Способ определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток

)9) ) 55 6 01 г) ЗЗ/533 ЕТЕН зыка ся к меди и аллерго Кровь пацит в лунки пл ГОСУДАРСТВЕ ННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Всесоюзный научный центр радиационной медицины АМН СССР. (56) Иммунологические методы/Под ред, Г.фримеля, М.: Медицина, 1987, с. 294-302. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК (57) Изобретение относит цине, вчастности к иммунологии логии, и Изобретение относится к медицине, в частности, к иммунологии и аллергологии, может быть использовано в целях диагностики и контроля эффективности терапевтического воздействия при различных иммунопатологических состояниях.Цель изобретения - упрощение способа при сокращении травматичности,Указанная цель достигается тем, что у больного забирают кровь из пальца, инкубируют ее в иммунологических планшетах с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, флюоресцентным зондом - раствором тетрациклина, переносят на предметные стекла, готовят мазки и подсчитывают число флюоресцирующих клеток,Способ осуществляют. следующим образом. а, взятую из пальца, вноета по 0,025 мл, В лунк может быть использовано при контроле эффективности терапии при различных иммунных нарушениях. Цель изобретения - упрощение и снижение травматичности способа, Цель достигается тем, что пробу цельной крови пациента инкубируют в им-мунологических планшетах с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, добавляют раствор тетрациклин гидрохлорида. После инкубации переносят суспензию клеток из лунок планшета на предметные стекла и подсчитывают вфлюоресцентном микроскопе число флуоресцирующих клеток по отношению к контрольным пробам. 1 табл,. вносят раствор митогена или аллергена и инкубируют планшет при 37 С в течение 1 ч, Затем в лунки вносят раствор тетрациклина гидрохлорида в конечной концентрации 1,0-2,0 х 10 г/л и инкубируют при 37 С в течение 5-15 мин и переносят суспензию клеток из лунок на предметные стекла.,Проводят учет результатов, определяя спонтанную, митоген- и аллергенезависимую флюоресцентную клетку с определением индекса стимуляции.П р и м е р, У больного Н. (исследование К. 88/431) отбираем из пальца 0,1 мл крови в капилляр, предварительно обработанный раствором гепарина в обычной концентрации, Кровь вносим по 0,025 мл в лунки планшета для иммунологических исследований, Вносим в контрольную лунку 0,025 мл забуференного раствора Хенкса) рН 7;4 (в опытную соответственно 0,025 мл раствора ФГА в концентрации 20 мкг/мл, а также 0.025 мл1805394 ионизирующей радиации при аварии наЧернобыльской АЭС (таблица),Обнаруженная корреляция способа реакцией бласт-трансформации с + Н-тими 5 диновой меткой и реакцией торможениямиграции лейкоцитов позволяет рекомендовать способ для ранней оценки иммунного статуса при различных нарушенияхиммунитета,/10 Формула изобретения Способ определения функциональногосостояния иммунокомпетентных клеток путем инкубации крови больного с неспецифи ческими митогенами или специфическимиаллергенами, последующей регистрации результатов и подсчета индекса стимуляции по отношению к спонтанному уровню активности, о т л и ч э ю щ и й с я тем, что, с целью 20 упрощения и снижения травматичностиспособа, перед регистрацией в среду вносят тетрациклин гидрохлорида в концентрации 1,0-2,0)х 10 г/л и регистрируют число флуоресцирующих лейкоцитов,Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток у больных, пострадавших при аварии Чернобыльской АЭСМ исследова- %светящ.кле- % бластов вния ток по пред- РБТЛлож. способ Индуктор клеточной проли- еаии Индес торможения мигра- ии Индекс стимуляции по Нтими ин 2 ФГА 20,7 30,5 18,0 36,8 44,8 24,2 19,5 26,3 13,5 17,8 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 г Кортизол 1 2 3 4 5 6 . 7 8 9 10 5,0 2,1 4,6 3,9 6,0 1 3,0 1,7 5,3 2,8 3,6 г Стафилококковый антиген 9,3 13,2 16,0 12,5 10,1 17,1 25,1 18,3 1 2 3 4 раствора кортизолэ ( опыт) и 0,025 мл раствора стафилоантигена (опыт), Планшет инкубируем в течение 60 мин при 37 С, после чего вносим в опытные и контрольные лунки по 0,02 мл раствора тетрациклина концентрации 5,0 х 10 г/л, Планшет инкубируем 10 мин. при 37 С, после чего каплю суспензии переносим на предметное стекло, приготавливаем мазки. Учет результатов проводим на флюоресцентном микроскопе Л ЮМАМ Рили аналогичном с использованием длины волны возбуждающего света 380 нм (фильтры ФС-2, БС-3, СЭ 3-24.4) и света флюоресценции 540 нм (запирающие фильтры ЖС, ЖЗС). Определяем число флюоресцирующих зеленым светом лейкоцитов в опытных пробах, по отношению к контрольной и вычисляем индексы стимуляции - контроль 3%, ФГА - 23,5%, кортизол - 2,6%, стафилоантиген - 14,1%, соответственно индексы стимуляции - 7,83, 0,87, 4,70,Способ был применен при исследовании больных, подвергшихся воздействиюс 11,6 21,6 10,4 25,8 17,4 14,6 12,3 12,4 1 1,2 10,0 0,76 1,3 0,7 3,2 2,8 2,4 5.1 3;9 2,4 2,0 2,2 36,3 61,4 32,0 63,5 71,0 42,038,6 30,0 17,4 21,2 0,92 8,7 4,8 12,9 7,3 .8,0 1 6,8 1,0 10,8 6,4 4,0 0,86 20,7 29,5 36.5 25,2 0,66 0,56 0,74 0,60 0,40 0,62 0,78 0,64 0,88 0,80 0,93 0,92 0,950,84 0,87 0,75 0,80 0,98 0,88 0,95 0.93 - 0,70 0.49 0,66 0,60 0,701805394 Продолжение таблицы- коэффициент корре Составитель И, Башкаев Редактор Т.Горячева Техред М.Моргентал Корректор, М.Керецманроизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 4 аз 939 ВНИИП Тираж Подписноеосударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5