. но вводят неорганический восстановитель снижающий Е Ь среды, в количестве 0,001 - 0,05 вес.%, а также тем, что в качестве неорганического восстановителя используют феррицианид калил или гипосульфит натрия, или тиогликолит натрия. Добавление восстановителей в среду снижает окислительно.о восстановительный потенциал на 60 - 40 мВ,Положительный эффект наблюдается только в том случае, когда восстановитель добавляют в начале кулыивирования и не отмечаетфся при добавлении его в последующие фазы роста продуцента.В качестве продуцента а-амилаз используют промышленный продуцент Вас 1 ца яиЬт 1 ь ЯК - 52. Кулыивирование продуцента проводят в условиях аэрации на про 20 изводственной питательной среде следующего состава, %: крахмал 10 и 24; кукурузный экстракт (50% с,в.) 1,20, сухие пивные дрожжи 0,24; лактоза 0,30; магний серно- кислый 0,015; калий сернокислый 0,30;25 аммоний фосфорнокислый 2.х замещенный 0,84; натрий хлористый 0,03; медь сернокислая 0,00039; окись кальция 0,012; кальций углекислый 0,03; амилсубтилин ГЗХ 0,165; рН 6,2 - 6,4, В питательную среду перед культивированием одновременно с посевным материалом вносяг восстановитель в количестве 0,001 - 0,05%. Выращивание проводят в колбах на качалке при т = 37 С в тече. ние 48 ч на среде с 10% и 69 ч на среде, содержащей 24% крахмала.П р и м е р 1, Односуточную культуру Васцз яцЫ 1 з ЯК - 52 выращенную на картофельных столбиках, пересевают в жидкую ферментационную среду, содержащую, вес.%: крахмал 10,0; кукурузный экстракт (50% с.в,) 40 1,20; сухие пивные дрожжи 0,24; лактоза0,30; магний сернокислый 0,015; калий сернокислый 0,30; а.ммоний фосфорнокислый 2-х замещенный 0,84; натрий хлористый 0,03; медь сернокислая 0,00039; окись каль ция 0,012; кальций углекислый 0,03, амилосубтилин ГЗХ - 165; вода до 100 мл. 12 4В условиях сниженного ОВП выход ами.лаз на 27,6% выше, чем в контроле.П р и м е р 2. При выращивании тогоже продуцента Вас 1 ць зпЬ 1 я ЯК - 52 в условиях примера 1, но отличающихся тем, чтоколичество восстановителя в среде 0,01%, а ОВПсреды - на 60 мВ ниже,чем в контроле.Через 48 ч культивирования выход амилаз на 33,3% выше чем в контроле.П р и м е р 3. При выращивании бактерий Вас 11 оя зоЬт 1 з ЯК - 52 в условиях примера 1, но отличающихся тем, что крахмалвносится в среду в количестве 24%, а восстановител ь - 0,01%,Через 48 ч ферментации выход амилазна 27,8% превышает выход в контроле идостигает такого уровня, который наблюдается в контрольных условиях тольКо через69 ч культивирования, Через 69 ч ферментации выход амилаз а условиях сниженногоОВП среды превышает выход в контроль.ных условиях на 24,4%.П р и м е р 4. При культивированиибактериального продуцента амилаз Вас 11 овзиЬ 1 а ЯК - 52 в условиях примера 1 насреде с 10% крахмала, но отличающихсятем, что в среду в качестве восстановителяиспользуют гипосульфит в количестве 0,05%,Уровень ОВП ферментационной среды приэтом снижается на 55 мВ. Через 48 ч фермента.ции выход амилаэа в опытных условиях на 28,4%выше, чем в контрольных (без восстановителя).П р и м е р 5, При культивированииВас 11 оз аоЬе 1 з ЯК - 52 в условиях примера1, но отличающихся тем, что в среду вносят в качестве восстановителя тиогликолятнатрия в количестве 0,001% через 48 ч ферментации выход в опытных условиях на 22,6% вы.ше,чем в контрольных (беэ восстановителя).Результаты суммированы в таблице.Добавление восстановителя в количестве0,05 - 0,001% на 60 - 40 мВ снижает ОВПсреды и позволяет увеличить выход бактериальных амилаз на 28% через 48 ч культивирования, а через 69 ч - на 52,2%, т.е. вэтих условиях происходит более эффективное использование источника углерода,На средах с повышенным содержаниемкрахмала (24%) и с восстановителем, ужечерез 48 ч ферментации уровень амилазнойактивности культуральной жидкости такой,какой в контрольных условиях (без восстановителя) достигается только через 69 ч ферментации.Таким образом, реализация изобретенияпозволяет увеличить выход готового продукта, повысить эффективность использованияуглеродсодержащего субстрата и сократитьвремя ферментации,990812 Условия ферментации Выход фермента, % Среда с 10% крмала, время ферментации; 48 ч 28,100 Контроль 127 Опыт 0,00 2,2 127,8,0 Ьс изобретения рм ющий ского во алия икол ертизе е р . Микщевая . произлсубтили. Составитель Е. ВоробьТехред Т,Маточка Волкова Редак орректор У, Пон аз 57/3 Тираж 521 . Подписнодарственного комитета СССРизобретений и открытийЖ - 35, Раушская наб., д, 4/5 ВНИИПИ Го по делам 035 Москваилиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектна 1. Способ получения бактериальных амилаз путем глубинного культивирования бактерий рода Васав в жидкой питательной аэрируе мой среде, содержащей источники углерода, азота, необходимые факторы роста, а также минеральные соли иводу, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода готового продукта, повышения эф. фективности использования. углеродсодержащего субстрата и сокращения времени ферментации, в питательную среду перед культивированием одновременно с посевным материалом дополнительно вводят неорганическии восстановитель, снижающиив количестве 0,001 - 0,05 вес,%,2. Способ по п. 1, о т л и ч ас я тем, что в качестве неорганичстановителя используют феррицианиднли глиносульфат натрия, или тиоглнатрия,Источники информации,принятые во внимание при эксп1, Калунянц К. А. и Голгер Л.робные ферментные препараты. "Пипромышленность". 1979, с, 10 - 28.2, Промышленный регламент поводству ферментного препарата амина. Г 10 Х, ГЭХ, 25.09,79.