Способ диагностики сальмонеллезной инфекции

: п г(. О П И С А Н ЙЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Ссиоэ Советскик Социелистичесиив Республик(1786994 К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЮЛЬСТВУ 161) Доттолиительиое к авт. свид-ву(51)м Кл Э А 61 В 10/00 Гоеударствеый комитет СССР ио делам изобретей и открытий(23) Г 3 рмери ци Олублииоеею 112,80.бюллетень йо 46Дата оттублияованюе оттисаиия 15,1 280(У 2) Авторы изобретения Л,К.СтепаноВа, В.А.Белая, К.ГБунин и Л.Г. Токаренко Научно-исследовательский ордена 1 рудового Красного Знамениинститут эпидемиологии и микробиологии им. почетногоакадемика Н.Ф.Гамалеи и 1-ый Московский ордена Ленинан ордена Трудового Красного Знамени медицинский институтим. И.И.Сеченова(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИЪИзобретение относится к медицине, а именно клинической иммунологии.Известен способ диагностики саль- монеллезной инфекции путем определения наличия специфических антител в сыворотке крови 1.Однако этот способ недостаточно специфичен н не позволяет быстро диагностировать сальмонеллезную инфекцию,так как длительность реакции 18 ч.Цель изобретения - повышение специфичности и ускорение диагностики.Цель достигается тем, что в сыворотке крови определяют К-сальмонел.лезные антитела добавлением К О-штам 5 ма 9 30 Яа 1 топе 11 а 1 урМпяг 1 цв и люминесцентной сыворотки против 19 человека и по интенсивности свечения клеток К О-штамма В 30 диагносцируют сальмонеллез.К О-штамм М 30 Яа 1 щопе 11 а 1 урЬ 1- пяг 1 шп получен из полноценной по ан"+тнгенному составу К+О-культуры Б. 1 урЬ 1 юцг 1 ов путем селекции под контролем просмотра популяции в косопадающем пучке света с последующим изучением антигенной структуры. Штамм депонирован в коллекции ИЭМ.им. Н.Ф.Гамалеи АМН СССР. Это грамотрицательная, неспороносная палочка, активно под- ЗО виаиая, не образует пигмента, аэроб, растет на обычных питательных средах. Оптимум роста 37 С. На мясопептонном бульоне образует равномерную муть, иа мясопептонном агаре дает гладкие 8-форивюколонии нормальных размеров, на среде Плоскирева растет в виде бесцветных прозрачных колоний.Штамм не разлагает лактозу, сахарозу, быстро ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, мальтозу, рамноэу, сорбит, восстанавливает нитриты до нитратов, образует сероводород.При просмотре популяции в косопадающем пучке света, в отличие от зеленых с коричневой исчерченностью коло+ Еф 4 а ний исходного к О-штамма К О-культура дает колонии красно-серого свечения. Штамм характеризуется наличием ярко выракенного поверхностного К антигена и нарушенным синтезом О антигена. Его агглютинабельность в отношении К антисыворотки составляет 1:640. С ф антисывороткой он реагиру" ет только до титров 1:20-1:40. В иммуноэлектрофорезе установлены перекрестные реакции К О-штамма 9 30 с антисыворотками к сальмонеллам различных вариантов, имеющих К антиген,786994 П р и м е, р. Больной М. находитсяв стационаре с диагнозом Пищевая токснкоинФекция,Реакцию проводят следующим образой,На предметное стекло наносят пастеровской пипеткой покапель суточной 3агаровой суспенэии К О -штамма Р 30 вФосФатном буФере рН 7,2, содержащей2 х 10 ф клеток, из которых приготавливают 5 мазков. После подсушивания навоздухе при комнатной температуре маз"Щки Фиксируют в течение 5 мин. в метиловом спирте. Параллельно готовятсерийные двукратные разведения испытуемой сыворотки, начиная с 12. Намазки наносят по 1-ой капле различных разведений сыворотки и выдерживают при комнатной температуре 45 минфМазки отмывают трижды по 5 мин,ФосФатным буФером и подсушивают на возду-.хе, На препараты наносят по 1-ой каплелюмийесцирующей крояичьей сыворотки Зпротив глобулииов человека в рабочемразведении 1:8 и окрашивают при комнатной температуре в течении 30 мин,,После трехкратного промывания по5 мин, буФерным раствором и высушива 3ния на воздухе препараты заключают вбуФерный глицерин (1 ч . ФосФатного буФера рН 7,2+9 ч, глицерина) и исседувт в лвминесцентном микроскопе ИЛ при увеличении 7 х 90, 36Положительную реакцию оцениваютпо интенсивности свечения, За титр Я.рага 1 урМ ВЯ.ЕурМацг 1 цвЯ,Ьа 1 йа 1 г 1281 вб 4-1128 1 й 2560 11280 1 г 1280 1:64 1;128 Я.ч 1 гспочВ,пеюрог 1:40 1 ф 32 0"11320 1 г 1280 1 ф 32-1:64 1:128Отрицательная реакция с нераэведенной сывороткой. альную серологическую диагностику Я сальмонеллеэов от других острых кишечных заболеваний иной этиологии,сходных по клинической картине.Формула иэобретенияСпособ диагностики сальмонеллезной инФекции путем определения налиПредлагаемый способ выявления анинтел к поверхностному К антигену сальмонелл в сыворотках больных с помощью селекцнонированного К О тест- штамма позволяет быстро в течение ЗК ндентиФицировать сальмонеллезнув инфекцию,атакже проводить дифФеренциК антител принимают то максимальноеразведение испытуемой сыворотки, прикотором отмечаетя специФическоесвечение клеток К О-щтамма В 30 на .Контролями в опытах служат1.,антиген (штамм 930) +ФосФатныйбуФер+лвминесцирующая сыворотка.2. Антиген (штамм 9 30) уразличныеразведения нормальной сыворотки+лвмниесцирующая сыворотка,Э, Антиген (штамм В 30) +люминесцирующая сыворотка.4. Антиген (штамм В,91 аздо - К Овариант 8,1 урй 1 вцг 1 щвФиспытуемая сыворотка+люминесцирувщая сыворотка,Испытание сыворотки больного И. стоксикоинФекцией, вызванной Я,ч 1 гсЬоч,при нспольэованин К) тест-штаммаВ.Вур).1 вцг 1 шр в качестве антигенав непрямом методе люминесценции позволяет в течение 3 ч. выявить антитела к поверхностному К антигену сальмонелл в высоких титрах - 1:128.Изучены сыворотки больных сальмонеллезньвюи заболеваниями, обусловленными,другими сероларамн сальмонелл, а также сыворотки дизентерийных больных идоноров. Результаты опытов по изучению сывороток сальмонеллеэных больных представлены в таблице. Исследования показали высокую специФичность н чувствительность способа.,;оставитель.С.маюцотинаТехред М. Петко; Корректор Ю,Макаренко Редактор Т.Веселова Заказ 8397/75 тиран 673 Подписное цНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж,Рауюская наб.,д.4/5филиал ППП Патент, г.уигород, ул.Проектная,4 чия специфических антител в сыворотке крови, о т л н ч а ю щ н й с я тем,что, с целью повьыення специфичностии ускорения диагностики, в сивороткекрови определяют К-сальмонеллезныеантитела добавлением К О-штамма В 30Яа 1 вопе 11 а 1 урЫшцг 1 цв и аоминесцеитной сыворотки против 1 человека и по интенсивности свечения клеток КфУштамма В 30 диагиосцируют сальмоненеллеэ. Источники информации,принятые во внимание при зкспертизе1. Руководство по иммунологии.Под ред. О.В .Вязова Ш.Х.Ходиаева.И., 1973с.221-227.