Способ получения физиологически активных

Яс;вг ок -н;,яг с. " э н ";ОП ИСАНИ Е ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советских Социалистицеских РеслубликК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Зависимое от авт. свидетельства-Заявлено 191972 ( 1739525/30-15) А 61 с 17/00 нем заявки-с присоедин осударственныи номитеСовета Министров СССРпо делам иэооретенийи открытий Приоритет -Опубликовано 28.7111.1973, Бюллетень3Дата опубликования описания 4.Х 11.1973 УДК 615 7 739(088 8 Автор зобретен. Г. Сарае аявител ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВПоследовательно ртию немного от ют крылья, ноги, есте с перьями. каждую замороженную аивают, у,цыплят обре головы и снимают кожу Обработку гпроизводят в перемешичецпе 5 -Изобретение относится к способам получения биологических стимуляторов роста животных.Известны способы получения политкацевых препаратов из ткаией жс;вотных в асептичесиих условиях.Отличительной особенностью данного спо. соба является то, что используют ткань молодых животных, предварительно подвергнутых длительному голодавию с псследующим глубоким замораживанием, Зто позволяет получать более эффективные препараты, которые оказывают стимулирующее действие на живой организм.Способ осуществляют следующим ооразом.Отбирают здоровых, среднего веса, .например, 7 - 8-суточных цыплят, помещают в клетки и подвергают полному голоданию (при наличии воды) 70 - 120 час при температуре воздуха 20 - 25 С. За это время цыплята те. ряют в весе 20 - 31%. Периодически, через каждые 6 - 10 час, начиная с 70 - 72 час и до 120 час голодасия, отбирают самых слабых цыплят и помещают на твердую углекислоту для глубокого замораживания. стерильных условиях прп температуре воздуха не выше 10 С.С тушки цыпленка срезают поперечцополосатую мышечную ткань, сразу же помеща 5 ют на твердую углекислоту ц хранят до техпор, пока будет собрана ткань со всей партиицыплят. Замороженную ткань измельчаютножницами, ца мясорубке и ца гомогецизаторе при 8000 обчин желательцо до состояниямелкого замороженного порошка, который1:сбольцтпмц порциями помещают в гомогецпзатор с охлаждением, заливают 8 - 1 О ооъемами холодной 0,1 Л соляной кислоты и экстра.гнруют,прн 8000 об,мин 8 - 1 О вин с перерывом для охлаждения температуры в стакацах.Зкстракт отделяют цецтрифугировациемпрц 5400 - 5700 оймин 20 - 30 лин, а затемфильтруют под вакуумом через 2 - 3 слоя бумажного обеззоленного фильтра.Осадок, вторично экстрагируют в гомогецизаторе с 5 - 6 объемами колодной 0,1 Л соляной кислоты, центрифугируют н фильтруют,Для более полной экстракции операцию можно повторить еще раз. Полученный осадоквыбрасывают.В экстракте устанавливают рН 3,1 - 3,35с помощью едкого кали, перемешивают и оставляют на холоде на 10 - 12 час.Затем устанавливают рН 5,25,вают и оставляют ца холоде в теУдаление,соли 35 40 45 50 55 60 65 10 час, цецтрифугнруют при 5200 - 5700 об/,1 гии 15 - 25 1 гигг и фильтруют под вакуумом. В экс тракте проверяют рН 5,25 и помещают на холод-экстракт 1,Полученцый осадок заливают 3 - 4 объемами холодной 0,1 Л соляной кислоты и экстрагцруют в гомогенизаторе при 8000 обlггин 7 - 9 я:ин, Устанавтивают рН 3,2 - 3,5, оставаяют на 1 О - 12 час на холоде, затем устанавлцвают рН на 5,2 - 5,3 выдерживают ца холоде, цегнтрифугируют, фильтруют, Получают экстракт 11 с рН 5,2 - 5,3. Осадок залечивают небольшим объемом холодного уксуснокислого калия с рН 5,2 - 5,3 (рН уста 1 навливают уксусной кислотой) и экстрагируют 7 - 9 лин. Экстракцию проводят ца холоде небольшими порциями. Раствор с солью рН 5,2 - 53 помешают в холодильник ца 10 - 15 час, затем центрифупируют прои 5200 - 5700 обзгин 25 - 30 ггин, фильтруют под вакуумом экспракт 111,Осадок заливают небольшим объемом хо полной бидистиллированной воды с рН 5,2 - 5,3 экстрагируют на мешалке, выдерживают ца холоде несколько часов, центрифугируют и фильтруют экстракт 1 ч. Осадок выбрасывают.Экстракт 1 и 11 сливают вместе, экстракт 111 и 1 Ч сливают в другую емкость,Высушивание производят лиофильцым спосооом до лухообразцого порошка. Сухой порошок из экстракта 111 и 1 Ч взвешивают, заливают конценприровагнным холодным этиловым спиртом из расчета 1200 - 1500,ггл спирта на 20 - 22 г сухого порошка, эистрагируют на мешалке и,помещают,в холодильник до появления, плотного осадка. Осадок отделяют путем фильтрования под вакуумом ги смешивают с сухим порошком из экстракта 1 и 11. Объединенный осадок растворяют в небольшом объеме холодной бидистиллировациой воды и при энергичном перемешивании в этот раствор вводят холодный колщентрированный химически чгистый ацетои до содержания его в растворе 780/о, Помещают в холодильник до оседания плотного осадка, центрифупируют и фильтруют. Раствор больше ие нужен. Осадок заливают концентрированным ацетоном, отделяют и подсушивают в вакуум- камере при комнатной температуре, Заливают небольшим количеством холодного серного эфира и экспрагируют на мешалке, отстаивают, осадок отделяют и сушат при комнатной температуре, Сухой осадок растирают в мелкий порошок, заливают холодным 60-ным ацетоном с рН 3,0 (рН устанавливают соляной кислотой), экстрапируют и отстаивают осадок, Затем промывают новыми порциями 5 О 15 20 25 30 б 00 г 0-ного ацетона с рН 3,0, отстаивают и фильтруют. Осадок выбрасывают.Экстракты 111 и 1 Ч сливают, измеряют объем объединенного фильтрата, вычисляют содержание в:нем ацетона и воды и вновь вводят холодный концентрированцый ацетон с рН 3,0 до содержания его,в растворе 780 гг 0. Выпавший осадок отфильтровывают и операцию повторяют еще 2 - 3 раза. Осадок выбрасывают.Все фильтраты объединяют вместе, помеШают в вакуумный испаритель и при температуре 30 - 35 удаляют ацетон.Выдел ение а кти вн ых веществ Раствор, содержащий органичесиие веще. ства, охлаждают едким калием, устанавливают рН 5,8 - 5,9, выпавший осадок удаляют фильтрацией. В раствор при помешивании вводят 250 г 0-гный аммиак в избытке до рН раствора 10,8 - 11,0, при этом образуется оелый осадок активных веществ, его помещают на холод, затем фильтруют под вакуумом,Осадок физиологически активных веществ вместе с фильпром растворяют в,небольшом объеме О,1 Л соляной кислоты, упагривают при температуре не выше 35 - 40 С ца /4 своего объема, затем добавляют небольшое количество воды и выпаривают насухо. Порошок должен быть абсолютно сухим, только при этом условии он сохраняет свою активность при хранении. Выход сухого порошка активных веществ из мышечной ткани приблизительно 0,14/О от веса сырой ткани. Упаковка и хранение Высушенный порошок в сухом помещении растирают в ступке, засыпают в предвагрительно вымытые, простерилизованные и вы сушенные ампулы, объемом 1 1 г,гг и запаивают. Хранят в испарителе холодильника без доступа света. Активность препарата не менее года.Описанным способом могут быть получены физиолагичесии активные вещества, представляющие из себя нуклеотидпептиды из других ткацей и органов животных других видов. Полученные физиологически активные вещества испытывались на увеличение привеса животных. Испытания показали, что действие препарата зависит от дозы, веса и возраста животного. С увеличением веса и возраста действие препарата увеличивается, Минимальная действующая доза, наименьшая для животных перед полным преиращением ими роста, увеличивается по мере старения живот. ного и гораздо значительнее с уменьшением веса и возраста животных. Минимальная дейсгвующая доза дает наибольший эффект в наиболее короткий срок, с увеличением дозы продолжительность действия препарата увеличивается, а величины дополнительного при. роста за тот же срок уменьшаются. Напри395081 Предмет изобретения Составитель Р. МахнюкТехред Е. Борисова Корректор В. Жолудева Редактор Д. Пннцук Заказ 689/2271 Изд.940 Тираж 467 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делагн изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Тип. Харьк. фнл. пред. Патент мер, оптимальные дозы ирепарата дчя петухов весом 1400 - 1700 г = 0,029 г,кг, весом 1900 - 2000 г = 0,024 мг/кг (,возраст 116 - 270 суток) и 0,08 мг/кг для петухов весом 2300 - 2700 г (возраст 2 года 7 мес,), Эти дозы вызывают за 11 суток опыта соответственно 32,8; 8,9; 91,7% дополнительного прироста.Порошок физиологически активных веществ, разведенный в физиологическом растворе при рН 4,5 - 4,8, вводят животным внутримышечно. Спосоо получения физиологически активных веществ, включающий получение и из мельчение ткани, экстрагированпе, центрифугирование, высушивание, от.гичаюигийсл тем, что, с целью повышения их эффективности, :гспользуют ткань молодых животных, предварительно подвергнутых длительному голода нию с последующим глубоким замораживанием.