Способ определения локализации белковых зон в электрофореграмме

(51)м. Кл. 6 01 й 27(26 3 ЬеударстзвнмИ каиитвт В.ИР ве делам изабретеиий и открытий(088,8) Дата опубликования описания 07.03,82(72) Автор изобрете П. Полокайнен 71) Заявитель альной биологии Институт экспер тон(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛОКАЛИЗАЦИ В ЗЛЕКТРОФОРЕГРАММЕБЕЛКОВЬИ ЗОНИзобретение относится к химии, медицйне, а именно к электрофоретнческому разделению н вьщелению ющнвидуальных бел.ков.ВИзвестен способ определения локализациибелковых зон в пластинчатых электрофореграммах, не содержащих детергенты нлиамфолины, заключающийся В том, что, отзпектрофореграммы отрезают не менее од.ной продольной полосы, производят нх ок-.раску и удаляют из ннх непрореагировавший краситель (13.Недостатком способа является его длительность,Наиболее близким техническим решениемк изобретению является способ определениялокализации белковых зон в электрофоре/грамме путем окрашнвания ее продольнойполосы в поперечном направлении посредст.вом злектрофореза 2,В данном способе ввод красителя ускорен,однако не устрзнен недостаток, состоящийв том, что в процессе выявления белковыхзон полосы электрофореграммы разбухают иногда довольно значительно, что затрудняет сопоставление окрзшенных полос с неокра. шенной частью электрофореграммы,Цель изобретения - повышение скорости и точности определения локализации белковыхзон на электрофореграммзх.Цель достигается тем, что в известном способе определения. локализация белковых зон в электрофореграмме путем окрашивания продольной йолосы гелевого блока с электрофореграммой в поперечном направлении посредством электрофореза, на гелевую пластину с электрофорегрвммой устанавливают замкнутую по периметру раму из электроязо. ляционного материала, образующую споверх постыл гелевой пластины сосуд, разделенный продольной перегородкой на две камеры, за. ливают в одну из камер электролит, в дру. гую - , электролит с красителем и через об. разовзнную "систему" электролит с красителемгелевая пластина - электролит пропус 1 сается ток, по окончании окрзшивания проводят электроэлюцию не связанного белком красятеля, пропуская ток в обратном направления.3 91С помощью предлагаемого способа опреде.ляется локализация белковых зон на электрофореграмме в узкой полосе непосредственнов теле гелевой пластины.На фиг, 1 изображена электрофореграммас разделенными белковыми зернами, нафиг. 2 - один иэ возможных вариантовкрашения. поверхностного слоя электрофореграмы.Способ заключается в следующем,После получения электрофореграммы вгелевой пластине 1, содержащей разделенныебелковые зоны 2 (фиг, 1), устанавливаютна гелевой пластине 1, раму 3 (фиг, 2)из диэлектрического материала, разделенногоперегородкой 4 на две узких камеры 5 и6, днищем которых является поверхностьгелевой пластины 1. Продольные оси камер5 и 6 располагают по направлению миграциибелковых зон (показано стрелками), В камеры вставляют электроды 7 и 8, Дляокрашивания полосы в одну из камер, например 5, заливают фиксирующий раствор(иапример 7 - 10% водный раствор уксуснойкислоты) и на дно этой же камеры вводят.слой раствора красителя 9 (например амидощверца) в то же фиксирующем растворе,содержащей для увеличения плотности, например, сахарозу, Во вторую камеру 6 мо.жет быль залит раствор электролита (например буферный раствор, содержащийся вэлектрофореграмме) .Напряжение подают так, чтобы красительз камеры 5 внедрился под влиянием электрического поля в поверхностный слой гелевой пластины 1, пропитанной уксусной кислотой, спустя некоторое время переключают. полюса и производят электрозлюцию красителя из электрофореграммы.. В результате на поверхности гелевой пластины 1 остается узкая полоса с окрашенны.ми участками белковых зон на чистом фоне.При этом отпадает необходимость предварительной пропитки всей толщи гелевой пластины фиксирующим раствором, содержащимкраситель, достаточно слоя, который успеет пропитаться фиксирующим раствором завремя. подготовки к окрашиванию. Так какокрашенные участки белковых зон не от 1296 4делены от остальной части гелевой пластины,а также потому, что окрашивание произ.водят только в поверхностном слое, вследст.вие чего изменений размеров окрашеннойполосы по сравнению с неокрашенной частьюэлектрофореграммы за счет набухания непроисходит, достигается точное. определениелокализации, а затем и выделение отдельныхбелковых зон из неокрашенной части гелевой1 О пластины с электрофореграммой.Например, локализация гистонов на полиэкриламидной гелевой пластине предлагаемым способом на тестируемой полоске длиной 10 см и шириной 2 мм при напряже.15 нни 100 В занимает не более 60 с,Предлагаемым способом может быть определена локализация белковых зон в электрофореграммах практически любой формы,20Формула изобретенияСпособ определения локализации белковыхзон вэлектрофореграмме путем окрашивания продольной полосы гелевого блока с электрофореграммой в поперечном направлении посредством электрофореза, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения скорости и точности определения, на 30гелевую пластину с электрофореграммой устанавливают. замкнутую по периметру раму с электроизоляционного материала, образую щую с поверхностью гелевой пластины сосуд, разделенный. продольной перегоуодкой на две камеры, заливают в одну из камер электролит, в другую - электролит с красителем, и через образованную систему "электролит с красителем - гелевая пластина - электролит" пропускают ток, по окон-чании .окрашивания проводят электрозлюцию не связанного белком красителя, пропуская ток в обратном направлении.Источники информациипринятые во внимание при экспертизе 1; Маурер Г. Диск-электрофорез. М., "Мир", а 5 1971, 115 - 116, 142.2, сЬэаЬе Сп, 01 ас- Е 1 естго 1 огва Апа 1 убса 8 оспее 1 атгу. 1966, ч, 17, Нф 2, р. 201209 (прототип).911296 Состави Техред ь И. КлешнинаРейвес Корректор Ю. М актор Н. Пушненкова нко 1110/29 Тираж 883 ВНИИХИ Государственного коми по делам изобретений и откр 113035, Москва, Ж - 35, Раушская нПодписноета СССР ии 5 иал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4