Способ разделения белковых смесей электрофорезол1

и ОПИСАН ИЗОБРЕТЕН К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕП 2174 юа Советских одиалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельства ЪЪЗаявлено 24,1 Х.1968 ( 1274655,23 с присоединением заявки М 1 ПК б 01 п 27/2 Комитет по делам аобретений и открыти при Совете Министров СССР)дК 543.545.4(088,8) Х.1971. Б 1 оллстс пикован та опубликования Оп 1 са:1 я 7.11 Авторыизобретен А, Д. Бутов и И. А. Вайнтраубшиневский государствснный университет вител ОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВЫХ СМЕСЕЙ ЗЛЕКТРОФОРЕЗОМ10 15 Изобретение относится к области разделения белковых смесей.Известен способ разделения белковых смесей электрофорезом в полиакриламидном геле путем непрерывного удаления белка, выходящего из электрофоретической колонки с полиакрил амидным гелем током буферного раствора с последующим отбором фракций на коллекторе,Но происходит разбавление растворов белков в процессе разделения, Невозможно также разделять большие количества белков без увеличения объема полиакриламидного гсля. Для разработки такого способа препаративного электрофореза в полиакриламидном гсле, который позволил бы при сохранении вьсокой разрешающей способности разделять большие колнцества исходной смеси белков без увеличешгя объема полиакрила)Идного геля и разбавления растворов белков, предлагают процесс вести в камере, разделяемой мембранами из геля на одну внутреннюю и две наружные камеры, объем которых меньше внутренней, с отключением и изменение)п направления тока ири достижении внешней погерхности мембраны следующим по подвижности белком и Ооме 1 юм содержи)ОГО наружн Нх камер, в одной из которых содержится наиболее подвижный белок, и с повторением казани,х о:1.",.)ИН 1 гй до полного разделения с:сси иа компонент 1.:1 ЕКТРОфОРСЗ НРОВОДЯТ В ЧРЯМ 01 ТО 1 Ы 10 Х сосуде 1, перс;орожснном мембранами 2 и .) ОДИН 2 КОВ 011 ТО-.ЦИН 1,1, ПЗГОТОВЛСНПЫМИ ИЗ лиакрнламидиого Гсля и двумя мембранами 4, пзготовлсннь 1 мн пз целлофана. В сосуде имеются дв 2 элскт 1)ода д.Внутрен 1 Ою камеру а, ограншцениую мембранами 2 и,) нз полна.;риламндного геля, заполняют раствором, содержащим смесь двух белков, отлпцающнхся по электрофоре- Т 1 ЦС СКОЙ 1 ОДИ)К 10 СТ 1 Г ПС)1 паКРИЛ 2)ИДНО)1 гс.н. Внсшннс камеры ) и с 1 и элсктродиые ка.ср 1 заполняот буферным раствором.П 11)и в,)1 очсн;и то:,2 Од деСтвисм электр 1 с:к 010 ИО)я Ослки, .11 Грируя и Одному нз э,1 сктродов, 1 с 11)с)ып 1:0 поступают Внут 1)ь )1 с )О р а ь 2, 1 1 с ) с м с ща 510 ь в пут р и )1 С м О О 2 Ив К 11 НС 1 П Н 1 ;, 110 ВС;) Х 110 С ГИ, ОЕЛКИ ОО) 2 ЗУ 10 Т лвс нодвижиыс границы. После того, как грани;2 болсс:10 дпн)кпОГО Ослк 2 достиГнет ьч.шисй поверхности )смо)аны 2, последний иа глиает и рсходит 1 во гпсшною камеру Ь ц остается в нс, так как целлофановая хсмбрана 1 1 сп,.ониасма для белков.срсз нско;орос время граница мснсс подви)к 1 о; о бсл.;2 с)с-, игаст внешней поверхност мсмбраны 2. В это время отключают ток, раств 01 р 3 ка)с 1) ), содержащий нскоторое количество более подвижного бс Кя,переносят в камеру с, а буферный раствор пзкамеры с пере)Осят В ка)ер) ) и Вил 02 ОТток обратного направления, Гри этом белки,вошедшие в мембрацу 2 при прямом паправленни тока, возвращяотся в камеру сс, а оелки, содержащиеся в камере а, мигрируют Всторону мембраны 3 и, пспрерыгпс поступаяв нее, вновь образуют две подвпжшс границы, аналогичные о.1 псаппым вьппс.о;обратного направления пропускают до техпор, пока Весь белок пз ме)1 браны 2 цс Вс;)нется в камеру а, а гр;шипа мепес по,.лпи(ного белка в мембране 3 не достигнет Внешней ее поверхности. За это время пскоторосколичество более подвп)кпого белка и реходит в камеру с, уже содержап,ую ослск,перенесенный из камеры Г), Вслед зя этимоперации по замене содержимого кя)Ср )и с и изменению направления тока поьОряОтмногократно до тех пор, пока более подвижный белок не перейдет практически ш)лпостьюиз внутренней камеры а во впешнкцо.Поскольку толщина мембран 2 и 5 одшакова, время, за которое грашп;а мспсс:одвижного белка достигнет вцеш 1 и повсрхности одной из мембран, равно врсмспп, псобходимому для полного выхода бслксв пзпротивопсло)кной мсбраны во впу рсппООкамеру.Разделение слОжны:; смесеЙ, содсГкащпхболее двух белков, осуществляется ,ослсдовательным отделением 1:ях(до:о пз наиболееподвижных белкоь.Для разделсция бслков В бслъььцг Озъ ,:яхраствора без увеличеця объс:,;я Вц;рсппсйКаМЕрЫ раСГВОГ раЗДСЛ 51 СМОЙ С)ЕС, ОС, КОВиз внешнего сосуда подвсргаст пспрервцойциркуляции через внутреннс;о камсрт,. Циркуляцию осуществляют с помощью микронасоса.Для пОВышепия копцсп Г;) ап 1 п рястБОрсвкаждого из белков смеси в процессе их разделения внешние камеры ) и с изготавливаютс таким расчетом, чтобы объсм кя)кдсй изних был еьше объема раство,)2 разделяемой смеси,Для автоматизации замень растзоцов Вовнешних камерах ) и с и изме сипя и я ц р а,; -ления тока используют два ьдупж ря механического поивода с кла)анями исцозьсвана плуцжерное стройство 1; клапана механических 1 икрсбсреОк систс".,1 ы исц",1 хя)датчик времгцш 1 командньй .;С)(:;:сс(йприбор К;-;)П).Условия для проведеня прс:яагпгпогоразделения смеси белков могут б:ть расс иТ 2 НЫ ОРИЕНТИРОВОЧНО Па ОСПОвацин )ЕЗЛЬТ 2 тсв аналитического разделения.Предлагаемьй способ црспаратцгпо; о ряз -деления белков электрофорсзом В:слпа.(.;и. ям;Дном гслз может б 1 ть:рп)ецеп для раз,е)Сця дугцх В цсств )пуклсицов.х кислот ц;)р.), причем мс)брап 2 может Оыь изГО- тсвлепа та)Кс из других материалов, таки, 5 1,як 2 яр, гГярсза, к)яхъалыЙ Гель и др,Г р и ) с ), Раздсл 5110 Съссь оОЛПГОМСРОВ 01)ЬСГО СЫВОРОГОПОМина.10 КОиСстВО 1; я;1 "л 51 СМОЙ смесибслков, гОбт ем раздслясмсй смссц бслко, лКои сцтрацпя моцомсра в расгвсрс псхсдцсй смеси бслКОВ,01Об) см ВП 5 грецией камеры, с.1)Об)ем гпс;цц,)й камеры, с,Тс.Иица сзб)п)11, с 1 20 П;Ощядь .;с;,10 ряпы, с.Ооъсм полпакр;лам цдпсго гсЛ 51С.1 ГКопцснтоацпя геля д)оРаствори;ель - тр:с-цптрятпыйб)1 фар 08ПроизволГгсльнссп микронасоса, ьг час1-12 поя)ксп, а аГГлстпость тОка, а,с. 30 Время пропускапия то(а в одномпапрявлсшш, инЧпслс цнк ОВ тсобхс и п)с т ; яполюго ряздслсппяКсцц Грапи 1 раствора мопс сря 35 п)слс сгс огдс,си, О)о омер а ио 1 Гц б)у 15 1,0 19,0 38,0 0,2 19,00,014 40 120 4,2 15 45 Предмет изобретения Опосоо разделе:ц 15 Осл 1(ОВых смесеЙ элекрофорезом с применение, геля, напри.Ср полпякри; ампдцого, От.цааюгиася тс 1, что, 50 с и;лью повьциенпя эффект 11 цостп разделс.11 51, ЕГО ВСДУТ В Кя)ЕРС, РаЗДЕЛЯЕМОЪЕЪ- .;рацамц пз геля ца о;цу Внутре 1 Поо и две пару)кце кя)сры, обьсм которь.(:, сньше 00) с ц 1 ВпутрсцпсЙ с Откл Очсгцюм и пз.,спг: 55 Исм:я:рав;сп 151 тока прп Доси:кецп 1 ВпсшСЙ .ОЦС)ХПОСГП .,1 С.,10 Раць СГСД 5 ОЩИ:,1 ПО ПОДВи)кюст 1 белкс)1 и 005 сном ссдср)еи).О 2) ца"уицп,г( каме), В одпоц цз которьх содср):Ггс 1 паисолсе псдзцжпыЙ белок с повтс рсшсм указанных оцсря:цш до полного разде)1 ецпя смеси па ком;сцснты.)сслсдсвп.ис выделе;ного препарата мономера сыво;)оочно) 0 альбу)цша аналитическим элсктрофорсзо) в пол и акрилам идиом 40 гслс показывает полную его однородность; Впр парате олпгомсров пс обнаружена прп- МССЬ )ОЦО)иСР 2,321740 Редактор Л. Новожило Заказ 117/8 Изд 4 759 Тираж 473 ПодписноеЦНИИП 14 Комитета по дела. изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д. 45 Типографии,р. Сапунова оставитель Н. Люипова Техред Л. Евдонов Корректоры: О. Зайцеваи Е. Михеева