826228

Союз СоветскнкСоцнвлмстмческннРеслублнк ОП ИСАНИЕ и 82 62 К АВТОРСКО ВИДЕТЕДЬСТВУ 61) Дополнительное к ввт. свил-ву 22) Заявлено 06.08,79 (2 ) 281(53.)М. Кд, С. 01 Н 3310 Ч А 23 С 9/00 присоединением заявки Государственный комнте СССР ло делам нзобретеннй н открытнйЛ, А. Еремина, Л. Н. Семенова Ю. Кислицына 2) Авторы изобретен сесоюзный научно-исследовательский ин молочной промышленности аявите(54) СП ОПРЕДЕЛЕНИЯ АФЛАТОКСИНА ВВ МОЛОКЕ ускорени ния а ла прона ель изобретени Изобретение относится к молочной промышленности и может быть использовано для определения вфлатоксина В в молоке.Известен способ определения афлатоксина в молоке, предусматривающий подготовку исследуемого объекта с получе 5 нием хлороформенного раствора афлатоксина и тонкослойно-хроматогрвфическое определение его путем нанесения на хроматографическую пластинку, разгонки хромата тогрвммы в смеси растворителей и проявления хрома тограммы 11.При этом подготовку пробы ведут путем приливания метанола, добавления целита, фильтрации, экстрвкции жира гекса 15 ном, экстракции афлатоксинов В хлороформом, очистки экстракта. Тонкослойнохроматографическое определение афлатоксинов ведут путем нанесения раствора на пластинку, покрытую силикагелом, Разгонку хроматогрвмм проводят в бензоле, насыщенном формамидом, а проявление хрсьматограмм - в лучах ультрафиолетового света. шение способа определе ф токси Вв молоке.Поставленная цель достигается тем, что в способе определения афлатоксина В в молоке, предусматривающем отделение из исследуемой пробы жировой фракции и белка, получение хлороформенного раствора вфлатоксина В , его концентритроввние, растворение сухого остатка в хлороформе, нанесение полученного хлороформенного раствора на хроматографичес-, кую пластинку, разгонку хроматограммы в подвижном растворителе, ее проявление ипоследующее определение афлатоксинв путем сравнения проявленной хроматограм мы с эталоном по интенсивности свечения при подготовке объекта, отделение жировой фракции от исследуемого объекта осуществляют центрифугированием молока, осаждением белков молока проводят вце;тоном, в при тонкослойно-хроматографическолю определении афлвтоксина ЯЧ для нанесения его хлороформенного раствора ис4Продолжение табл ицы То же 25 е изи белКонтроп молока е обнаруже а форме,огостино Обнаружен 3 826пользую" силуфоловую пластину и разгонку хроматограммы ведут в смеси растворитепей бензол-хлороформ-ацетон, взятых в соотношении 45:40:15.Способ осуществляется следующим об 5В центрифужные стаканчики помешают25-30 мп молока и центрифугируют 1530 мин при скорости врашения 3000 об/мин.Отдеп; в жировую фазу, отбрасывают ее,а обезжиренное мопоко помещают в депительную воронку со щпифом, приливают100 мл ацетона, встряхивают 1-2 мин,добавляют 1-2 г хлористого натрия, полученную смесь встряхивают 1-2 мин, 15припивьют 100 мл хлороформа и вновьвстряхивают содержимое воронки 1-2 мин,После раздепения .слоев хлороформенныйслой отфильтровывают через бумажныйфильтр в круглодонную копбу емкостью 20250-300 мл со шлифом, Фильтрат упаривают на ротационном испарителе при 8085 С. Сухой остаток в колбе растворяютв 4 мл хпороформа, Аликвоту из этогораствора наносят на хроматографическуюсилуфоловую пластинку, помешают ее в камеру для хроматографирования и раз.гоняют в подвижном растворителе бензол-хлороформ-ацетон в соотношении 45::40:151. 30После рьзгонки хроматограмму подсушивают на воздухе при комнатной температуре и проявпяют в пучах уньтрафиолетового света,При содержании афлатоксина В в могпоке не ниже 4 мкг/и он проявляется ввиде светящихся пятен фиолетового цветаот 0,32 до. 0,35.При апробации способа в качестве контроля исееользуют обычно сырое цельное 4 Омоцоко, а в качестве исследуемой пробымопоко, загрязненное стандартным раствором афпатоксина В .Полученные результаты приведены втаблице.45 Таким образом, контрольные пробы молока и пробы с концентрацией 2 мкг/л не дали на силуфоловых пластинках светящихся пятен фиолетового цвета, яркость свечения которых возрастает с увеличением концентрации афлатоксина.П р и м е р. В центрифужные стаканчики помешают 30 мл молока с содержанием афлатоксина В 5 мкг/л и центрифугируют 30 мин при скорости вращения 3000 об/мин. Жировую фазу отделяют, а обезжиренное молоко помешают в делитепьную воронку, приливают 100 мл ацетона, встряхивают 1-2 мин, добавляют хлористый натрий, полученную смесь встряхивают, приливают 100 мл хлороформа и вновь встряхивают содержимое воронки. После раздепения слоев хпороформенный слой отфильтровывают в кругло- донную колбу, фильтрат упаривают при 80 С. Сухой остаток растворяют в хлороформе, Аликвоту из полученного раствора наносят на хроматографическую пластинку, помешают в камеру для хроматографирования и разгоняют в подвижном растворителе ( бензол-хлороформ-ацетон в соотношении 45:40:15). После разгонки хроматограмму подсушивают и проявпяют в лучах упьтрафиолетового света. На пластине обнаруживают светящееся пятнофиолетового цвета, яркость свечения которого соответствует яркости свечения пятна из стандартного раствора с концентрацией афлатоксина В, равной 5 мкг/и.Таким образом, достигается ускорение и упрощение способа определения афпатоксина В в молоке при обеспечении точности. о рму па из обре тен Способ определения афлатоксина мопоке, предусматривающий отделен исследуемой пробы жировой фракции ка, получение хлороформенного раст афлатоксина. В 1, его концентрирован растворение сухого остатка в хпоро нанесение полученного хлороформенн раствора на хроматографическую пп5826228 4ку, разгонку хроматограммы в подвижном афлатоксина В 1 используют силуфоповуюрастворителе, ее проявление и последую- пластинку, разгонку хроматограммы вещее определение афпатоксина путем срав- дут в смеси растворителей бензол-хлорьнения проявленной хроматограммы с эта- формацетон, взятых в соотношении 45:лоном по интенсивности свечения, о т -:40:15,л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью Источники информации,ускорения и упрощения проведения процес- принятые во внимание при экспертизеса определения. целевого продукта, отделе 1, ЗаСОЬЕоо а,С, Нси вЕЯг Ф.С.ЭЕние жировой фракции от исследуемого обь-.фОфоп фекта осуществляют центрифугированием, а ИгйюОЫОП ОХ Ж сй М,ЕгвювОоП ОХ цИсйозбт Ь мод М юобелка - осаждением ацетоном, при этом ффЮК-У.Ж ЗХИгЗ 8 СИпс 0,49 И, .54;МЛ,для нанесения хлороформенного раствора Р. 21-24.Составитель, Л. Семенова Редактор Е. Днчинская Техред Л,Пекарь Корректор Я. немчик Заказ 2512/67 Тираж 907 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета, СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП Патент, г. Ужгородуп. Проектная, 4