Способ определения способности микроорганизмов использовать различные углеводные субстраты

(23) Приоритет но делам изобретений н втхрцтнйОпубликовано 05,01,80, Бюллетень,% 1 Дата опубликования описания 09.01.80(54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПОСОБНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ ИСПОЛЬЗОВАТЬ РАЗЛИЧНЫЕ УГЛЕВОДНЫЕ СУБСТРАТЫ11 редложенное изобретение относится к микробиологии и предназначено для быстрого и экономичного определения ферментативных свойств микроорганизмов.Известны способы определения фермен 5 тативных свойств микробов, в частности, их способности усваивать те или иные углеводы, предусматривающие использование питательных сред с испытуемыми углевоцными субстратами и кислотно-основной индикатор 1 1. Общим недостатком конкретных методических приемов, используемых при реализации указанных способов, является их недостаточная экономичность, так как они относительно сложны и применяются с. использованием питательных сред, а также характеризуются сравнительно низкой скоростью определения ферментативных свойств микробов (через 18-24 час).Наиболее близким по своей технической сущности к предложенному являегся способ идентификации микроорганизмов,который предусматривает использование бумажного диска диаметром чашки Петри из пропитывающей бумаги, который разделен на 6-8 зон. В каждую зону наносят каплю субстрата.и индикатора, а затем быстро высушивают 21.Бу.мажный диск с зонами, пропитанными различными субстратами и индикатором, кладут на поверхность агаровой пластинки, засеянной микробной культурой в чашке Петри и инкубируют 24 час при 37 С.Способ идентификации микроорганизмов основан на том, что субстрат и индикатор из импрегнированных зон .диффундируют в питательной среде с засеянной микробной культурой, Учет результатов ферментации су.бстратов производят по изменению цвета индикатора в этих зонах.Однако описываемый способ недостаточно экономичен и не позволяет быстро определить ферментативные свойства микробов непосредственно в популяции микробных клеток без использования питатель3 707963 ных сред и стерильных материалов, при- р чем спектр определяемых биохимических ( признаков ограничен 6-8.иЦелью изобретения является повышес ние экономичности и быстроты определе 5 ния. Поставленная цель достигается тем, что на поверхность бумажного диска наносят гидрофобное покрытие, а субстраты и индикатор размещают в виде точек в количестве 2036 с последующей их фиксацией водорастворимым,клеем, предпочтительно поливиниловым спиртом. При этом для придания бумажному чиску гидрофобных свойств применяют силиконовую жидкость или используют бумагу с полимерной пленкой.Гидрофобное покрытие позволяет использовать микроколичества субстрата и индикатора фиксированными в виде точки клеюшим полимером на поверхности диска. Тем самым увеличивается количество ис-: пытуемых субстратов, снижается расход ингредиентов, поскольку исключается возможность пропитывания и. диффузии субстрата и индикатора в бумагу и увеличиваетсяскорость разложения микроколи-честв субстрата микробными культурами,. взятыми в высокой концентрации.На чертеже изображен бумажный диск 1 с гидрофобным покрытием, разделенный на квадратные зоны 2, в которых фиксирован субстратно-индикаторно-клеюший раствор 3, где Ар-.арабиноза; Га- галактоза; Гл-глюкоза; Дк-декстроза; Кс-ксидоза; Мн-манноза; Рм-рамнозв; Рб-рибоза; фр-фруктоза; Лк-лактоза,Мл-мальтоза;. Сх-сахароза; Рф-рафиноза; Кр-крахмал; Гт-глицерит; Дт-дульцит; Ит-инозит; Кт-ксилит; Мт-маннит; Ст-сорбит .Для определения ферментативных свойств микробов, готовят бумажный диск с гидрофобным покрытием 1, диаметром чашки Петри, приготовленный из листа бумаги, напримерватман, который силиконируют, например, жидкостью ГКЖ, или из бумаги, покрытой полимерной пленкой (материал, комбинированный для упаковки молока и молочных продуктов в пакеты тетраэдальной формы. ОСТ 49- 112-76). На гидрофобной поверхности диска 1 наносят 20-36 квадратных зон 2 плошадью 1,5 х 1,5 или 1,0 х 1,0 см. К центру каждой зоны фиксированы в виде точек субстрат и индикатор, которые приклеены водорастворимым клеем.П р и м е р . Из листа бумаги ват ман вырезают диск диаметром 9-10 см,4асчерчивают 20-36 квадратных зонплошадью 1,5 х 1,5 см или 1,0 х 1,0 см)обозначают сокрашенно название субтрата. Затем волосяной кисточкой наносят слой силиконируюшей жидкостиГКЖи подвергают диски термообработке в сушильном шкафу при 90-100 Св течение 3-5 час,В фарфоровую ступку берут навеску1 О порошков субстрата (например, моно-,ди-, три-, полисахариды и многоатомныеспирты) - 1 г, фенолрота - 0,0 1 г,поливинилового спирта - 1 г и растворяютдо получения мелкодисперсной пудры красного цвета, которую растворяют в 99 млфосфатного буферного раствора рН 8,0на водяной бане при 70-100 С и получают субстратно-индикаторно-клеюший раствор,Затем в центр каждой зоны пипеткойс тонко оттянутым. капилляром наносятпо 0,01 мл. субстратно-индикаторно-клеюшего раствора, подсушивают при 15-45 Сдо полного высыхания и приклеиваниямикр окапель.Готовый диск хранят при 15-25 С вполиэтиленовых мешочках, помешенных вкартонные коробки, в течение 1 года(срок наблюдения).По мере надобности их используютдля определения ферментативных свойствмикробов. С этой целью в крышку чашки Петри укладывают готовый диск.ззНа каждый специфический субстрат нанс- сят пипеткой по одной капле микробнойвзвеси концентрацией 5-10 млрд в 1 млфизраствора, Чашку закрывают; тем самьвприжимая по окружности диск и иякубио4 О руют при 37 С. Учет результатов производят через каждые 30 мин до 5-7 час.При расшеплении субстрата микробнойкультурой окраска капли переходит изкрасного цвета в желтый. Формула изобретения 1. Способ определения способностиФ Я микроорганизмов использовать различные углеводные субстраты, предусматривающий размещение на бумажном дискесубстратов и индикатора, о т л и ч а ивш и й с я тем, что с целью повышения точ. ности упрощения и быстроты бпределейия,на поверхность бумажного диска наносятгидрофобное покрытие, а различные субстраты и индикатор разме 1 цают в виде20-36 точек с последуюшим фиксироваСоставитель Н. ПаниковРедактор И, Марховская Техред И. Асталощ Корректор В. Синицкая аз 8436/23 Тираж ЦНИИПИ Государственного ко по делам изобретений и о 113035, Москва Ж, Р) де 4 илиал ППП Патент, г. Ужгор Проектная,5 707963 6нием их водорастворимым клеем - поли- Источники информацииУв н овым спиртом.виниловым спи том. принятые во внимание при экспертизе2, Способ по и, 1, о т л и ч а ю -1. Патент СШЛ М 3830703,щ и й с я тем, что в качестве гидрофоб- кл. 195/103.5 К, опублик., 1974.ного покрытия используют силиконирукицую Б 2, Патент США Ъ 3856628,жидкость или бумагу с полимерной плен- кл, 195/103.5 К, опублик., 1974Кой. (прототип).