Способ определения фагоцитарнобактерицидной активности лейкоцитов

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДИЕЛЬСТВУ Совэ Советских Социалистических Республик(я)М, Кл,2 А 61 В 10/00 6 01 Б 1/28 с присоединением заявки Мо Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(23) Приоритет Опубликовано 150 1,80, Бюллетень М 2 Дата опубликования описания 150180Кубанский государственный медицинский институт им. Красной Армии(71) Заявитель 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ фАГОЦИТАРНО-БАКТЕРИЦИДНО АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ ци ния являет увстнитель упроце ти спо Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения Функционального состояния нейтрофилов, а также диагностики патологических состояний в клинико-лабораторных условиях..Известен способ определения Фагоцитарно-бактерицидной активности лей-о коцитон в препарате крови с последуюцим внесением в него микробной взвеси, окрашиванием, микроскопированием и определением Фагоцитарной активности по времени и количеству 15 микробных клеток, поглощенных нейтроФилами,.и бактерицидной активности по соотношению убитых ко всем поглоценным бактериям 1). Однако известный способ недостаточио объективен и 2 О чувствителен, потому что исследуются только активные. лейкоциты, обладающие достаточной адгезивностью к но- кровному стеклу, другая большая часть лейкоцитов также характеризующая25 защитные способности организмов, не прилипает к.стеклу из-за большой адгезивности к Фибриновым волокнам в процессе образования сгустка, что создает условия недостоверной оценки ЗО Фагоцитарно-бактерицидной Фнейтрофилов.Целью изобретение и повышение ч соба.Это достигается тем, что по предлагаемому способу исследонанию подвергают мазок крови, взятой из пальца, препарат высушивают, наносят на него взвесь бактерий в растворе, содержащем декстран и зеленый прочный ГСР, далее после скрашивания препарат инкубируют и охлаждают перед микро.скопированием.Способ осуществляют следующим образом. На трех предметных стеклах иэ равных сбъемон крови, взятой из пальца, делают мазки. Их высушивают при комнатной температуре в течение 3 мин накладывают на каждый специально силиконированное покровное стекло с каплей 0,001 мл взвеси бактерий (в отношении 20:1 к нейтрофилу) н определенной смеси растворов, Полученный препарат герметизируют быстросохнуцим лаком по краям покронного стекла, термостатируют при 37 С н течение 7-21-60 мин и через указанное время, предварительно охладив в течение минуты при 4 С для стабилизации про709063 ЗдоровыеМ 2 Больные Показатель 38, 9+О, 82 32 р 4+О р 79 40, 4+О, 88 34, 1+0,74 Фагоцитарный Фагоцитарноечисло 1, 95+0, 16 2, 16+0, 13 3,23+0,21 3,27+0,19 Индекс завершенности фагоцитоза 69,2 4+2, 37 74, 14.",2, 88 44, 36+1, 85 58, 74+2, 12 цесса фагоцитоза, исследуют под иммерсией в поле зрения светового микроскопа, где отчетливо видны гранулоциты, содержащиеся в.них живые бактерии розового цвета и убитые бактерии темно-зеленого цвета. Этот эФФект изучен при действии катионного белка гранулоцитов в растворах, содержащих (50-100)- (500-1000) мг/мл на 106-10 бактерий Е.коли, и последующем посеве и подсчете колоний на чашках Петри. Таким об-. разом, в предлагаемом способе представ 3 ляется возможным простым приемом по цвету бактерий через определенное Фиксиронанное время определять фагоцитарно-бактерицидную функцию нейтроФилов.15В условиях санаторного комплекса пионерских лагерей были изучены:фагоПолученные данные указывают на то, 35что фагоцитарнкй показатель и Фагоцитарное число детей, больных бронхиальной астмой, достоверно отличаются ( Р0,05) в начале и послепроведенного лечения от этих показателей здоровых детей, при этом самое 4 Обольшое отличие в индексах завершенности фагоцитоза Р0,001. В результате проведенного санаторно-курортного лечения бактерицидная функ"ция ьейтроФилон детей, .больных бронхи алькой астмой, повысилась (РО, 02),но осталась ниже показателя здоровыхдетей Р0,01, что указывает на достаточную информативность предлагаемо"го способа при изучении даже одного 5 Опериода инкубации. В процессе пронеркичувствительности метода применяли раз-.ные бактерии и штаммы: Е.коли " К 12 Я,Е.коли М, Яаагеця. Прп этом отмечаласьравнозначность получаемых результатов.55Предлагаемый способ высоко специфичен с незначительной интерференциейвеществ,применяемых в растворах с бактериальной взвесью. При определениивоспроизводимости в группе здоровыхдетей предел чувствительности не превышал величины двух среднеквадратичных отклонений,Коэффициент вариации, отражающийвоспроизводимость способа, определенный для группы здоровых и больных 65 цитарно-бактерицидные свойства нейтрофилов в двух группах детей одного возраста 9-10 лет,после предварительного клиника-лабораторного обследования, Первую группу составили дети, больные бронхиальной астмой инфекционно-аллергической формы средней тяжести в стадии ремиссии, вторую группу - практически здоровые, которая служила контролем. Исследование проводилось дважды: перед и после проведенного санаторно-курортного лечения.В таблице приводятся данные, полученные и обработанные статистически для 21 минуты инкубации. Испольэовали Е, коли - К 12: Р 1 в начале адаптационного периода до начала лечения, Р 2 - данные в конце заезда после санаторно-курортного лечения. М Мдетей (при п=14) оказался равным Ч=4,1 и 3,6 Ъ соответственно. Коэффициент корреляции рангов Спирмена, характеризующий степень статистичес-. кой связи, оказался равным Р=0,95, что указывает на правильность результатов, получаемых заявленным способом,Применение предлагаемого способа и санаторно-курортных условиях подтверждает диагностическую ценность получаемых результатов, отражающих неспецифическую реактивность организма, способ прост и в выполнении, а также более информативен. Получаемые результаты отражают изменение Фагоцитарно-бактерицидной Функции нейтрофилов под воздействием различных факторов. Наличие простого для технического исполнения и достаточно информативного способа познолит как с диагностической,. так и с прогностической целью шире проводить анализы во всех лечебно-профилактических учреждениях, имеющих обычные лаборатории как стационарного, так и портативного типа при наличии обычнога светового микроскопа, при этом затратавремени лаборантом на выполнение анализа сокращается на 70 в сравнении с выполнением его известным способом, требующим к тому же сложного оборудования.709063 Формула изобретения Составитель С. МалютинаРедактор Л,Новожилова Техред Н.Ковалева Корректор Е,Папп Заказ 10041/5 Тираж 673 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5филиал ППП Патентф, г,ужгород, ул.Проектная,4 Применение предлагаемого способа позволит получать диагностически ценные результаты при повышенной произ- водительности труда лаборантов беэ увеличения дополнительных штатов. Способ определения фагоцитарнобактерицидной активности лейкоцитов в препарате крови с последующим внесением в него микробной взвеси, окрашиванием, микроскопированием и определением фагоцитарной активности по времени и количеству микробных клеток, поглощенных нейтрофилами, и бактерицидной активности по соотношению убитых ко всем поглощенным бактериям,отличающийсятем, что, сцелью упрощения и повышения чувствительности способа, исследованию подвергают мазок крови, взятой из пальца, препарат высушивают, наносят на.него взвесь бактерий э растворе,содержащем декстран и зеленый РСР,далее после скрашивания препарат инкубируют и охлаждают .перед микроскопиров ание м. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1.т, оХ 1 пюгеп э 1 еЫ 1 ос 1 э ф 1977, со 1 17, Р 3-4, р.241-247,