Способ хранения фрагментов талломов анфельции с карпоспорами

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИ 9) П 084 А 1 РЕСПУБЛИК 33 00 55 ОМИТЕТОТКРЫТИЯМ ГОСУДАРСТВЕННЫПО ИЗОБРЕ 1 ЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР У СВИДЕТЕЛЬСТВУ АВТОРСКО(71) Институт физиологии растений АНСССР и Северное отделение Полярного института рыбного хозяйства и океанографии(56) Кап бег Меег,3,Р. е 1 а 1, Сгуоргезегчатопо 1 ОгасИага тйчайа 1 (ВЬоборЬу 1 а) апб йеойег гпасгорйус гпаге а 19 ае - рЬусоо 9 П,1984, ч 123, М 2, р. 195-202.(54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ФРАГМЕНТОВТАЛЛОМОВ АНФЕЛЬЦИИ С КАРПОСПОРАМИ(57) Изобретение относится к марикультуреводорослей-макрофитов, а именно к методам хранения и посадки их посевного матеИзобретение относится к марикультуре водорослей - макрофитов, а именно к методам хранения и посадки их посевного материала, в частности спороносных.зон талломов, и может быть использовано в лабораторном и промышленном выращивании этих водорослей, а также в селекции новых их форм с целью получения сверхпродуцентов и резкого увеличения съема продукции с плантаций и в промышленных цехах.Морские водоросли - макрофиты таксономически относятся к нескольким разным типам низших растений и отличаются сложным длительным онтогенезом с неоднократным чередованием полового и бесполого размножения и сменой гаметофитного и риала, и может быть использовано при лабораторном и промышленном выращивании водорослей. Целью изобретения является повышение выхода жизнеспособных карпоспор. Выделенные фрагменты талломов с карпоспорами помещают в контейнеры, добавляют диметилсульфоксид с концентрацией сахарозы от 10 до 20, охлаждают контейнеры со скоростью 0,4-0,5"С мин. По достижении температуры замерзания раствора осуществляют инициацию образования кристаллов льда, после чего стабилизируют температуру среды, окружающей контейнеры, на время, необходимое для выравнивания температуры внутри и снаружи контейнера, Затем контейнеры помещают в жидкий азот и хранят необходимое время, После этого проводят оттаивание контейнера и разбавление криопротектора. 2 табл. спорофитного поколений, Цикл развития за 0 нимает несколько лет, а пик выхода капроспор в условиях естественных зарослей продолжается у анфельции не более двух 00 недель, причем не одновременно,у разных Фь растений, и карпоспоры в первые же часы прикрепляются к песку дна, иначе они погибают. Все это затрудняет марикультур и в д особенности лабораторно-промышленное выращивание этих растений и селекционногенетическую работу с ними. Между тем потребность в такой работе большая, так как природные запасы наиболее ценных для человека видов уже истощены. Это полностью относится и к Ап 1 еШа рсаа, принадлежащей к типу красных водорослейвозвращения ее тотчас же обратно в камеру замораживателя, температуру в которой стабилизируют в течение 10 - 20 мин. Этот период времени необходим для выравнивания температуры в контейнерах, где в момент инициации . происходит пик кристаллизации, с температурой в камере заморакивателя, Далее контейнеры помещают в жидкий азот, Хранение при столь низких температурах (-196 С) может быть практически неограниченно длительным, так как биохимические процессы и перестройка кристаллов льда полностью исключены,Оттаивание контейнеров проводят путем встряхивания в воде при 40 С до почти полного исчезновения последнего кристаллика льда, затем их быстро помещают в ледяную баню и переносят в холодильную камеру, где их содержимое постепенно разбавляют в 10 - ЗО раз и фрагменты талломов высаживают в чашки Петри. Выходящие из нематециев фрагментов карпоспоры, пережившие экстремальную процедуру глубокого замораживания, прикрепляются непосредственно к дну чашек, где и прорастают. Через 7 - 10 дней удаляют фрагменты талломов и полностью меняют воду в чашках. В дальнейшем смену воды производят каждые 10 дней или помещают чашки в культиватор с проточной аэрированной морской водой. Выжившие споры формируют типичные проростковые трубки и диски тетраспорофитов (табл,1 и 2).Табл,1:показывает, что процент проросших спор, формирующих нормальные диски, увеличивается в результате снижения скорости замораживания на первом этапе процесса и благодаря введению в состав криопротектора сахарозы.Из табл,1 и 2 видно, что наилучший и высокий (924 проросших карпоспор) результат был получен при скорости замораживания на первом этапе 0,4 - 0,5 Смин и при концентрации сахароэы 150 .Таким образом, предлагаемый способ позволяет хранить и высаживать фрагменты талломов анфельции с достаточно высокой эффективностью формирования карпоспорами растений-тетраспорофитов, Использование изобретения обеспечит хозяйственников и исследователей посевным материалом анфельции в любое удобное для них время и в необходимь.х количествах,т и анфельции с карпоспорами, предусматривающий сбор спороносящих растений, выделеййоборйуа) и являющейся единственным источником агар-агара - студнеобраэующего вещества - важного и дефицитного сырья для медицинской, пищевой и кондитерской промышленности.Целью изобретения является повышение выхода жизнеспособных карпоспор,Способ осуществляют следующим образом.Собирают спороносящие растения ан фельции, выделяют фрагменты талломов с , карпоспорами, помещают их в контейнер, добавляют раствор криопротектора - диметилсульфоксид (ДМСО) в концентрации 11;7 с сахарозой в концентрации 10 -20, охлаждают контейнеры со скоростью 0,4 - 0;5 Смин, После достижения температуры замерзания раствора инициируют образование кристаллов льда с последующей стабилизацией температуры среды, окружающей контейнеры, на период времени, необходимый для выравнивая температуры , внутри и снаружи контейнера. После этого контейнеры помещают в жидкий азот и хранят необходимое время. После этого проводят оттаивание контейнеров и последующее разбавление криопротектора,По завершении этих операций фрагменты талломов готовы к высаживанию и проращиванию,П р и м е р. Отбирают женские растения со спорангиями - нематециями в период массового созревания и выхода карпоспор. Талломы растений затем содержат в естественной, постоянно аэрируемой морской воде при 4-8 С и освещении 1500 - 2000 лк белым светом люминесцентных ламп. Вырезают фрагменты талломов диаметром 0,8-1,2 мм и длиной 2-3 см с нематециями. В состав криопротектора - диметилсульфоксида вводят сахарозу в количестве 15+ 5, В опытах используют пастеризованную (стерилизация 35 мин при 68 +1 С) естественную морскую воду. Фрагменты вместе с раствором криопротектора переносят в полиэтиленовые контейнеры емкостью 1 мм, которые помещают в ледяную баню, Вкладывают контейнеры в плоские стальные тонкостенные перфорированные кассеты и помещают в камеру программного замораживателя.Программа замораживания включает: первоначальное охлаждение со скоростью 0,4 - О,рС/мин до точки замерзания раствора, которая рассчитывается заранее в зависимости от его концентрации. Затем проводят инициацию кристаллизации путем очень быстрого (0,5 й 0,2 с) погружения кассеты с контейнерами в жидкий азо 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Ф о р мул а и зоб рете н и яСпособ хранения фрагментов талломов1694084 Таблица 1 Число карпоспор (;ь), прорастающих вполне нормально после глубокого замораживания,хранения и оттаивания, в зависимости от скорости охлаждения, О. словия прототипа как по скорости, так и по добав аблица 2 исло карпоспор (Я, прорастающих вполне нормальн скоростью 0,4 - 0,5 С/мин на первом этапе, в зэвиси растворе криопротектопосле глубокого замораживания с ости от концентрации сахарозы в Составитель О, КорженкоРедактор А, Маковская Техред М.Моргентал Корректор Т. Кол аказ 4102 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 роизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ние фрагментов талломов с карпоспорами, помещение их в контейнеры, добавление в контейнеры раствора криопротектора, в качестве которого используют диметилсульфоксид, охлаждение контейнеров, помещение их в жидкий азот, оттаивание и последующее разбавление криопротектора, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода жизнеспособных карпоспор, раствор криопротектора содержит сахарозу в концентрации от 10 до 20, охлаждение проводят со скоростью 0,4-0,5 С/мин, при атом во время охлаждения после достижения температуры замерзания раствора 5 осуществляют инициацию образованиякристаллов льда в растворе с последующей стабилизацией температуры среды, окружающей контейнеры, на период времени, необходимый для выравнивания температуры 10 внутри и снаружи контейнера.