Способ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ ПУБЛИК 5 А 61 В 1 ЫГ 315-й В научнО- ститут СПО- ФОРМ нарии, собнокже мотносится к ветер елению жизнесп гельминтов, а та ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ИСАНИЕ И ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1(71) Северо-Кавказский зональныйисследовательский ветеринарный ин(56) Авторское свидетельство СССРМ 1093324, кл. А 61 В 10/00, 1984.Авторское свидетельство СССРВ 1337057, кл. А 61 В 10/00, 1987(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНСОБНОСТИ НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХЦЕСТОД(57) Изобретение оив частности к опред ости яиц и личинок Изобретение относится к ветеринарии, в частности к определениюжизнеспособности яиц и личинок гельминтов, а также может быть использовано в медицине и является дополнительным к основному авт. св, Ив 1337057,Цель изобретения - увеличение продолжительности активного состояния неполовозрелых форм цэстод.П р и м е р 1. Для активизации яиц цестод применяют 2 ф-ный водный раствор соляной кислоты или 0,2-ный водный раствор едкого калия и активизирующий раствор, имеющий следующий состав пищеварительных ферментов на дистиллированной воде, г,: панкреатин медицинский 1,2, сода пищевая 1,3, желчь овечья 20. Растворы рекомендуется использовать не ранее, чем через 2 ч после приготовления, Активность его сохраняется 10 ч при комнатной темперэтужет использоваться в медицине. Цель изобретения - увеличение продолжительности активного состояния неполовозрелых форм цестод, Указанные формы цестод обрабатывают водным раствором едкого калия или соляной кислоты с последующей обработкой активизирующим раствором. Инкубацию цестод проводят при температуре окружающейсредыот 47 до 178 Свтечение 5- 180 с, а затем на них воздействуют инфракрасным излучением электрической лампы в 200 Вт с температурой воздуха 32-38 С. Данный способ позволяет продлить активное состояние зародышей до 4,6 - 5,0 мин, увеличить частоту их сокращений в 1,2 - 1,6 раза, обеспечить 100 выход активизированных онкосфер и протоско- Я лексов цестод. 2 табл. ре и 36 ч при хранении в холодильнике при температуре воздуха 5 - 7 С.Зрелые членики цестод М. гпцЮсорз спомощью препаровальных игл освобождают от яиц, к яйцам добавляют воду и получаю суспензию яиц цестод, хранящуюся в холодильнике в физрастворе при температуре воздуха 5-7 С,На предметное стекло с лункой помещают с одной каплей воды 100-150 яиц М.воЮсерэ, затем вливают 1 каплю 2-ного водного раствора соляной кислоты и ставят в термостат при температуре воздуха 62 С.Через 2 мин пробу достают и добавляют в нее 6 капель активизирующего раствора и снова помещают в термостат при той же температуре на 2,5 мин. Затем пробу достают, ставят нэ предметный столик микроскопа и освещают электрическойлампой 200 Вт, установленной на расстоянии от 5 до 35 см от пробы сроком на 3- 5 мин и смотрят под микроскопом (объектив х 8, окуляр х 15) нд.содержание освободившихся от оболочек яйца онкосфер и на их подвижность,В качестве контроля берут пробу с яйцами М, щцэсера и подвергают воздействию 2-ным водным раствором соляной кислоты и ставят в термостат при температуре воздуха 62 О С продолжительностью на 2 мин. Затем в пробу вливают активизирующий раствор и инкубируют в термостате при той же температуре воздуха с экспозицией 2,5 мин, после чего исследуют под микроскопом при температуре воздуха 26 О С,Результаты отображены в табл.1, из которой видно, что в опытных пробах яиц под воздействием электрической лампы с увеличением температуры воздуха до 34-38 С соответственно увеличились продолжительность активного состояния и число их движений в 1 мин в 1,2-1,6 раза; при 40,5 С показатели интенсивности жизнедеятельности были близки к контрольной пробе и при 46 С интесивность движения ниже, чем в контроле.П р и м е р 2, Для инкубации протосколексов цестод применяют тот же активизирующий раствор пищеварительных ферментов.На предметное стекло с лункой вливают с 1 - 2 каплями суспензии протосколексы Е. огапЫозоз (40 - 60) экземпляров при комнатнойй температуре воздуха, зародышевые капсулы с протосколексами разрывают с помощью препаровальных игл. Добавляют 5-6 капель активизирующего раствора и помещают на предметное стекло в термостате при 62 С на 1 мин, Затем пробу вынимают из термостата, помещают на предметный столик микроскопа МБС (объектив х 2 и х 4, окуляр х 8), подвергают инфракрасному воздействию электрической лампой 200 Вт на расстояние от пробы протосколексовот 5 до 25 см в продолжении 3 - 4 мин и одновременно ведут подсчет подвижных и вывернутых зародышей,В качестве контроля берут предметноестекло с лункой с 1 - 2 каплями протосколексов Е, цгапцозм (40-60 экземпляров) изсвежевзятых эхинококковых цист и помеща 5 ют в термостат при 62 С на 1 мин, послечего пробу вынимают. и смотрят под микроскопом при температуре воздуха 26 С. Определяют количество активизированныхпротосколексов, в том числе подвижных и10 вывернутых,Результаты отображения в табл,2, из которой следует, что в опытных пробах протосколексов под воздействием электрическойлампой на разных расстояниях от объ 15 екта сувеличением температуры воздухадо 32 - 35,5 ОС соответственно увеличилисьпродолжительность активного состояния зародышей и частота их сокращений в 1,3 -1,4 раза; при температуре воздуха 38 ОС20 продолжительность их активного состояния близка к контрольной пробе,Таким образом, иэ табл,1 и 2 следует,что при инфракрасном воздействии электрической лампой 200 Вт на онкосферы и25 протосколексы цестод в конечной стадии ихактивизации с температурой воздуха 32 -38 С продолжительность активного состояния и частота сокращений зародышейувеличились в 1,2-1,6 раза, При этом содер 30 жание активизированных онкосфер и протосколексов цестод было 100;-ным.Данный способ можно использоватьдля определения максимального срока выживаемости яиц и протосколексов цестод во35 внешней среде с большей достоверностьюв связи с увеличением интенсивности жизнедеятельности активизированных цестод,а также для культивирования их ларвальныхи ленточных стадии.40 Формула изобретенияСпособ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод по авт,св. М 1337057, о т л и ч а к щ и й с я тем,что, с целью увеличения продолжительно 45 сти активного состояния неполовозрелыхформ цестод, после инкубации на них воздействуют инфракрасным излучением стемпературой воздуха 32 - 38 С.( Интенсивность активизации онкосфер М ПробаОсвобо- Подвиждилось ных оболочек яйца Число движений онкосфер в мин. Продолжительность движенияонкосфер,мин Таблица 2 Интенсивность активизации протоско- Количество активилексов зированных проосколексов,Температура воздуха,В ПробаПодвижны." В том числе вы- вернутых Число движенийпротосколексов вмин. Продолжительность движения протосколексов,мин 303235,5 38 25 15 10 5 100 100 100 100 100 100 100 100 43:ф 5,3 55+6,5 60+8,5 42%7 Конт ольная и оба 100 40,0 26 3,2+0,5 Составитель Е.ДмитриченкоРедактор М,Недолуженко Техред М.Моргентал Корректор Т.Палий Заказ 2475 Тираж 444 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-З 5, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Расстояние от электрической лампы 200 Вт до яиц цестод,см 35 25 18 14 9 5 Расстояние от электрическойлампы 200 Вт до про- тосколексов,см 32,0 34 36 3840,5 4627 Опытные пробы3,2 й 1,1 4,0+0,8 4.5+0,5 4,8+0,9 3,4 Ю 5 1,6+0,1 3,0+0,6 Опытные пробыЗ,ЗЮ,74,1+0,34,5 0,63,6+0,5 10,0,1 16,0+1,9 18+0,8 20+1,5 15 й 1,1 10 1,2 13,0 ф 1,1 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100