Способ получения ферментного электрода для определения l лактата

, Н.К,Ченас и Литовской АН . ные ферменты./Под р. 1976, изд, УГУ, т.2 ельство СССР 27/30, б 01 й 27/46 ельство СССР 27/28, 30.12.81,ферментного ектроокисленйхромэ Ь 2 на по- ного элвктрода, ется (:лактатом: О 2(вос.)+ пиРУват, ной кислотой на я электроактивГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(56) И м мобил из сванред,Березина И.В. и дс.169-176,Авторское свидетМ 1242803, кл. 6 01 й07,07.86.Авторское свидетМт 894534, кл. 6 01 В Изобретение относится к биохимии, а именно к методам получения ферментных электродов; и может быть использовано в энзимологии для научно-исследовательских целей и в медицине или микробиологической промышленности для электрохимического определения (.-лактата в биологических средах, например в.крови, в целях диагностики.Цель изобретен ия - упрощение процес са,Механизм действияэлектрода объясняется элем восстановленного цитоверхности модифицированЦитохром Ь 2 восстанавливаЦит.Ь 2 Ь,.)+ 1.-лактате Цит.8 ходе обработки сажи азотее поверхности образуютс(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИ ГО ЭЛЕКТРОДА ДЛЯ ОП ЛАКТАТА(57) Использование; анали растворов в медицине для микробиологической пр Цель - упрощение проце рабочего потенциала и уве тельности, Сущность; пр ферментного электрода ци сят на поверхность стеклоу трода, модифицированног предварительно окисленн лоте, которую перед нане род диспергируют в сус содержащей 2-5;ь фтороп 12-20% сажи. 1 ил 3 табл,Я ФЕРМЕНТНОРЕДЕЛЕНИЯ )- з биологических диагностики и в омышлен ности, сса, уменьшение личение чувствии изготовлении тохром Ь 2 нэноглеродного элеко сажей ПМ, ой в азотной.киссением на электпензии ацетона, ластового лака и ные хиноновые группы (0), катализирующие электроокисление цитохрома Ь 2:Цит. Ь 2(вос.) + С( --Цит.Ь 2(ок,) + С(Н 2 онг-ге-гн+, -- , р.д аИзобретение осуществляют следующим образом.Сажу ПМперед модификацией выдерживают в 55-ной азотной кислоте в течение 5 сут при комнатной температуре. После этогО ее промывают водой до нейтральной реакции (рН = 7,0) и высушивают, Смесь приготовленной сажи и раствора фторопластового лака в ацетоне диспергируют ультразауком при 44 кГц в течение 0,5-1 ч. В пОлученную. суСпензию сажи погружают электрод на 3-5 с, затем его сушат, промывает дистиллированной водой и буферным раствором последовательно. На поверхность вадифицираванного сажей электрода1831682 измерений. Промывка электрода и измерение занимает не более 4 мин.П р и м е р 3, Определение концентрации лактата.в биологических растворах,Готовят электрод по общей методике,Определяют концентрацию-лактата в плазме крови и культуральной жидкости выращивания продуцентов вируса лейкоза бы ка аналогично примеру 1, Параллельно Таблица 1 20 25 30 35 40 45 50 рода -0,2 В относительно Ао/АоС 1, концентрация лактата 0,1-0,3 мМ). Данные приведены в табл,2,Видно, что предлагаемый электрод. сохраняет работоспособность не менее 12 сут, в ходе которых произведено не менее 40 определяют концентрацию лактата спектрофотометрическим способом, по восстановлению феррицианида, катализируемому флавоцитохромом Ь 2 при введении исследуемого образца в спектрофотометрическую ячейку. При введении в спектрофотометрическую или электрохимическую ячейку образцы биологических жидкостей разбавляются в 10-40 раз. Полученные данные приведены в табл.З.Как видно из данных табл,З, концентрации-лактата, определенные при помощи ферментного электрода и измеренные спектрофогометрическим способом, практически совпадают, Время определения не превышает 4 мин. Следовательно, полученный электрод может быть применен для определения -лактата в биологических средах.Преимуществом способа является упрощение модификации стеклоуглеродного электрода. Формула изобретения Способ получения ферментного электрода для определения-лактата, включающий адсорбцию цитохрома Ь на слое токопроводящего материала, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения процесса, модификацию электрода проводят сажей, предварительно окисленной в азотной кислоте, при этом Сажу перед нанесением на электрод диспергируют в суспензии ацетона, содержащей 2-5 фторопластового лака и 12-20 сажи.1831682 Таблица 2 Сутки: 8 10 12 100 100 100 100 Относит, ток, : 9070 60 55 50 Таблица 3 К 70 Корректор А. Обруча о Заказ 2550 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета до изобретениям и открытиям при ГКН 113035, Москва, Ж, Рауаская наб., 45 Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина, 10 ьский ко зводственно-и Составит Техред М Р, Пощкенергентал .