Способ получения щелочной протеазы

СОюз СоиетсникСоцнапистичесникРеспубпнн Оп ИКАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22)Заявлено 18. Ой. 80 (21) 2912356/28-18 с присоединением заявки Ю(23)приоритетГоеудерстюицй квинтет СССР ие делан изобретений и вткрцтий(088, 8) Опубликовано 23 01 82 Бюллетень Рй 3 Дата опубликования описания 23. 01. 82 ЗГ,Медведев, В,Г,Халабузарь и И,П.Мирошник(72) Авторы изобретения ГЛадыжинский завод ферментных препаратов(5 Й) СП ОСОБ П ОЛУЧ ЕНИЯ ЩЕЛСИ НОЙ П РОТ ЕАЗЫ Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности, в частности к способуполучения щелочной протеазы.Известны способу получения щелочной протеазы путем выращивания еепродуцентов - бактерий из группыВас 1 1 цв зцЬГ 1 11 з или Вас 11 1 цв тпезепСег 1 сцз на питательной среде, содержащей источники углерода, азота,минеральные соли и стимуляторы био 1 Осинтеза ферментов при постоянной температуре, рН, аэрации, с последующимвыделением фермента из культуральной. жидкости, При выращивании продуцен 15тов в течение всего процесса культивирования в свободном пространствеферментера поддерживается избыточноедавление на уровне 0,3-0,5 кгс/смс целью устранения попадания посто"ронней микроопоры из внешней сре"ды И,Наиболее близким к предлагаемомупо технической сущности и достигаемо му положительному эффекту являетсяспособ получения комплекса ферментныхпрепаратов путем выращивания их продуцентов - бактерий из группы Вас 111 цз зцЫ 111 в на питательной среде,содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтезаферментов при регулируемых режимахтемпературы, рН, аэрации, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости, в котором процесскультивирования начинают при повышенной температуре, а затем снижают до37 С, азрацию осуществляют постадийно, увеличивая количество подаваемого воздуха с 0,35 до 10 мъ /м,мин,рН среды, в случае щелочной протеазы, поддерживают в интервале 6, 16,3, а концентрацию источника углерода на уровне 8-9. ВыращиваниеВас 111 цв вцЫ 111 впри указанныхрежимах позволяет получать протеолитическую активность 12009 вд/мл. по89964 20 30 3методике ФОГ (опытно-пр мышленный регламент производства гранулирован. ной щелочной протеазы, действующий на Ладыжинском заводе ферментных препаратов) 21 . Однако культивирование продуцентов щелочной протеазы по известному способу не обеспечивает оптимальных условий массообмена, сорбции кислорода и десорбции двуокиси углерода на различных стадиях выращивания,Цель изобретения - увеличение активности фермента.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу получениящелочной протеазы путем выращиванияее продуцентов - бактерий из группыВас 1 цз яцек 11 з, на питательнойсреде, содержащей источник углерода в постоянной концентрации, азота,минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемыхрежимах температуры, рН, аэрации,с последующим выделением ферментаиз культуральной жидкости, в процес.се ,культивирования дополнительнорегулируют и давление в ферментере путем поддержания его впериод интенсивного роста культуры до начала стационарной Фазыв пределах 2,0-0,8 кгс/см, вв период активного синтезаферментов снижая его до 0,50,2 кгс/см,64менения давления активность культу- ральной жидкости в конце ферментации 12000 ед/мл.П р и и е р 2. В ферментер емкостью 63 м загружают 31,5 м стерильной питательной среды, в состав которой входит крахмал, казеин, БВК, кукурузная мука, кукурузный экстракт и фосфорнокислый двузамещенный аммоний. Доводят температуру до 40 С, подают 1800 мз/ч воздуха на аэрацию, производят посев культуры Васця зцЬГьи поднимают давление в ферментередо 2,0 кг/см". В период активного роста биомассы, до начала стационарной фазы в течение первых 24 ч давление в ферментере поддерживают на уровне 2,0 кгс/см, после 24 ч давление снижают до 0,2 кгс/см, оставляя его таким до конца культивирования. Активность в конце выращивания 13500 ед/мл (по методу ФОЛП). Без постадийного изменения давления активность культу- ральной жидкости в конце ферментаиии 12000 ед/мл. Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить активность щелочной протеазы на 15- 20 РОжидаемый экономический эффект от внедрения изобретения при плановом выпуске 750 товарных тонн в год составит 1 .32 млн,руб, П р и м е р 1. В ферментер емкостью 63 мз .загружают 31,5 мз стерильной питательной среды в состав которой входит крахмал, казеин, БВК, кукурузная мука, кукурузный экстракт и Фосфорнокислый двузамещенный аммоний. Доводят температуру среды до 40 С, подают 1800 мз /ч воздуха на аэрацию, производят посев культуры Вас 1 цз вцЬГ 1 з и поднимают давление в ферментере до 1,0 кг/см. В период активного роста биомассы, до начала стационарной фазы в течение первых 24 ч давление в Ферментере поддерживают на уровне ,0 кгс/см", после 24 ч давление снижают до 0,3 кгс/см , оставляя его таким до конца культивирования, Активность в конце выращивания 14200 ед/мл (по методу ФОЛП). Без постадийного изФормула изобретения Способ получения щелочной протеазы путем выращивания ее продуцентовбактерий из группы Вас 1 ов зцЬГ 11 з на питательной среде, содержащей источник углерода в постоянной кон" центрации, азота, минеральные соли и стимуляторы биосинтеза ферментов при регулируемых режимах температуры, рН, аэрации, с последующим выделением Фермента из культуральной жидкости, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения активности Фермента, в процессе культивирования дополнительно регулируют и давление в Ферментере путем поддерживания его в период интенсивного роста культуры до начала стационарной фазы в пределах899 б 46 Составитель Е,ВоробьеваРедактор И,Николайчук Техред Ж.Кастелевич Корректор Заказ 12072/34 Тираж 504 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва Ж, Раушская наб., д,4/5 филиал ППП "Патент", г,Ужгород, ул.Проектная, 4 52,0-0,8 кгс/см, а в период активного синтезе ферментов снижая до 0;5-0,2 кгс/см Источники информации,принятые во внимание при экспертизеЬ1. Калунянц К.А Голгер Л.И,Производство Ферментных препаратовиз грибов и бактерий. М., 1970,2. Авторское свидетельство СССР5 й 4395 11, кл. С 12 О 13/10, 1975