Способ количественного определения вещества, содержащего хлоралкильные группы

)5 6 01 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ К АВТОРСКО ИДЕТЕЛ СТ ПРЕ- ЩЕГО сударственный медисесоюзный онкологиАМН СССР. Институт биохимии1985, с,10 (рукописьТИ, Я 2496 - 85.тометрический ана 96 - 102,армацевти- преимущеежуточныхнтезе цитозовано кактоты лекарОд ЬЭ тка способаБХФК, отли- ТИВНОГО ОП итостатиков увеличения к ч ается в обраителя при на й кислотой и ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(71) Алма-Атинский гоцинский институт и Вческий научный центр(56) Бисенбаев Э,М. идтов Казахской ССР,1987, с.249-250.Белоконь О.М. ит,26, В 6, с,52-55.Патоцкене Л,А. и дАН Лит, ССР, Вильнюсдепонирована в ВИНИКоренман И.М. Флиз. М.; Химия, 1975, с Изобретение относится к фческой и аналитической химииственно к анализу промпродуктов, получаемых при систатиков и может быть исполпри синтезе, так и в контроле чисственных препаратов.Цельизобретения -разрабооличественного определенияающегося воэможностью селекределения его в присутствии ц- производные БХЭА, а такжеточности определения.Сущность способа заключзовании полиметинового красгревании БХФК с никотиново(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО О ДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СОДЕРЖА ХЛОРАЛКИЛЬНЫЕ ГРУППЫ(57) Сущность: для количественного определения п-бис.(о-хлорэтил)-аминофенилуксусной кислоты в присутствии цитостатиков-производных и-бис ф хлорэтил)- амина готовят пробу путем растворения анализируемого вещества в этилацетате, добавляют к полученному раствору 20- ный раствор никотиновой кислоты в 25 фном водном растворе гидроксида калия до концентрации никотиновой кислоты в фотометрируемом растворе 8. Полученный раствор нагревают на кипящей водяной бане до удаления этилацетата, охлаждают раствор, добавляют уксусную кислоту до концентрации 3 и этанол до концентрации 20-25 оь в фотометрируемом растворе. Фотометрирование раствора проводят при 510 гидроксидом калия. Продукт реакции имеет малиновую окраску Явах 510 нм), не изменяющуюся в течение нескольких суток; интенсивность окраски пропорциональна концентрации БХФК в исходном растворе. Наряду с полиметиновым красителем в растворе образуется глутаконовый альдегид Явах 365 нм), который также может использоваться для селективного количественного определения БХФК; интенсивность поглощения глутаконового альдегида в максимуме полосы поглощения в 6 раз больше интенсивности поглощения полиметинового красителя. Для других производных БХЭА появление окраски в условиях этой реакции не характерно. Поскольку цитоста 1832188тики, производные БХЭА, при нагревании с производными пиридина в щелочной среде не окрашиваются, а окраска БХФК, полученная в этих условиях, интенсивна и устойчива во времени, мы использовали это свойство для определения БХФК в присут-, ствии цитостатиков как точного, селективного метода, Стабилизатором окрашивания является уксусная кислота, При необходимости, определение ЬХФК можно проводить при двух длинах волн - 365 и 510 нм.По сравнению с известными способами определения веществ с хлоралкильными группами, данный способ позволяет надежно определять БХФК в чистом виде, в технических образцах, и что является совершенно новым - определять его как примесь в кортифене, тестифене и др, производных БХЭА.Определение осуществляется следующим образом: навеску препарата (с точностью до 0,0002 г) растворяют в этилацетате. К аликвоте раствора анализируемого образца в пробирке прибавляют 200 раствор никотиновой кислоты в 2570 растворе гидроксида калия и нагревают ее на кипящей водяной бане до испарения этилацетата. После охлаждения в пробирку прибавляют уксусную кислоту, переносят смесь в мерную пробирку и доводят общий объем раствора этанолом до 5 мл, Измеряют поглощение окрашенного раствора не спектрофотометре при длине волны 510 нм или на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (490 нм) в кюветах 1 см, расчет концентрации проводят по калибровочному графику или по известной формуле с учетом поглощения стандартного раствора БХФК. При анализе чистого препарата измерение поглощения проводят при длине волны 365 или 510 нм.Закон Бугера-Бера соблюдается в пределах от 0,1 до 3 мг/мл для полиметиновых красителей (4 х 510 нм) и для глутаконового ал ьдегида Ятпх 365 нм) в пределах от 8 до 40 мкг/мл. Относительная ошибка метода составляют + 0,70.В примерах 1-3 были использованы образцы БХФК серии 911089,П р и м е р 1. Определение БХФК. Точную навеску 0,1280 г БХФ К внесли в мерную колбу, вместимостью 25 мл, растворили в 10 мл этилацетата и довели этим же растворителем объем раствора в колбе до метки. Тщательно перемешали содержимое, перенесли в 3 пробирки по 0,25 мл полученного раствора, прибавили по 2 мл 20 раствора никотиновой кислоты в 25 растворе гидроксида калия, пробирки нагрели на кипящей водяной бане до испарения этилацетата,5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 После охлаждения в пробирки внесли по 0,15 мл уксусной кислоты, содержимое пробирок перенесли в мерные пробирки на 10 мл и смыли остатки с помощью 40 этанола в мерные пробирки. Общий объем довели этим же этанолом до 5 мл, перемещали и измеряли поглощение на спектрофотометре при 510 нм, В расчетах использовали средние значения из 3 измерений, Параллельно проводили определение со стандартным раствором БХФК с известной концентрацией. Раствором сравнения служила смесь реактивов, без исследуемого вещества, используемая для получения окрашенного раствора БХФК,Концентрацию анализируемого вещества Сх(в ) рассчитывали по формуле:ОхСст а 100СхОст ргде Ох - поглощение анализируемого раствора; равное 0,29;Ост. - поглощение стандартного раствора БХФК, 100 ф 6 чистоты равное 0,30;Сст - концентрация стандартного раствора, равная 0,00025 г/мл;а - разведение препаратов, равное 1:500;р - навеска анализируемого препарата - 0,1260 г.Расчет показал, что во взятой навеске содержится 95,87 БХФК,П р и м е р 2. Определение БХФК по глутаконовому альдегиду. Навеску 0,0220 г БХФК внесли в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворили в 10 мл этилацетата и довели этим же растворителем содержимое колбы до метки. После перемешивания отобрали по 1 мл раствора в 3 пробирки, прибавили по 2 мл 20 раствора никотиновой кислоты в 25 ф 4 растворе гидроксида калия и нагревали пробирки на кипящей водяной бане до испарения этилацетата. После охлаждения к содержимому пробирок прибавили по 0,15 мл уксусной кислоты и по 3 мл 40 этанола, размещали и перенесли раствор в мерные колбы вместимостью 25 мл, довели объем содержимого колб до метки, перемешали и измерили поглощение раствора при 365 нм, В расчетах использовали средние значения результатов из 3 измерений, Параллельно проводили определение со стандартным раствором БХФК, Раствором сравнения служила смесь реактивов без исследуемого вещества..Концентрацию анализируемого вещества (в с) рассчитывали но формуле, приведенной в примере 1,Концентрация стандартного раствора равна 0,00004 г/мл;1832188 Составитель Е.ВоробьеваТехред М.Моргентал . Корректор М.Андрушенко Редактор Заказ 2607 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Поглощение анализируемого раствора равно 0,59;Поглощение стандартного раствора равно 0,69;Разведение растворов равно 1:625; Концентрация БХФК во взятой навеске равна 97,16.П р и м е р 3, Определение содержания БХФК в смеси с гормоноцитостатиком кортифеном. Навески 0,0204 г БХФК и 0,9520 г кортифена внесли в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворили в 20 мл этилацетата и довели этим же растворителем содержимое колбы до метки. После перемешивания в 3 пробирки из колбы отобрали по 1 мл полученного раствора, прибавили по 2 мл 20 раствора никотиновой кислоты в 25 растворе гидроксида калия и нагревали пробирки на кипящей водяной бане до испарения этилацетата. После охлаждения в пробирки внесли по 0,15 мл уксусной кислоты, перенесли содержимое в мерные пробирки на 10 мл и смыли остатки с помощью 40 этанола в мерные пробирки; общий объем довели этим же этанолом до 5 мл, перемешали и измерили поглощение на спектрофотометре при 510 нм. В расчетах использовали средние значения результатов иэ 3 измерений. Параллельно проводили определение со стандартным раствором БХФК с известной концентрацией, Раствором сравнения служила смесь реактивов без исследуемого вещества.Содержание БХФК (в г) рассчитывалиОх Сст апо формуле: Хг -ОстПоглощение анализируемого раствора равно 0,198; Поглощение стандартного раствораравно 0,20;Концентрация стандартного раствораравна 0,00016 гlмл;5 Разведение равно 1;125;Содержание БХФК равно 0,0198 г, чтосоответствует 97,05% от взятой навески,Результаты определения БХФК, полученные в примерах 1-3,имеют хорошую 10 сходимость, что свидетельствует о правильности полученных результатов. Ф о р мул а и зоб рете н ия Способ количественного определения 15 вещества, содержащего хлоралкильныегруппы, заключающийся в том, что готовя пробу образца, добавляют к пробе производное пиридина в водном растворе щелочи, нагревают полученный раствор, 20 охлаждают его и фотометрируют, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью возможности селективного определения и-бис-ф-хлорэтил)-аминофенилуксусной кислоты в присутствии цитостатиков - производных и-бис-ф 25 хлорэтил)-амина, а также увеличения точности определения, пробу готовят, растворяя анализируемое вещество в этилацетате, добавляют в качестве производного пиридина 20-ный раствор никотиновой кислоты в 30 25 5-ном растворе гидроксида калия до концентрации никотиновой кислоты в фотометрируемом растворе 8, а полученный раствор нагревают на кипящей водяной бане до удаления этилацетата, затем добавля ют уксусную кислоту и этанол доконцентрации 3 уксусной кислоты и 20- 25 этанола в фотометрируемом растворе и фотдметрируют раствор при 510 нм.