Способ получения рифамицина из нового вида продуцента

Союз Советских Социалистицеских Реслхблик) М. Кл. Г 123 9/2 оударственный немет йввта Инннотров СС но делам нзобретеннн отноытнй ДК 615.779(43) Опубликовано 05.08.77 Бюллетеиь 2 (4 Ь) Дата опубликования описания 12.09.7 Л. П. Терехова,а Коробкова, М, , И. В. Толсты Шаповалова Л. П. Иваницкая, Г. Бражникова,Л отиков АМН титут по изысканию новых а 54) ШТАММ 2739 йоссой 1 о цюаОссе вр ъоч.- ПРОДУЦЕНТ РИФАМИЦИНА В якп Изобретение относитс роизво ву антибиотиков.Предложен новый ранее в литературе не Ьптсанный штамм 2739 Йосо 1 гд 1 О отз 101- са ьр.пои., продуцнрующнй рифамицин В, харак териэующийся тем, что на минеральной среде1 образует белый скудный воздушный мицелий и бесцветный субстратный мицелий, гифы воздушного мицелия распадаются по всей длине на продолговатые споры с глад кой поверхностью,на органической среде2 воздушного мицелня нет, субстратный мицелий арко-оранжевый, среда не окрашена, рост хороший; на среде Чапека образует хорошо развитый мнцелий розоватого цвета, субст-ратный мицелий арко-красный до вишневого, окраска субстратного мицелия обусловлена образованием красного пигмента, пигмент в среду не проникает; на среде СРКрасильникова, глюкозо-аспарагиновом" агаре и сре де Линденбайна образует розоватый воздушный мицелий и от оранжевого до ярко-крас,ного цвета субстратный мицелий, среда не окрашена ) на среде Треснера-Кореняко образует белый скудный воздушный мицелий и 26 2темно-вишневый субстратный мицелий, пигментт среду не окрыьивает; меланина не образует; усваивает фруктоэу, гьлактоэу, глицерин, сахарозу, рафинозу, ксилоэу, арабинозу, инозит, рамнозу, маннит и не.усваиваетцеллюлозу; гидролизаты цельных клеток содержат меэо-диамииопимелииовую кислоту,арабиноэу и галактозу; образует до 400 мквйлантибиотика,Штамм 2739 ЙосОгд 1 с 1 амасиса зр поо;выделен из почвы и имеет следующие особенности прч выращивании иа различных агаровых срепах при 28 С в течение 7-21 дней. Определение цвета субстратного мипелия проводятпо шкале пветов Бондарпева и по, шкале Праузера, а окраски воздушного мицелия - пошкале Треснера,Минеральная среда М 1, Воздушный мицелий тонкий, белый. Гяфы воздушного мицелияпо всей длине распадаются на продолговатыеспорьтс гладкой поверхностью. Губстратныймицелий беспветный; при росте на свету оторанжевого до вишневого. Среду не окрашивает. Рост скудный,4811 98 Ужг, тип., з. 763-77 г., т, 2500,Органическая среда2, Воздушного мипелия нет, Субстратный мицелий ярко - оранжевый. Среда не окрашена, Рост хороший.Среда Чапека, Воздушный мицелий белымидо розоватого, хорошо развит. С "бстрятный ми- .5целий ярко-красный до ви 1 невого, Окраскасубстратного мицелия обусловленаобразованием красноо пигмента, который экстрагируется из мидедя ацетоном. Среда не окращена. Рост обильный,0Среда СРКрасильникова и глккозовспарагиноввя срепа, Воздушный мицелий белый до светло-розоватого. Субстратнь,й мицелий от оранжевого по ярко-красного, Среда не окрашена. Гост хсрошчй,5Овсяная среда. Воздушный мицелий белый, Субстратный мицелий оранжево-красный,Срепа не окрашена. Рост умеренный.Среда Линпенбайна, Возду нный мицелийкремово-розовый. Субстрвтный мицелий ярко Ювишневый. Среда не окрашена. Рост хороший,Среда Треснера-Кореняко, Воздушный,мицельй белый, скудный. Сусстратньй мицелий темно-вишневый, Среда не окрашена.Рост хороший. 25Среда Змерсона. Воздушного мицелия нет.С убстратный мицелий желтовато-оранжевь 1 й.,Среда не окрашена, Рост умеренный.Картофельный агар, Воздушного мицелиянет. Субстрвтный мицелий желтоватый, Среда не окрашена. Рост умереннь й,Среда с пепоном и лимонно-кислым келезом. Меланина не образует.Предложеннь 1 й штамм хорошо усваиваетфруктозу, глюкозу, галактозу, глицерин, са-, 35(харозу, рафинозу, ксилозу, арабинозу, инозитрамнозу, маннит; не усваивает целлюлозуПодавляет рост 5 сруРососссэ о ецв 209 Р;Вас.тпсо 1 Де 5 Я; Впс,ьцИИ 68; 8 а"Опд Ыса.Гидролизаты целых клеток содерквт мезо-диеминопимелиновую кислоту, арабинозу и гзлвкотозу,Для получения антибидтика рифвмицина изкультуральной жидкости штамм 2739 выращивают глубинным методом нв среде, содержвшей коМпоненты в следующих соотношениях,вес.%:Соевая мука 1,5Глицерин 3Хлористый натрий 0,2 50Карбонат кальция, 0,5Медина л 0,1Кашвлотовый жир . 0,1Вода по 100 мл.Посевной мицелий выращивают в течение, 5524 ч. иа жидкой питательной среде состава,%.Перевар Хоттингера 3 по объему (28 -30 мг% ам 3 Нного азота)ГлюкозаПептон 0,5 60 Хлористы" натрий ОЯКарбонат кальция 0,3Вода ВодопроводнаяМаксимальное накопление антибиотика вкультуральной жидкости происходит на 5-6сутки культивирования при 28-30 С и достигает 400 мкг/мл рифвмицина "В",Выделяют рифамицин "В из культуральной жидкости следующим образом. Культуральную жидкость отфильтровывакт от мицелия,Натнвный раствор подкисляют до рН 4, антибиотик экстрагируютс метиленхлоридом.На первую экстракцию берут 0,1 часть, навторую и на третью по 0,05 части по отношению к объему нативного раствора. Первыйи второй экстракты объединяют. Третьим экстракд ом проводят вторичную экстракцию нативного раствора следующей ферментации.Из метиленхлоридного экстракта антибиотик.переводят в 0,1 14 фосфвтный буферный рас-твор с рН 7,0-7,5, содержащий 0,5% аскорбиновой кислоты. Реэкстрвкцию проводят 3разд, На каждую операцию берут по 0,1 части от объема метиленхлоридного экстракта.Все три водные реэкстракты объединяют, добавляют 5% (по отношению к объему реэкстрактв) бутилового спирта, доводят рН раствора до 4,0, и антибиотик снова экстрагируютметиленхлоридом 3 раза. На первую экстракцию берут 1/2 объема, нв вторую и третьюпо 1/4 обьема реэкстсакта. Метиленхлоридныеэкстракты объединяют, концентрируют в вакууме при +40 С в 25-50 раз, и растворооставляют при 0-5 С, Через несколько часоввыпадает кристалический рифамицин В. Кристаллы отфильтровывают, промывают этилацетатом, Рифамицин В путем окисленияазотистой кислотой преврящвют в рифамицинО. Затем рифвмицин О гипролизуют солянойкислотой и получают рифамицин 5 . Рифамицин 5 воствнавливают аскорбиновой кислотой в рифамицин бЧ, из которого добавлением натриевой щелочи получают препаратнатриевой соли рифамицинаФормула изобретения Штамм 2739 Мбсогдс оьсйлсо 6, идкцродуцент рифамицина В,характеризующийся тем, что на минеральной среде1 образует бе лый скудный воздушный мицелий и бесцветный субстрвтный мицелий, гкфу воздушного мицелия распадаются цо всей длине иа цродолговвтые споры с гладкой поверхностью; нв органической среде2 воздушного мицелия нет, субстрвтный мицелий ярко-оранжевый, среда не окрашена, рост хороший; на среде Чапека образует хорошо развитый воздушный мицелий розоватого цвета, субстратный ми4811 98 Составитель С, ЩеневаРедактор Л, Емельянова Техред О, Луговая Корректор С. Юдчеикс Заказ 2849/47 Тираж 541 Подписное БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5целий ярко-красный до вишневого, окраска субстратного мицелия обусловлена образованием красного пигмента, пигмент в среду не проникает; на среде СРКрасильникова, глюкозо-спарагйновом агаре и среде Линденбайна образует розоватый воздушный мицелий и от оранжевого до ярко-красного цвета субстратный мицелий, среда не окрашена; на среде Треснера-Кореняко образует белый1 О скудный воздушный мипелий и темно-вишневый субстратный мнцелий, пигмент среду не окрашивает; меланина не образует; усваивает фруктозу, галактозу, глицерин, сахарозу, рафинозу, ксилозу, арабинозу, инозит, рамноэу, маннит и не усваивает целлюлозу; гндролизаты цельных клеток содержат мезо-диаминопимелнновую кислоту, арабцнозу и галвктозу, образует до 400 мкг/мл антибиотика.