Способ получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИ СПУАТЕНТН ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЙ К А ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ Изобретение относитс п 1 отных питательных сред иерных гелей и найдет пр дцине и биологии.Целью изобретения яв я к получению на основе полименение в меив тяя ляется упрощеия питательной дает необходитора (разлив ввремени реакн е технологии изготовле с еды за счет того, что от м сть использования ре ч шки Потри) и сокращен овят щей нен- мина вление раствора О.ветвленного полиакриламида ей молекулярной массой 7,2 х л. ич 5, Пригот К 99,5 мл раствора О, т ление раствора Е.аствора С добавляют 0,5ательно перемешивают,(21) 4278310/05( 1) Киевский медицинский институт и .акад.А.А.Богомольца(5 Д) Авторское свидетельство СССР й 1105767, кл. С 08 Р 220/56, 1982, ,Авторское свидетельство СССР1669158, кл. С 08 Р 220/56, 1985, 510 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛОТНОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ ц идо 10-15 мин.П р и м е р 1, Для получения геля гоч тыре раствора А, В, С, О по следуюм тодике (укаэанные количества компт в из расчета на 100 мл раствора).1, Приготовление раствора А.0,5 1 ч,й,й,й-тетраметилэтилендиа(Т 5 МЕДт растворяют в 99,5 мл филиала ского раствора. 2 Приготовление раствора В. 0,735 г й,й-метилен-бис-акриламида(57) Изобретение относится к способу получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов. Изобретение позволяет упростить технологию изготовления плотной питательной среды за счет сополимериэации акриламида и й,й-метиленбисакриламида в и рисутствии разветвленного полиакриламида со средней молекулярной массой 7,2 10 при массовом соотношении разветвленного полиакриламида, акриламида, йЮ-метиленбисакриламида, равном 0,028-0,11:7,0- 15,0:0,11-0,21 соответственно. 1 з.п.ф-лы, 1 табл. догревают до температуры ют 28 г акриламида (АА), раэполного растворения, Полвор фильтруют и доводят до физиологическим. раствором.вление раствора С.рСульфат 9 аммония (ПА) раС- л физиологического раствора рованной воды и доводят до раствора, по 60 С, добавля мешивают до ученйый раст обьема 100 мл 3. Пригото 0,189 г пе творяют в 50 м или дистилли обьема 100 мл 4, Пригото 10,0 г раэ(РПА) со средн х 10 растворя воды или физ температуре 5 водят до 160 мют в 80 мл дистиллированной а иологического раствора при 0-60 С. Объем раствора до 1837059Реакционную смесь готовят иэ растворов, взятых в следующих соотношениях; А:В."Е " 1;2:4, что соответствует весовому соотношению акриламида, й,й-метиленбисакриламида и разветвленного полиактиламида 7,0:0,21:0,028. Смесь разливают в чашки Петри и оставляют на воздухе, Сополимеризация протекает в течение 10-15 мин до Образования геля, который затем отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 ч.Плотную питательную среду готовят путем пропитки полученного геля триптическим переваром по Хоттингеру (аминный азот 300 мг/об) в течение 3 ч при температуре 56 С, с последующей стерилизацией в течение 30 минут,Питательную среду засевают золотистым стафилококком и инкубируют при температуре 37 С в течение 24 часов. Плотная питательная среда обладает хорошими адгезионными свойствами, плотностью и прозрачностью, эластичностью, имеет гладкую поверхность, обеспечивающую эффект скольжения бактериологической петли при посеве микроорганизмов без повреждения ее поверхности. Выросшие микроорганизмы проявляют. характерные для них культуральные и морфологические признаки, Культура хорошо снимается со среды без повреждения ее поверхности.П р и м е р 2. Для получения полиакриламидного геля используют растворы А, В. С, О такие, как и в примере 1,Приготовление раствора Е.К 99,0 мл раствора С добавляют 1,0 мл раствора О, тщательно перемешивают.Реакционную смесь готовят из растворов при следующих соотношениях: А:В:Е = =1:2;4, что соответствует весовому соотношению акриламида, К,Й -метиленбисакриламида и разветвленного полиакриламида 7,0;0,21:0,057,Смесь разливают в чашки Петри и оставляют их для полимеризации на воздухе. Сополимеризация протекает в течение 5-10 минут до образования геля, который затем отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 часа.Полученный гель пропитывают мясопептонным бульоном в течение 3 ч при температуре 56 С, с последующей стерилизацией в течение 30 мин,Питательную среду засевают кишечной палочкой и инкубируют при температуре 37 С в течение 24 ч, Выросшие микроорганизмы проявляют характерные для них культуральные и морфологические признаки, хорошо снимаются со среды без повреждения ее,поверхности. Плотная среда30 соответствует весовому соотношению акри 35 40 45 55 5 10 15 20 25 обладает хорошими адгезионными свойствами, плотностью и прозрачностью, эластичностью, имеет гладкую поверхность, обеспечивающую эффект скольжения бактериологической петли при посеве микроорганизмов без повреждения поверхности.П р и м е р 3. Для получения полиакриламидного геля готовят три раствора А, В, С по следующей методике,1. Приготовление раствора А.0,23 мл й,й,йМ-тетраметилэтилендиамина растворяют в 50 мл дистиллированной воды или физиологического раствора и доводят до объема 100 мл,2. Приготовление раствора В.0,4 г й,й-метилен-бис-акриламида растворяют в 50 мл дистиллированной воды или физиологического раствора, подогревая до температуры 60 С, добавляют 60 г акриламида, размешивают до полного растворения, Полученный раствор фильтруют, доводят до обьема 100 мл,3, Раствор С и О готовят аналогично примеру 1.4, Приготовление раствора Е.2 мл раствора О вносят в 98 мл раствора С. Из приготовленных растворов готовят реакционную смесь, для этого растворы смешивают в соотношении А;В:С = 1:2:4, что ламида, й,й-метиленбисакриламида и разветвленного полиакриламида 15,0:0,11:0,11.Смесь разливают в чашки Петри. Сополимеризацию проводят на воздухе в течение 10-15 минут до образования геля. Полученный гель отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 ч. Пропитку геля осуществляют мясо-пептонным бульоном в течение 3 ч при температуре 50-60 С, после стерилизации засевают споровую культуру,Полученная среда плотная, обладает хорошими адгезионными свойствами, эластичностью, плотностью, прозрачностью, ровной поверхностью, ярко выраженным эффектом скольжения при посеве микроорганизмов бактериологической петлей. Культура вырастает типичная, хорошо снимается петлей без повреждения поверхности,П р и м е р 4, Для получения полиакриламидного геля используют растворы А, В, С, О такие, как в примере 1.Приготовление раствора Е. 0,1 мл раствора О добавляют к 99,9 мл раствора С и тщательно перемешивают,Реакционную смесь готовят из раствора, взятых в следующих соотношениях: А:В:Е - 1:2:4. Что соответствует весовому соотношению акриламида, М,М-метиленби1837059 Среднее количество колоний выросших на средах по прототипу и заявляемыхСреднее количество выросших колоний(по прототипу) Среднее количество выросших колоний (по предлагаемом способ Посевная дозаколониеобразующих единиц Виды и штаммы микроорганизмов 96 94 94 82 76 85 100 100 100 100 100 100 97 96 94 88 .78 86 52 аогечзЕ соИ К Е соИ М В.сегеоз 504В.зоЬб ИзСачб аИЫсапз Составитель Г,РусскихТехред М.Моргентал Корректор М,Самборская Редактор аказ 2854 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 сэкриламида и разветвленного полиакриламфда 7,0:0,21:0,005,Смесь разливают в чашки Петри и ставт на воздухе. Сополимеризация протекае в течение 10 - 15 минут до образования гля, который отмывают физиологическим раствором в течение 1 часа и пропитывают питательным субстратом для получения питательной среды.Такой гель и питательная среда удовлетворительной плотности, прозрачны, однако имеют неровную, волнистую и верхность, что затрудняет скольжение б ктериологической петли при посеве микр организмов. Полученная питательная с еда не пригодна для работы.П р и м е р 5. Для получения полиакрилмидного геля используют растворы А, В, С, О такие, как в примере 1. Приготовление раствора Е. 10 мл раствора 0 добавляют к 90 мл раствора С и тщательно перемешивают,Реакционную смесь готовят иэ растворв, взятых в следующих соотношениях: АВ;Е = 1;2;4, что соответствует весовому с отношению акриламида, й,й-метиленбио криламида и разветвленного полиакрилаида 7,0:0,21;0,57, Смесь разливают в чшки Петри и ставят на воздухе. Сополимеризация протекает в течение 10 - 15 минут до образования геля, который отмывают физиологическим раствором в течение 1 часа ипропитывают питательным субстратом дляполучения питательной среды.5 Такой гель и питательная среда удовлетворительной плотности слабо прозрачна,имеет матовый цвет, поверхность имеет некоторую шероховатость. Полученнаяпитательная среда не пригодна для работы,10 Формула изобретения1, Способ получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов сополимеризацией акриламида иИ,И -метилен-бис-акриламида в присутст 15 вии инициатора и структурообразователя вФизиологическом растворе до образованиягеля, отмывкой его и пропиткой питательным субстратом, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что. с целью упрощения технологии иэготов 20 пения, в качестве структурообразователяиспользуют разветвленный полиакриламидсо средней мол,м, 7,2 10 ври массовомсоотношении разветвленного полиакриламида, акриламидв, й,й-метиленбисакрила 25 мида, равном 0,028-0,11:7,0-15,0:0,11-021соответственно,2. Способ по п,1, о т а и ч а ю щ и й с ятем, что используют водный раствор разветвленного полиакриламида.30