Способ получения пектиназы

Союз Советских Социалистических Республик(51)М. Кл. с присоединением заявки Мо(23) Приоритет -С 12 В 13/10 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий(72) Авторы Р.К.Блиева, Б.Д,Абиюров, К.А,Бекбосынэва и Б,Ж.Джиембаев изобретения Институт микробиологии и вирусологии АН Казахской ССР(71) Заявители и Ордена Трудового Красного Знамени институт химическихнаук АН Казахской ССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕКТИНАЗЫ 2 1Изобретение относится к областипроизводства ферментов, а именно кактивации биосинтеэа пектиназы,Известные способы получения фер ментов преследуют цель оптимизации питательной среды для их продуцентов и предусматривают культивирование продуцирующих плесневых грибов рода Аврегп 111 цв на питательной сре де, содержащей источники углерода, азота, .минеральные соли и стимулятбры биосинтеэа ферментов, с последующим выделением ферментовНа этих средах образуется комплекс пектоли тических Ферментов - пектинэстераза, эндополигалактураноэа и экэополигалактуроназа, отличающиеся как по субстратной специфичности, так и по механизму действия 1, 20 Известные способы не обспечивают максимальный биосинтез пектиназы плесневыми грибами рода Азрегд 111 цв. Б настоящее время не известны препараты, которые бы использовались какактиваторы в производстве пектинаэы - очень важного фермента, широко применяемого в практике меховой, соковой и винодельческой промышленности. 30,ю Целью изобретения является интенсификация процесса образования пектинаэы и повышение ее активности.Поставленная цель достигается тем,что к оптимальной питательной средеперед посевом культуры гриба в среду вводят активатор биосинтеэа Фер-мента, в качестве которого используют2,2-диметил-фосфонтетрагидропиранолили 1, 2, 5-триметил-диметилфосфонпиперидолв количестве 0,0005мг/л питательной среды.Соединение 2,2-диметил-фосфонтетрагидропираноли 1, , 5-триметил-диметилфосфонпиперидолприменяются как стимуляторы роста растений. На микроорганизмы они действуют как ингибиторы роста при концентрациях 0,01-0,005 мг/л.При уменьшении концентрации испытанных веществ до 0,0005 мг/лпроисходит увеличение биосинтеза ферментов пектинаэы плесневыми грибамирода Аэрекд 111 цв,П Р и м е р 1, Глубинную культуруАэрекд 111 цэп 1 дег,выращивают на органо-минеральной среде следующегосостава (г/л): пектнн, лактоза,6 Эб 051 Количество активат в питательную сред вв едег О/контрольный .опыт/ 178 0,0005 74,00 19 Таб ц а Контрольна 2100 (на 3сутки)15000(на 1 196 153 а бе добавления активатора т бавле 2 г 2-диметил- -фосфонтетра 2950(н сутки) 7100 8 0 ропиранола 24700(на 15сутки)Из та2,2-диме нолав к увелич л. 2 видно, ил-фосфон питательную нию биосинт дуцирующей спо к,увеличению пр ности гриба. Пример Аерегд 111 цв п 1 дчто добавл етрагидроп среду прив эа фермент иеаити Глуби П выр ую культурвают на С целью активации биосинтеза пек"тиназы в глубинных условиях плесне"вйм грибом Аврегд 111 цв п 1 дег перед йосевом культуры в питательную среду указанного выше состава вводят 2,2- -диметил-.фосфонтетрагидропиранол- -4 в дозах 0,0005 мг/л и 0,001 мг/л. Как следуетиз результатов испытаний, введение небольшого количества (0,0005 мг/л) 2,2-диметил- -фосфонтетрагидропиранолав пита-, тельную среду в 1,5 раза увеличивает образование пектиназыП р и м е р 2. Промышленный штамм Азрещ 111 цв аыапюг 1 культивируют двумя способами: периодически,им и полунепрерывным. В питательную среду По истечении трех суток в фильтра- е культуральной жидкости определяют активностьпектиназы Си пектатньм ме тодом. Результаты исптыаний представленыв табл. 1 .Т а б л и ц а 1 следующего состава (г/л): (ИН+)д 804- 7; МЯО.- 0,5; КС 1 - 0,5; КН РО, - 1, ГеБО,001; лактоза - 20; йектин 20 перед посевом вводят 0,0005 мг/л 25 2,2-диметил-фосфонтетрагидропира.нола.Данные о биосинтезепектиназыАярегд 11 цз аюашог 1 с использованием 2,2-диметил-фосфонтетрагидропирано лапредставлены в табл. 2.696051 органо-минеральной среде следующего состава (г/л): лактоза " 20; пектин 20; (ИН) НРО 4 - 7; КНРО - 1; КС 1 О, 5МЯО 4- О, 5 у РеЯО - ,001,С целью активации биосинтеза пектиназы в глубинных условиях плесневым грибом Азрегд 111 цв п 1 дег П перед посевом культуры в питательную среду указанного выше состава вводят0(контрольный опыт 78,0005 0,001 2270 из резул ебольшог 2, 5-трим долав аувелич -важного ого в пр ных и пли мех в сел еннойтакжека в о изобретен форм точники и о внимани обы - про вных веще 23,принятые1,фМикчески акт1971, с. Способ получения пектинаэатривающий культивированиеующих ее микроорганизмов ро предус 4 ОАврегель И. Пр .Келемеш остав ехред Редактор язнов Заказ 6704/27Б Подписноететат СССРОТКРЫТИЙя наб., д, 4/5 526твенного комизобретений иЖ, Раушск ТирРосудпо делам35, Москв 13 лиал ППППатент, г, Ужгород, ул. Пооектная. Как следуетний, введение н(0,0005 мг) 1,тилфосфонпиперисреду в 1,5 развание пектиназыроко используемсоков, виноградвин, в кожевленности, аве как добав ьтатов испыта о количества етил-диме- питательную ивает обраэофермента, ши- р оиэводствеодовоягодных свой промышьском хозяйсти комбикорма. 1,2, 5-триметил-диметилфосфонпиперидолв дозах 0,0005 мг и 0,001 мг/л,По истечении трех суток в фильтрате культуральной жидкости определяютактивность пектиназы Си пектатным 5 методом. Результаты сиспытаний представленыв табл, 3. Таблнца 3 д 111 цв на питательной среде, содержаей источники углерода, азота и мнеральные соли, с последующим выделением фермента, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью интенсификации процесса образования пектина-.эы и повышения ее активности, перед:культивированием в питательную средувводят 2,2-диметил-фосфонтетрагидропиранолили.1, 2, 5-триметил-диметилфосфонпиперидолв количестве 0,0005 мг/Ъ от объема питательнойсреды.Ис нформацин,в е при экспертизеР дуценты биологии ств, Алма-Ата,1 ова Корректорн. Задерновская