Продуцент ксиланазы

Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт, свидетельстваЗаявлено 16.71,1970 ( 1449697/28-13) Кл. С 126 13,10 С 121 3/00 соединением заявки 1 ч Комитет по ивобретеиий и при Совете М СССРПри крытиистров 7(088 Опубликовано 07.111,1972, Бюллетень9 Дата опубликования описания 13.1 Ъ.1972 УДК 5 Авторыизобретения Головина и Э. В. Болтянс Г. Логинов опф ъ: "4 Ъ Ц 111"Ы 1 ь"-"тИРИ ститут микробиологии АН СССР явитель 7-ПРОДУЦЕНТ КСИЛАН Изобретение относится к области микробиологической промышленности.Известны штаммы микроорганизмов, продуцирующие ксиланазу, например Ыгер 1 огпусез ху 1 орйадцз. 5Предлагаемый штамм отличается от известного своими морфологическими, физиологическими и культуральными признаками. Он обладает высокой осахаривающей способностью. Под действием ксиланазы ксилан рас щепляется на 60 - 70% за 15 мин, а под действием фермента Ягер 1 огпусез ху 1 ор 1 тадцз степень гидролиза субстрата составляет 40 О/с за 30 мин и 64% за 24 час при одинаковых оптимальных условиях действия фермента, 15 Для выращивания Ас 11 погпусез зр. 7 используют дешевую и простую по составу среду,Отличительной особенностью АсЫпогпусез зр, 7 является также его способность накапливать ксиланазу за более короткий период 20 культивирования (34 - 48 час вместо 72 - 120) у Ягер 1 огпусез ху 1 орйадцз, что может быть связано с наличием у этой культуры повышенного температурного оптимума роста 40 С. Повышенная температура культивирования 25 способствует успешному проведению ферментации, По сравнению с другими известными продуцентами ксаланазы Ас 11 погпусез зр. 7 по активности этого фермента превосходит более чем в 1,5 раза наиболее активные ме 21,355,0 3,5 0,625 0,1 я 48 час в лав ферментере льтивирования 40 С.Шта Мо Среди мирую гаютс женнь ками. характеристику, есептироьанный.мк. Споры форторые располахорошо выраянутыми завит,8 К 0,7 - 0,9 мк. ующую ицелий 0,6 - 0,8 осцах, к бразуют - 4 рас ор 05 -мм имеет след р фол огня. М яя толщина гиф тся на спорон я одиночно и о е спирали с 3Величина сп ШТАММ АСТ ХОМУСЕ 8 зофильные штаммы грибов Тпс 11 ос 1 еппа иг 1 г 1 е 35, С 11 ае 1 еппцгп 1 п 1 а 1 ега 11 2264.В препарате-сырце, который выделяют пз культуральной жидкости путем высаливания сернокислым аммонием или осаждением этиловым спиртом, наряду с ксиланазой присутствуют активные ферменты С - ,типа, входящие в комплекс целлюлаз, а также С, - фермент и целлобиаза.Предлагаемый термотолерантный штамм АсЫпогпусез зр. 7 культивируют при рН 6,8 - 7,0 с водопроводной водой на среде, содержащей, г/л:Пшеничная солома со свекловичным жомом (1:1)КХОаКН 2 РО 4Мд 504 7 НаОСаС 12 2 Н 20Длительность культпвированибораторных условиях, 34 час -на 100 .г. Температура ку60 65 3Поверхность спор покрыта небольшими шипами,Культур альные призн а к и. Наагаризованных питательных средах образуеттонкие, плотные бесцветные колонии, покрытые рыхлым порошковидным слоем воздушного мицелия. Воздушный мицелий сначалаимеет белый цвет, затем на третьи - пятыесутки роста становится серым. Часто сохраняются небольшие белые участки. Растворимого пигмента не выделяет. Споры в массе темно-бурого цвета, вследствие чего колонии снижней стороны буроватые. Темпер атур акультивирования 30 - 50 С, оптимальная 40 С,при 60 С рост отсутствует. Хорошо развивается на простых синтетических средах с крахмалом или целлюлозой в качестве источникауглерода, На богатых органических средах, атакже на синтетических средах с сахарамирост заметно слабее.Рост на синтетических ср ед ах. Минеральная среда с глюкозой или сахарозой(СРТ: среда Чапека) - рост слабый, колонии бесцветные. Воздушный мицелий скудный, белый или серый, среда не окрашивается,Среда с крахмалом (среда Гаузе1: крахмально-аммиачная среда; СР 1 с крахмалом),Рост хороший. Колонии бесцветные. Воздушный мицелий темно-серый, Среда не окрашивается,Минеральная среда с клетчаткой. Рост хороший. Образуется серый воздушный мицелий. Субстрат не окрашивается.Р ост на органических средах. Картофельный агар. Рост умеренный. Колониисероватые. Воздушный мицелий пепельно-серого цвета.Ломтики картофеля. Рост хороший, Колонии мелкие, бесцветные или сероватые. Иногда среда слегка темнеет.Глюкозо-аспарагиновая среда, Рост слабый.Колонии тонкие, бесцветные, Воздушный мицелий скудный, серый.Сусло-агар, Рост умеренный, Колониимелкоскладчатые; пористые, рыхлые, грязножелтоватые, Воздушный мицелий скудный,белый.Мясо-пептонный агар, Рост умеренный,воздушный мицелий скудный, белый. Среда иколонии не окрашены.Физиолого-биохимические свойства.Желатину разжижает,Молоко коагулирует и пептонизирует.Крахмал гидролизует. Нитраты восстанавливает, клетчатку разлагает. Водород на среде Треснера - Кореняко не выделяет, Меланоидный пигмент на средах с тирозипом не образуетт.Отношение к источника и углер о д а. Хорошо усваивает глюкозу, фруктозу,крахмал, декстрин, мальтозу, галактозу, маннит, глицерин, рамнозу, инозит, а также натриевые соли уксусной, лимонной, яблочной,янтарной, пировиноградной кислот, Хуже ус 5 10 15 20 25 Зо 35 40 45 50 4ванвает лактозу, арабинозу, ксилозу, маниозу,эскулнн и фумарат натрия, Слабо усваиваетсахарозу, не усваивает инулин, дульцит илактат.Отношение к источникам азота.Использует как минеральные КХОэ,(ХН 4) 804, так и органические - пептон,алании, аспарагин, глицин и мочевину.Культура обладает слабой антибиотической активностью.Пример использования данного штамма дляполучения ксиланазы, Культивирование в лабораторных условиях проводят в колбах Эрленмейера емкостью 250 мл, с 50 л 4 л среды накачалке с 180 - 200 обlмин,Состав среды с водопроводной водой следующий, г/л:Пшеничная солома со свекловичным жомом 21,35К 11 Оз 5,0КН 2 РО 4 3,5Мд 304 7 НО 0,625СаС 1 2 НО 0,1Посевной материал выращивают на агаризованной среде, состоящей из 50% картофельного отвара и 0,5% глюкозы, в течение 4 -6 сут. Температура культивирования 40 С.Длительность глубинного культивирования48 час,Культивирование в полупроизводственныхусловиях ведут в ферментерах емкостью на100 л с 45 л среды. Аэрация 1 объем воздухана 1 объем среды в 1 л 4 ин, скорость вращениямешалки 300 об/яиц. Длительность культивирования 34 час, Посевной материал для ферментации выращивают в колбах на качалке втечение 1,5 - 2 суток на среде указанного вышесостава. 3 а единицу активности ксиланазыпринимают такое количество фермента, поддействием которого образуется 1 мг редуцирующих веществ в реакционной смеси.Состав реакционной смеси 50 мг ксилана(в виде порошка), 5 лл фосфатно-цитратногобуфера, рН 6,5+1 л 4 л 0,1%-ного растворафермента или 1 ял фильтрата культуральнойжидкости. Температура гидролиза 55 С, время гидролиза 15 мин, Редуцирующие вещества определяют по методу Нельсона. Активность ксиланазы АсБпогпусез зр. 7 по степени гидролиза ксилана 60 - 70% за 15 мин(или 36 единиц редуцирующих сахаров, в пересчете на ксилозу), на 1 л 4 л фильтрата культуральной жидкости. Предмет изооретенияШтамм Ас 11 погпусез зр. 7 - продуцент ксиланазы.Морфология. Мицелий несептированный. Средняя толщина гиф 0,6 - 0,8 л 4 к. Споры формируются на спороносцах, которые располагаются одиночно и образуют хорошо выраженные спирали с 3 - 4 растянутыми завитками, Величина спор 0,5 - 0,8(0,7 - 0,9 л 4 к. Поверхность спор покрыта небольшими шипами,Редактор Т. Рыбалова Заказ 918/6 Изд. Ъе 341 Тираж 448 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прп Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб., д. 45 Типография, пр. Сапунова, 2 Культуральные признаки.На агаризованных питательных средах образуются тонкие, плотные бесцветные колонии, покрытые рыхлым порошковидным слоем воздушного мицелия. Воздушный мицелий сначала имеет белый цвет, затем на 3 - 5-е сутки роста становится серым, Часто сохраняются небольшие белые участки. Растворимого пигмента не выделяет. Споры в массе темно-бурого цвета, вследствие чего колонии с нижней стороны буроватые. Температура культивирования 30 - 50 С, оптимальная 40 С, при 60 С рост отсутствует.Рост на синтетических средах. Минеральная среда с глюкозой или саха- розой (СРТ: среда Чапека) - рост слабый. Колонии бесцветные. Воздушный мицелий скудный, белый или серый, среда не окрашивается,Среда с крахмалом. (Среда Гаузе Мо 1: крахмально-аммиачная среда; СР 1 с крахмалом). Рост хороший. Колонии бесцветные, Воздушный мицелий темно-серый, Среда не окрашивается. Минеральная среда с клетчаткой,Рост хороший. Образуется серый воздушный мицелий. Субстрат не окрашивается.Рост на органических средах.Картофельный агар. Рост умеренный, Колонии сероватые. Воздушный мицелий пепельно- серого цвета. 6Ломтики картофеля. Рост хороший. Колонии мелкие, бесцветные пли сероватые. Иногда среда слегка темнеет.Глюкозо-аспарапшовая среда, Рост слабый.Колонии тонкие, бесцветные. Воздушный мицелий - скудный серый. Сусло-агар. Ростуме.ренный. Колонии мелкоскладчатые, пористые,рыхлые, грязно-желтоватые, Воздушный мицелий скудный, белый. Мясо-пептонный агар.10 Рост умеренный, воздушный мицелий скудный, белый. Среда и колонии не окрашены.Физиолого-биохимические свойства.Желатину р азжижает.Молоко коагулирует и пептонизирует.15 Крахмал гидролизует. Нитраты восстанавливает, клетчатку разлагает,Сероводород на среде Треснера - Кореняконе выделяет. Меланоидный пигмент на средахс тирозином не образует.20 Отношение к источникам углерода. Хорошоусваивает глюкозу, фруктозу, крахмал, декстрин, мальтозу, галактозу, маннит, глицерин,рамнозу, инозит, а также натриевые соли уксусной, л 1 монной, яблочной, янтарной, пиро 25 виноградной кислот,Хуже усваивает лактозу, арабинозу, ксилозу, маннозу, эскулпн н фумарат натрия.Слабо усваивает сахарозу.Не усваивает инулш, дульцит и лактат.ЗО Отношение к псточнпкам азота.Использует как ы неральные ККОв(КН)504, так и органические - пептон, алании, аспарагц, глцнн, мочевину.