Реактив для ранней диагностики беременности и способ приготовления реактива

(31) 7300496 есударстввеий хекхтетСовета Иехстреа СССРв,авлам азебрвтвехк фткритхй(72) Автор Изобретен ИностранецРобер Луи Прюньо (франция) ностранная фирмаборатуар Теранол(71) Заявитель РЕАКТИВ ДЛЯ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ БЕРЕМЕНН И СПОСОБ. ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАКТИВА я к области ользовано в диагноза бе ой дозетисыворотановитсенсибилипробнркэритро ГГ определенки, насьицаетнейтральнойированным ксодержится,итов, отноше При так порция ан моном и с роцитам,с Если в меР, зх 10ная прося горк зрит. ХГГ.наприи Йзобретение относитсмедицины и может быть испакушерстве для раннего ре менности.Известен реактив для ранней диагностики беременности по наличию хориого-, надотропина в моче, содержащий лиофилиэиоованные сенсибилизнрованные к хорионгонадотропину эритроциты, динатрийфосфат, монокалий фосфат или офилизированнную антисыворотку к хорионгонадотропину 111Однако известный реактив обладает низкой чувствительностью и не обеспечивает точности диагностики. 5Целью изобретения является повышение точности диагностики.Эта цель достигается тем, что реактив содержит дополнительно этилендиаминтатраацетат натрия, причем компоненты со держатся в следующих соотношениях, вес.ч.:Лиофилизированныесенсибилизированные к хорионгонадотропину эритроциты 20Динатрийфосфат 0,49-0,5Монокалийфосфат 0,07-0,075Антисыворотка к хорионгонадотропину 6-8 Этилендиаминтетраацетат натрия 0,3 -0,5С целью предотвращения преждевременной реакции между эритроцитами и сывороткой, лиофилизацию компонентов производят послойно, в следующей после довательности: взвесь эритроцитов, затем раствор динатрийфосфата, монокалийфосфата и этилендиамин-тетраацетат натрия, затем антисыворотка.Реактив для ранней диагностики беременности включает основу, состоящую, например, из эритроцитов или синтети" ческих полимеров, на которой абсорбируется хорионический гонадотропин, основа связана с антисывороткой по отношению к этому гормону.Количества эритроцитов и антисыворотки должны быть взяты в таких соотношеНиях, чтобы получить положительную реакцию при 1500 ед/л хорнонического гонадотропного (Х 1 Г) гормона и отрицательную реакцию при 1000 ед/л ХГГ.Предел чувствительности предлагаемо го реактива должен превышать 1500 межд.ед. УСН на 1 л исследуемой мочи.Предлагаемый реактин обладает высокойчувствительностью н предотвращает преждевременную реакцию между эритроцитами 35 и сывороткойе Формула изобретения 20 0,49-0,5 0,07-0,075 6-8 0,3-0,5реактива отлнс целью эритроциты:антисыворотка ф Зх 10:2 х 10 з.Э2,5 х 10, причем это отношение соответствует, например, количеству антисыворотки, выраженному н сухом экстракте,от 6600 фдо 7500 мкг,Титрование антисыворотки осуществляют иэ эритроцитов, сенсибилизированных к ХГ 1. Титр является переменнымв каждом случае, именно этоттитр ислужит основанием для осуществленияразбавления.На пробирку используют 0,2-0,4 млсуспензии и 3-6 эритроцнтон, сенсибилизированных к ХГГ, 0,3-0,6 мл раствора антисыворотки. Вуфер регулируетзначение рН, моча имеет рН 5,8 с физиологическими изменениями 5,2-6,4.Реакция ингибирования агглютинациипроисходит н наилучших условиях, еслирН близок к нейтральному Поэтому необходимо использовать буфер, чтобырН было в пределах 6,5-7. Для этогореактив должен содержать буфер с ФосФатами натрия и калия в количествах,мггПервичный фосфат калия 0,072Первичный фосфат натрия 0,495в моче кальций связан с белками нне имеет никакого влияния на реакцию,но небольшое количество свободных ионов кальция всегда присутствует, этоколичество быстро нозрастает со старением мочи, Ионы кальция вызывают агглютинацию эритроцихов Если моча имеетотрицательную реакцию(моча небеременной женщины не содержит ХГГ), результат останется отрицательным, так какагглютинация явлнетая как результатом отсутствия ХГГ; так и наличия ионовкальция. Если моча имеет положительную реакцию, то не должно происходитьагглютинацни, так как имеется наличиеХГГ, но будет иметь место агглютинациявызванная ионами кальция, а реакциявместо отрицательной станет положительной, поэтому необходимо удалитьионы кальция. Различные количественныеанализы показали, что содержание ионовкальция может возрастать на необходимое для проверки количестно мочи до30 мкг и выше, н то время как количество .10 мкг способно помешать реакции,Для реактива ионы кальция удаляютпутем перевода их в комплексное соединение с натриевой солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) (на 2 молекулыводы). Для обеспечения надежностиреакции, даже если моча не используется в течение малого времени, натриевую соль этиленднаминитетраацетатаподают н избытке.Реактив содержит натриевой солиэтиленднаминтетраацетата 0,4 мг.Динатрийфосфат, монокалийфосфат инатриеную соль этилендиаминтетраацетата вводят н виде раствора, количество которого составляет 0,1-0,2 мп. Реактив готовят путем помещения суспензия эритроцитон в изотонический соленой раствор н пробирке, в которойсуспензия заморожена, затем н зто количество эритроцитов нводят замороженныйбуфер, который содержит замороженныйэтилендиаминтетраацетат, и поверх которого прибавляют раствор антисыноротки, который также заморожен, после чего все лиофилизнруют.Соединение буфер-этилендиаминтетраацетат разделяет расположенные рдиннад другим слои эритроцитов и сыворот.ки в целях предотвращения преждевре-, (5 менной реакции между эритроцитами нантисывороткой.Состав буфер+ЭДТА является изолятором обоих расположенных один над другим слоев эритроцитов и антисыворотки Ю и три замороженных, расположенных таким образом один над другим слоя немогут реагировать между собой из-за ихзамороженного состояния, а лиофнлиэация осуществляет переход твердых ве ществ в газообразное состояние, приэтом различные имеющиеся реактйны немогут взаимодействовать между собой. д 1. Реактив для ранней диагностикибеременности по наличию хорионгонадотропина в моче, содержащий лиофилизиронанные сенсибилизиронанные к хорионгонадотропину эритроциты, динатрий -фосфат, монокалийфосфат и антисыворот-.ку к хорионгонадотропину, о т л ич аю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности диагностики, он содержит дополнительно этиленднаминтет-.раацетат натрия, причем компоненты со держатся в следующих соотношениях,вес.ч.: Лиофилизнрованные сенсибилизированные к хорионгонадотропину эритроцитыДинатрийфосфатМонокалийфосфатАнтисыворотка к60 хорионгонадотропинуЭтилендиаминтетраацетатнатрия2. Способ приготовленияпо п.1 путем лиофилизации, 65 ч а ю щ и й с я тем, что,607564 Составитель С. МалютинаРедактор Л. Емельянова Техоед О.Андрейко Корректор С.ШекмарЗаказ 2645/46 Тираж 1112 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035 Москва, ЗРаушская наб. дд 45филиал ППП Патентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 предотвращения преждевременной реакции между эритроцитами и сывороткой,лнофилиэацию компонентов проиэводятпослойно, и следующей последовательности: взвесь эрнтроцитов, эатем раствор дннатрнйфосфата, монокалийфосфата и зтилендиаминтетраацетат натрия,затем антисыворотка.Источники информации, принятые во