Способ работы с контейнерами при консервировании биоматериала

.ч) Р 25 О 3/1 О ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ТЕН ПИСАНИЕ И ОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСта(46) 15,01,92, Бюл. М 2171) Специальное констгическое бюро ь опытнИнститута проблем криодицины АН УССР72) С,И, Ткаченко, А.А,Иванисенко53) 621.565 (088,8)56) Гаврилов О,К., Кулевая заготовка крови и ееМедицина, 1982, с. 68-72 рукторско-технолоюл пооизводг,;дом биологии и крипмеМаотыненко и В,О О,Я, Массокомпонентов. М(54) СПОСОБ РАБОТЫ С КОНТЕЙНЕРАМИ ПРИ КОНСЕРВИРОВАНИИ БИОМАТЕРИАЛАГ 57) Изобретение относится к способам низкотемпературного консервирования биоматериалов, размещаемых в контейнерах, а ние относится к способам низрного консервирования биомазмещаемых в контейнерах, а собам работы с этими контейоложенными в жидком азоте, и применение в медицине, микнаучно-исследовательской ла рактике.эобретения является повышести контейнеров при отогреве твращения затекания в них Контейнер фиксированной формы и ъема заполняют до 0.85 ч. объема подговленным для криоконсервации биоматеИзобрете котемперату териалов, ра именно к спо нерами, расп может найти робиологии и бораторной и Целью и ние сохранно путем предо жидкого дзот Способ оществляют следующим обраименно к способам работы с этигли кон,; г нерами, располагаемыми в жидког;зо 1 е. может нзйи применение в лед цичс л 1,ч,. робиологии и нау но-исследовательской лабораторной практике. Целью изобр ения является повышение сохранности кон-,".инеров при отогреве путем предотвращения эатекания в них жидкого азога, Контей ер заполняют жидким биоматериапом через штуцеры, перекрывают последние пробка ми, переворачива от и выдерживают ш.:- рами вниз не менее двух минут. ПГ этол из штуцеоов выходит воздух и они за; опн:ю 1- ся жидким бксматериалом, которь й пр погружении в азот замерзает и обрп,уе твердо ельный затвор в., три 1;ту оз. 8 резуль га ге достигае 1 ся герметизацико, тейнера, и жидкий азот не проникэ г л не заполненную биоматериалом час; ь контейнера. риалом, например клеточной суспанзией, через один из открытых штуцеров. Штуцер закрывают крышкой или пробкой так, чтобы Одостигалась изоляция содержимого контсй- О нера от внешней среды. Контейнер ус.анавливают и выдерживают вниз штуцерали так Ос чтобы штуцеры и пространство внутреннего объема контейнера над штуцерами были запогнены клеточной суспензией, и выдержи 1 Ъ вают не менее 2 мин так, чтобы стенки контейнера, образующие пространстпс, свободное от клеточной суспензии. очистились от биологического материала за сче 1 его стекания. Не меняя положения, кон-е; - нер помещают в жидкий азот и подвергают охлаждению в соответствии с реж 1 лом, необходимым для замораживания клегочнс,11705676 Формула изобретенияСпособ работы с контейнерами при ксн сервировании биоматериала, предусматривающий заполнение контейнеров жидким биоматериалом через штуцеры, перекрытие 50 последних пробками, помещение контейнеров в жидкий азот, хранение и отогрев, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения сохранности контейнеров при 55 обеспечивается сохранность контейнера в отогреве путем предотвращения затекания области тефлоновой пробки, что обусловлено неполным заполнением контейнера вяэв них жидкого азота, после заполнения биоматериалом и перекрытия пробками конкой массы эритроцитного концентрата, тейнеры устанавливают и выдерживают суспензии, Такое их положение обеспечивает формирование в штуцерах ледяного затвора из биоматериала, После замораживания биоматериала контейнеры помещают на хранение в жидкий азот. Затвердевший биологический материал изолирует контейнер от последующего эатекания азота при хранении в жидком азоте, При необходимости деконсервации из жидкого азота контейнер переносят в нагревающее ус 1 ройство, например водяную баню, с заданной гемпервтурой, размещая вверх или вниз штуцерами до достижения оттаивания биологического материала, штуцеры открывают и биомагериал используют по назначению,П р и м е р. Эритроциты получали из донорской крови, заготовленной на среде Тлюгицир" путем центрифугирования 400 мл донорской крови при 2000 об/мин 10 мин, удаления слоев плазмы белых клеток крови респирац 1 ей, Осадок эритроцитной массы смешали с криоконсервантом в равных объема, центрифугировали 1800 об/мин 1 О мин. Недостаточный слой (0,8 ч,) удалили, остаток перемешали и перенесли 230 мл из флакона в алюминиевый контейнер(270 л) для замораживания крови Штуцеры завинтили тефлоновыми пробками, Кзнтейиер РереОернули вниз штуце ",ми и поставили в штатив на 2 мин, после чсго перенесли в жидкой азог л заморозили содержимое контейнера, располагая контейнер в жидком азоте вниз штуцерами, и оставили на хран.ние в течение 120 дней. Контейнер извлекали из жидкого азота и поместили в воду на 60 с при 42 С. Тефлоновые пробки свинтили со штуцеров и произвели отмывание размороженных эритроцитов растворами с применением центрифугирования известным способом. Отмытые эритроциты ресуспендировали во взвешивающем растворе в соотношении объемов 1:1, Контейнер отмыли от остатков эри роцитной массы, стерилизовали 3 ч при 140 С с использованием повторно в соответствии с предложенным способом криоконсервации. В отмывочных средах, эритроцитной массе и ресуспендирующем растворе определили содержание гемоглобина и установили, что в процессе криоконсервации разрушилось 11 7 ь эритроцитов, а содержание свободного гемоглобина составило 70 мгв ресуспендирующей среде,Время выдерживания контейнера в перевернутом положении менее двух мину. недостаточно, поскольку в этом случае не 5 10 15 20 25 30 35 40 45 затеканием в него жидкого азота. Это обусловлено тем, что в условиях погружения металлического, главным образом алюминиевого, контейнера с биоматериалом, частично заполняющим контейнер, происходит бысоое охлаждение металлических частей и ри медленном охлаждении пробок, выполненных из фторопласта, При этом осуществляется конденсация воздуха в незаполненном биообъектом объеме и образование вакуума в этой части. Если контейнер расположен штуцерз. ми и крышкой вверх или если он выдеожэн в и ревернутом положении недостаточное время, происходит втягивание жидкого азота в незаполненную часть контейнера через охолости, образующиеся между пробкой и штуцером, особенно при изношенной резь. бе фторопластовой пробки.При отогреве кон геинеров с биоматеоиалом жидкий азот при испарении, превра. щаясь в газ, увеличивает обьем в 700 раз, Быстрое ь .ение объема газа в незапол. ненной биоматериалом части контейнера вызов вает оазруьчение или деба рмацию контейнера.При вцге;,жке контейнеров ",еред помещением в юлдкии а "от шт .,рвач вниз более 2 мин и", штуцерпв выходит воэдуштуцеры заполняю ся жидким биомггериалом ) КСТП ь и2 И П- р жени и Э азоТ замерзает и образует тердотельный га твор внутри ш г, цера кото.ый имеет плот; ое а.1 гезив се гцеплени". Со сте ка. ми штуцера вследствие лип:ости жидкой фазы биоматеоиала:з сущестаснного коэффициента оасширения биоматериала вследствие замораживния.8 резуль 1 гт;:остигаеся гег.;о иззцня контейнера и жидкий азот .а и,;ни ае в незаг 1 олненную Сиоь",зтериалсм часть контейнера,Данный способ работы с кп,тгйне;а ми при консервировании б" аериала обеспечивает высокую сохранность контейнеров и содержащегося в -гк биомзтериала,17055 6 Составитель И.ШабалинаРедактор М,Васильева Техред М.Моргентал Корректор Т,Малец Заказ 187 / Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 штуцерами вниз не менее двух минут, и а жидкий азот помещают в таком же положении для формирования в штуцерах ледяно эзатвора из биомвтериала.