Способ оценки устойчивости томатов к альтернариозу

(9)А 01 Н 1/04 ЕТЕНИЯ ки АН ательГОСУДАРСТВЕН 1 ОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР) ИСАНИЕ ИЗОБ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Инегитут экологической генетиССРМ и Молдавский научно-исследовский институт овощеводства(56) Дорожкин Н.А, и др, Селекция на иммунитет, // Проблемы иммунитета сельскохозяйственных растений к болезням.Уинск:Наука и техника, 1988, с. 136-195. Изобретение относится к сельскому хозяйству, в честности к селекции растений на иммунитет к фитопатогенам,Цель изобретения - ускорение и упрощение оценки при сохранении селекционного материала.Способ заключается в том, что пыльцу растений томатов проращивают на питательной среде в присутствии экстракта культуральной жидкости гриба а 1 егпага зоап и устойчивость определяют по относительному проценту длин пыльцевых трубок в опыте и контроле, при этом при значении данного показателя 60 ф, и выше исследуемые генотипы оценивая)т как устойчивые, при значении 30-60 - как умеренно пораженные и при значении менее 30 - как восприимчивые,Р р и м е р. Для получения препарата токсичных метаболитов гриб выращивают в погруженной культуре на среде Чапека-Докса. Для этого в колбы Эрленмейера емко(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ ТОМАТОВ К АЛЬТЕРНАРИОЗУ(57) Использование: сельское хозяйство, овощеводство, фитопатология, Сущность изобретения: устойчивость томатов к эльтернариозу определяют по относительному проценту длин пыльцевых трубок в опыте и контроле, при этом определение ведут путем проращивания пыльцы на питательной среде, содержащей экстракт культуральной жидкости патогена. 2 табл. стью 300 мл наливают по 150 мл среды, автоклавируют 40 мин при 0,5-0,6 атм. избыточного давления, затем после охлаждения инокулируют мицелиальными дисками диаметром 10 мм. Диски вырезают у краев 7-10 суточных колоний на агайизованной среде Чапека-Докса. Колбы с грибом помещают на роторные встряхиватели при 90- 120 об/мин. Спустя 12 суток инкубации при комнатной температуре, отфильтровывают культуральную жидкость, подкисляют до рН 3,0 - 3,5 и эксрагируют равным обьемом хлороформа. После отгонки хлороформа на роторном испарителе при температуре 30 - 40 С получают неочищенный препарат токсинов А,Яоап. Осадок растворяют в дистиллированной воде, готовят необходимые концентрации культурального экстракта, который используют при осуществлении способа.Исследования проводили на двух сортах томатов ЯцЬ,агсс Мах и Персей, а ткже на линиях, полученных методом гибридиза 1824112ции: Л 738/84, Л 738/84, Л 778/84, ЛК30/86. К 30/86. ЯРЕ, Р 1 Союэ 4 Л 738/84.Способ осуществляют следующим образом,С каждого растения выборки (10 образцов) срывают по 1 цветку на одной стадииразвития (первый день раскрытия). Отделяют тычиночные колонки от других частейцветка и помещают в пакет из пергаментнойбумаги для каждого образца. Пакеты оставляют в комнатных условиях для сушки в течение суток, по истечении которых пакетывстряхивают таким образом, чтобы на дноосыпалась пыльца. Пыльцу каждого образцапрепаровальной иглой высевают на искусственную питательную среду, содержащую15-ную концентрацию сахэрозы и0,003-ную концентрацию борной кислотыв дистиллированной воде (контроль) и насреду аналогичного состава, содержащую 200,006-ную концентрацию экстракта культуральной жидкости (опыт), Пыльцу проращивают в термостате при температуре 28 Св течение трех часов. Затем измеряют длинуу 100 случайно выбранных пыльцевых трубок в опытном и контрольном вариантах.Определяютсреднее значение длин пыльцевых трубок для каждого образца в опыте, и контроле, затем вычйсляют относительный процент длины пыльцееых трубок в 30опыте по отношению к контролю.Относительный процент длин пыльцевых трубок определяют следующим обрезом: например, средняя длина пыльцееыхтрубок линии К 30/86 составляет е контроле 35543,09 мкм а в опыте 217,01 мкм,ПД. 2 7,0100 39 96543,09Сопоставляют полученное значение исредний балл порожаемости листьев и процент больных плодов для всех образцов,Рассчитывают коэффициент корреляции.Данные представлены в табл 1 и 2.Иэ табл.1 видно, что с увеличением поражаемости растений снижается относительный процент длин пыльцевых трубок,Таким образом, у более устойчивых образцов рост пыльцевых трубок менее подвержен угнетению токсичным метаболитомфитойатогена. О тесной взаимосвязи признаков свидетельствует высокий коэффициент корреляции г - -0.84 (при критическомуровне показателя для данной выборки0,65), т,к. фактически найденная величинапревосходит этот уровень, установленная 55связь достоверна на 5-ном уровне значимости, что доказывает возможность использования предлагаемого способа длядиагностики устойчивости томатов. Иэ данных таблицы видно также, что если относительный процент роста пыльцееых трубок составляет менее 307 ь, то это соответствует сильному поражению образцов, 30-50 - умеренному поражению, а выше 60 ф, - устойчивым образцам.Из данных табл.2 видно, что обнаруженная тесная связь признаков (ч. = -0,78 при критическом уровне показателя 0,68) свидетельствует о высокой точности способа, т.к. порэжэемость плодов является дополнительной характеристикой устойчивости томатов к альтернариоэу.Использование способа обеспечивает по сравнению с известными способами следующие преимущества.Ускоряется процесс оценки устойчивости томатов к альтернариозу, т.к. используется пыльца, а не взрослое растение с 3-х летней оценкой на искусственном инфекционном фоне, Отпадает необходимость применения живых патогеное е полевых условиях, что устраняет опасность распространения болезни, При длительном культивировании на искусственной питательной среде патоген часто утрачивает вирулентные свойства, е то время, как культуральный экстракт является более стабильным. Создается воэможность оценивать селекцибнный материал до завязывания плодов, не повреждая его. Кроме того, пыльца яеляется самой чувствительной стадией развития растений, при этом экономится время, снижается трудоемкость, т.к. создается воэможность использования выборок порядка 10-10 Формула изобретенияСпособ оценки устойчивости томатов к альтернариоэу, включающий воздействие латогеном на растительный материал и определение устойчивости исследования реакции на патоген по сравнению с контролем, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и упрощения оценки при сохранении селекционного материала, в качестве растительного материала используют пыльцу, воздействие патогеном осуществляют путем проращиеания пыльцы на питательной среде е присутствии 0,005- 0,007 мас. экстракта культуральной жидкости гриба АИегпага эо 1 ап и устойчивость определяют по относительному проценту длин пыльцееых трубок е опыте и контроле, при этом при значении данного показателя 60 и выше исследуемые генотипы оценивают как устойчивые при значении 30-60 - как умеренно поражаемые и при значении мене 30% - как восприимчивые.1824112 Таблица 1 Сравнение устойчивости пыльцы к культуральному экстракту по длине пыльцевых трубок с полевой оценкой устойчивости растений томатов к фитопатогену А.Боап 1 на искусственном инфекционном фоне по пятибальной шкале, Таблиц Сравнение устойчивости пыльцы к культуральномупыльцевых трубок с полевой оценкой поражаемальтернариозом на искусственинфекционном фоне экстракту по длине ти плодов томатов Составитель Л.Мели Техред М,Моргентал янактор З,Ходакова Корректор М.Кере аз 2200 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открыти113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 при ГКНТ СС оиэводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина. 1 О