Способ диагностики хронической инфекции

69069 СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 19) ( ЕИ Б ТЕН К АВ ОМУ С ТЕЛЪСТВ ьский институ логии им; почет АМН СССР и 1- й институт им Вуаьфович, Г,во С 0,19 ИКИ НИЧЕ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО. ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР 1(54) СПОСОБ ДИАГНОСКОЙ ИНФЕКЦИИ Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам иммунодиагностики хронических инфекционных заболеваний, и может быть использовано для диагностики заболеваний бактериальной ЭТИОЛОГИИ.Цель изобретения -упрощение способа диагностики хронических инфекций за счет выделения антигена из иммунных комплексов, циркулирующих в сыворотке крови.Способ диагностики хронической инфекции, основанный на антигенной харак- теристТ) ке, циркулирующих иммунн ых комплексов, иллюстрируется следующими примерами., П р и м е р 1. Больная П,поступила с диагнозом эритематозно-геморрагическая рожа левой голени, рецидивирующая. Сыворотку крови обследуемой в объеме 200 мкл смешали с боратным буфером рН 8,4 в соотношении 1:25, добавили полиэтиленгликоль я)5 А 61 В 10/00, 6 01 4 33/53(57) Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам иммунодиагностики хронических инфекционных заболеваний. Целью изобретения является упрощение способа за счет выделения анти- гена из иммунных комплексов, циркулирующих в крови. Для этого к сыворотке крови обследуемого последовательно добавляют боратный буфер рН 8,4 в соотношении 1;25, добавляют полиэтиленгликоль с мол, м, 6000 до конечной концентрации 3,5;4, инкубируют на холоде, центрифугируют, полученный преципитат отмывают 3,5 Ж -ным полиэтиленгликоль-бооатным буфером, наносят на стекло, высушивают на воздухе, фиксируют этаном и исследуют в иммунохимической реакции. мол. м, 6000 до конечной концентрации 3,5, инкубировали в течение 18 ч при 4 С, центрифугировали в течение 20 мин при 20000 д, Полученный преципитат отмыли 3,50/-ным пплизтиленгликоль-боратным буфером при тех же условиях, поместили на предметное стекло и высушили при комнатной, температуре на воздухе, фиксировали 960 этанолом и исследовали в реакции иммунофлуоресценции. При исследовании установили наличие антигена-форм стрептококка группы А, который не выявлял.ся в РПГА и РАГА, и диагностировали хроническое инфицирование-формами стрептококка,П р и м е р 2, Больная 3, поступила с диагнозом эритематозно-булезная рожа правой голени, рецидивирующая. В первый день болезни жалобы на слабость, головную боль, ломоту в теле, тошноту, красноту и отек на коже правой голени. Болезнь проте 16906915 10 15 кала остро: озноб, температура до 39,5 С, слабость, тошнота, боли распирающего характера в области правой голени, через 2-3 ч появились краснота, отек, боли в правой голени, на 2-й день на конце голени появились пузырьки с сероэным содержанием,Исследования антигенов проведены также, как в примере 1 на 2,10,15 дни болезни, через 1,3 месяца после выписки из стационара. Во всех случаях выявлены антигены-форм стрептококка, Диагностированохроническое инфицирование Е-формамистрептококка. Через 6 мес. после выписки у больной развился рецидив заболевания.П р и м е р 3. Больная Л.,39 лет(историяболезни 1739), страдающая часто рецидиви, рующей рожей правой нижней конечности втечение 7 лет, поступила в отделение с ди-.агнозом: эритематозная рожа правой нижней конечности, часто рецидивирующая.Получала бензилпенициллин по 500 000 ЕД 6 раз в сутки в/мышечно в течение 8 дней.Общее состояние стало удовлетворитель - йым: на 3-й день болезни, лихорадка длилась3 дня, эритема исчезала на 4-й день болезни, отек на 8-й день болезни, Региональныйлимфоаденит сохранялся до б-го дня болезни, На третий день болезни титры антигенов в РАГА составили: антиген бактериальной формы стрептококка 1:16, антиген-форм (свободный) 1;16, антиген в составе ЦИК:96, На 29-й день болезни титры составили 1.0, 1:0 и 1:64 соотцетственно. Исследование преципитатов, полученых ПЭГ, на присутствие антигена Е-форм стрептококка в составе ЦИК в укаэанные сроки показало положительный результат (на +2)Ранний рецидив эритематозной рожи правой нижней конечности развился на 10-й день болезни.П р и м е р 4. Больной В 39 лет(историяболезни Р 3858), страдающий часто рецидивирующей рожей левой голени в течение 3 лет, поступил в стационар с диагнозом; эритематозная рожа левой голени, часто рецидивирующая, Получал бензилпенициллин в дозе 500 000 ЕД 6 раз в сутки в течение 9дней в/мышечно, Исследования сывороткикрови проводили на 2,9 и 15-й дни болезни, В первые два срока был обнаружен свободный антиген Е-форм стрептококка, на 15-й лень - в составе ЦИК (методом преципитации ПЭГ), Результаты диссоциации ЦИК подтвердили положительный результат, свидетельствующий о наличииспецифических ЦИК, антиген-Форм в составе ЦИК обнаружен в титрах в РАГА 1:60. Присутствие специфических ЦИК при отсутствии свободного анти гена указывало на возможность развития рецидива. После ле 20 25 30 35 40 45 50 55 чения линкомицином, действующим на 1- формы стрептококка, в дозе 0,5 г каждые б ч в течение.7 дней антигенов :форм как в свободном состоянии, так и,в составе ЦИК обнаружено не было, На протяжении 2,5 лет наблюдения у больного не было зарегистрировано рецидива рожи,П р и м е р 5, Больная 33 лет (история болезни 154) поступила в больницу на 10-й день болезни с диагнозом: двусторонняя пневмония, Был назначен пенициллин в течение 7 дней, затем ампициллин в течение 6 дней, состояние - медленная динамика. На 26-й день было проведено исследование на микоплазменную инфекцию. Был выявлен антиген М. рпецтоп 1 ае в составе ЦИК методом преципитации иммунных комплексов 3,5ПЭГ (крупные комплексы, +3) и проведено лечение эритромицином в течение 6 дней, Через 7 дней повторное обследование показало наличие специфических ЦИК в сыворотке крови больного (на 2+, более мелкие), Повторное лечение эритромицином дало положительные результаты: состояние больного нормализовалось, антиген М, рпецгпоп ае отсутствовал как в составе ЦИ К, таки в свободном состоянии.П р и м е р 6, Больной Ш 11 месяцев (история болезни 337), поступил с диагнозом: бронхит на 8-й день болезни, Получал оксициллин, полимиксин, эффекта не наблюдалось. На 12-й день болезни было проведено обследование с целью выявления микоплазменной инфекции. В РАГА были выявлены следовые количества антигена М. рпец паол ае, что не давало возможности четко поставить диагноз: респираторный .микоплазмоз. Исследование на присутствие специфических ЦИК методом осаждения их ПЭГ и исследованием преципитата в РИФ показало наличие большого числа комплексов (2+), содержащих антиген М, рпеоаопае. Была проведена специфическая последовательная терапия: рифампицин и эритромицин в дозах 10 и 30 мг/кг соответственно в течение 6 и 7 дней, На 14 день отмечено значительное улучшение, специфических ЦИК не обнаружено. На 28-й день ребенок выписан в удовлетворительном состоянии, в течение последующих 6 месяцев обострения не наблюдалось.П р и м е р 7. Больная Анита Ш., поступила в отделение с диагнозом: ревматоидный артрит (хроническая форма), Было проведено противовоспалительное и гормо-. нальное лечение с использованием бруфена и гидрокортизона по общепринятой схеме в течение 1,5 месяцев. Улучшение состояния на Фоне проведенной терапии не наблюдалось, Перед изменением курса лечения бы1690691 Составитель Ю. КононенкоТехред М.Моргентал Корректор О,Кундрик Редактор А.Дол и н ич Заказ 3872 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина, 101 ло проведено обследование на микоплазменную инфекцию. В РАГА антигены микоплазмь не обнаружены, микробиологический результат отрицательный. Выделение ЦИК,5 ф ПЭГ и исследование преципитата в РИФ показало наличие в иммунных комплексах антигена М, 1 егееп 1 эия. Параллельно было проведено диссоциирование ЦИК, в диссоциированных образцах в РАГА обнаружен антиген М. 1 еппеп 1 аоз в титре 1;104, Рекомендовано лечение препаратами тетрациклина в течение 2 нед. Через 15 дн отмечено улучшение состояния больной и снижение клиниколабораторных показателей патологического процесса. С цельюпредупреждения рецидивов больной рекомендовано периодическое обследование на присутствие специфических ЦИК и поддерживающая терапия,Способ обеспечивает большую информативность за счет выявления общих иммунных комплексов и специфических антигенов, прост и доступен, позволяет своевременно диагностировать наличие хрони-, ческой инфекции, назначать соответствующее лечение и снизить число случаев рецидивов заболевания.5 Формула изобретения Способ диагностики хронической инфекции, включающий смешивание сыворотки крови с буфером, выделение антигена с 10 последующей его идентификацией в имму-нохимической реакции и вынесение суждения,отличающийся тем,что,с целью упрощения способа, в качестве буфера используют боратный буфер рН 8,4 в соотно шении 1;25, а для выделения антигенадобавляют раствор полиэтиленгликоля с мол, м. 6000 до конечной концентрации 3,5 о , инкубируют нэ холоду, центрифугируют, преципитат отмывают 3,5 -ным поли этиленгликоль-боратным буфером,помещают на стекло, высушивают при комнатной температуре на воздухе и фиксируют этанолом.