Способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма

оц 934534 Союз СоветскнкСоциалистическихРеспублик ОП ИСАЙКЕИЗОВРЕТЕНИЯХ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(51)М. Кл. Я 09 В 23/28 Вкударстваеый кемнтет СССР ао делан иаебретенкй к открытке(2) Авторы В,В, Зотова, Б,А, Сааков, А.И, Поляк и ЛЛ. Сизякина ОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТН СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА(54 Изобретение относится к экспериментальной медицине, преимущественно к иммунологии и патофизиологии и может найти применение дпя моделирования заболеваний, сопровождающихся недостаточностью иммунной системы с целью изучения механизмов его развития и возможных путем их коррекции,,Известен способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма путем иммунизации животногоантигеном1.Однако известный способ не позволяет приблизить модель к клиническомупроявлению вторичного иммунодефицитного состояния организма,11 епь изобретения - приближение модели к клиническому проявлению вторич- .ного иммунодефицитного состояния,Указанная цель достигается тем, чтов способе моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма,включающем иммунизацию животного антигеном, в качестве антигена испопьзуют белковую фракцию гомолимфоцитов смол, вес. 105000, и иммунизацию проводят однократным подкожным введениембелковой фракции в дозе 0,2-0,25 мл/кг5,веса животного с адъювантом,П р и м е р 1. Получение антигена,используемого для воспроизведения иммунодефицитного состояния,Лимфатические узлы стерильно забирают у 10 интактных кроликов. 20 глимфатических узлов расщепляют в 20 мвфизиологического раствора. Полученнуюклеточную взвесь фильтруют через кап.роновую ткань. Концентрация клеток составляет 2,5-310 /мл. Концентрацию8клеток доводят раствором Хенкса до110 в 100 мл среды и разливаютчв плоские флаконы по 200 мл. Флаконыпомещают в термостат при 37 С на30 мин, Затем надосадочную жидкостьсливают в другой флакон на 30 мин,Супернатант сливают из флаконов, разливают по пробиркам и центрйфугттруют при100 об/мин 7 мин. От примеси эритро3 93453 цитов освобождаются с помощью осмоти-ческого шока; к осадку клеток добавляют 1,0 дестиллированной воды и 15 с пипетируют, затем добавляют физиологический раствор и концентрацию клеток доводят до первоначальной -2,5-3 1108/мл Конечная концентрация лимфоцитов. составляет 93-95%.На следующем этапе взвесь клеток подвергают ультразвуковой обработке в 1 О течение 1,5 мин на модернизированном ультразвуковом генераторе с параметрами;частота 44 кГц, мощность преобразователя 40 Вт. Извесь центрифугируют на ультрацентрифуге 1 ч 20 мин при 15 105000 Д; Супернатант пропускают на колонке с сефадексом200, Полученную белковую фракцию с мол. вес. 105000 концентрируют на приборе "Десои" до содержания белка 3 мг/мл и используют 20 в качестве антигена.П р и м е р 2, Вторичное иммуно дефицитное состояние у мышей СВА воспроизводят с помощью гомогената, состоящего из равных частей белковой фракции 2 лямфоидного антигена (мол.вес. 105000) в смеси с полным адъювантом фрейнда в дозе 0,2/мышь, Спустя месяц мышей забивают, извлекают селезенку, расщепляют в среде Хенкса, количество клеток доводят до 30 млн. в 0,5 мл (поспе фильтрации), которые внутривенно вводят гибридам (СВА/С 57 ВВ) в дозе 0,5 мл. Спустя недешо гибридов Р, которым вводят клетки селезенки, и интактных Г 1 иммунизируют эритроцитами барана в дозе 5-10, На 4 сут определяют число бляшкообразующих клеток (БОК) в селезенке по методу СонетуМое. В случае снижения количества Т-супрессоров у под- ц, опытных мышей отмечается усиленная выработка антител (число БОК увеличивается). При введении клеток селезенки от Сравнительные данные по де систйствию препаратов на иммуннуюему 2,1 2,12 2,13 2,0 0,97 . 073 2,01,44 1,9 2,2 2,1 Стимулятор фрейнда 0,1 Стимулятор фрейндаи белковый антиген 0,2 Белковый антиген . 0,1 4 фмышей со вторичным иммунодефицитным состоянием у гибридов Г число БОК составляет 44110, что более чем в 4 раза больше, чем у контрольных мы шей - 10610 . Следовательно, у мы 6шей с иммунодефицитным состоянием сни жено число Т-супрессоров. Снижение количества Т-супрессоров, контролирующих в организме выработку аутоантител, обуславливает их увеличение.П р и м е р 3. Получение антигена для постановки серологических реакций,Аитиген получают по общепринятой методике по А. И, Николаеву, С этой целью 5 г лимфатических узлов интактных кроликов промывают в дистиллированной воде в физиологическом растворе. Затем лимфатические узлы растирают в ступке с 25 мл физиологического раствора. Потом добавляют 41,5 мг трипсина,.доводят рН среды 8,0 боратом натрия и стаО вят на 2 ч в термостат при 37 С. Периодически проверяют рН среды, Затем антиген инактивируют 30 мин при 60 С и центрифугируют 20 мин при 1 2 тыс. об/мин, Полученный супернатант используют в качестве аитигена для приготовления стойкого эритроцитарного диагностикума в нашей модификации, Диагностикум используют в реакции пассивной гемагглютинации для выявления аутоантител к,лимфоидной ткани.Для уточнения характеристики изменений, происходящих при моделировании вторичного иммунодефицитного состояния, была проведена контрольная серия экспериментов с введением одного стимулятора Фрейнда.В.таблице представлены данные по введению стимулятора фрейнда, стимулятора с белковой фракцией и одной белковой фракции на примере динамики Т-лимфоцитов.934534 6 формула изобретения Введение стимулятора Фрейнда не вьэывает угнетения иммунной системы.Введение одной белковой фракции . вызывает кратковременную иммуносупрессию,а совместное введение белкового антиге- %на со стимулятором фрейнда вызываетстойкое иммунодефицитное состояние, характеризующееся усиленной выработкойаутоантител, снижением количества Т-лимфоцитов и ооответствующей перестройкойлимфоузлов, заключающийся в редукциипаракортикальной зоны.Предлагаемый способ позволяет приблизить модель к клиническому проявлению вторичного иммунодефицитного состо- фяния и создать представления об изменениях, сопровождающих развитие вторичного иммунодефицитного состояния,Способ обеспечивает высокую воспроизводимость, надежность и длительность 20существования модели вторичного иммунодефицитного состояния,Способ моделирования вторичного иммунодефицитного состояния организма путем иммунизации животного антигеном,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью приближения модели к клиническому проявлению вторичного иммунодефицитного состояния, в качестве антигенаиспользуют белковую фракцию гомолимфоцитов с мол, вес. 105000, и иммунизацию проводят однократным подкожнымвведением белковой фракции в дозе 0,2 е0,25 мл/кг веса животного с адъюван"томеИсточники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Лисяный Н. И, Антилимфоцитарнаясыворотка. "Достижения и иммунологические проблемы"; Журнал микробиологии,эпидемиологии и иммунобиологии, 1979,Составитель С. МалютинаРедактор П, Макаревич Техред К,Мыцьо Корректор В. БутягаЗаказ 3946/48 Тираж 472 ПодписноеБНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и огкрытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент, г, Ужгород, уп. Проектная, 4