Способ диагностики состояния стресса у птиц

) (1) 51)5 6 01 М ЗЗ /4 ИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ОПИС ГОСУДАР СТВ Е ННЫ И КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) ЯИ 9 е Н.Я. Роузоо 9 саФ зтгезз Фп Ыо- Всзепсе, 1980, ч.30, ЛЕ 8, р,529-534. Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано для оценки состояния птиц при действии различных стресс-факторов, а также контроля за эффективностью средств, аттенуирующих стресс.Цель изобретения - повышение точности способа.П р и м е р 1. Определяют уровень миграционной активности лекоцитов (МАЛ) одним из известных методов, например капилля рным.Для этого определенный обьем отобранной периферической крови смешивают в пробирке с равным объемом раствора Хэнкса. Осторожно пипетируют полученную смесь и инкубируют в термостате при 37 С в течение 30 мин, Извлекают из термостата, еще раз пипетируют и набирают в стеклянные капилляры с внутренним диаметром 1,0 - 1,5 мм длиной 40 - 50 мм, Один из концов последнего заклеивают смесью воска и пластилина и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 - 20 мин,По окончании центрифугирования капилляры с содержанием, расслоившимся на форменные элементы и жидкую часть, со(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ СТРЕССА У ПТИЦ(57) Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано для оценки состояния птиц при действии различных стресс-факторов, а также контроля за эффективностью средств, аттенуирующих стресс, Цель изобретения - повышение точности способа, В отобранных пробах периферической крови определяют уровень миграционной активности лейкоцитов до и после действия стрессорного фактора, сравнивают их и по отклонению судят о наличии общего адаптационного синдрома, 3 табл,стоящую из плазмы и раствора Хэнкса, с помощью пластилина укрепляют в горизонтальном положении на предметном стекле, На микроскопе с помощью окулярмикрометра производят измерения длины столба форменных элементов. Предметные стекла с капиллярами в горизонтальном положении помещают в термастат при 37 С на инкубацию в течение 16-18 ч, При увеличении продолжительности инкубации в капилляре образуются пузырьки воздуха, что затрудняет дальнейшие измерения и уменьшает точность определения МАЛ,По завершении инкубации, предметные стекла с капиллярами извлекают из инкубатора и проводят повторное измерение длины столба форменных элементов, Вследствие миграции лейкоцитов длина последнего увеличивается за счет образовавшегося конуса, состоящего из лейкоцитов, мигрировавших в сторону смеси плазмы и раствора Хэнкса. Определив разницу между вторым и первым измерением длины столба форменных элементов и выразив ее в миллиметрах, получаютданные о величине МАЛ у даннои особиУстановив уровень МАЛ до влияния стресс-фактора и после, судят о степени стресс-реакции,П р и м е р 2. Стресс, обусловленный холодом.Опыт проводили на 10-дневных цыплятах, отобранных по методу аналогов, содержащихся в птичнике при 29 - 30 С, У 30 цыплят отбирали пробы периферической крови из крыловой вены, Затем 15 голов опытной группы поместили в картонные коробки и перенесли в помещение с температурой 10 С, где выдерживали в течение 2 ч 15 голов контрольной группы перенесли в другое помещение, где температура была такой же, как и в птичнике 29 - 30 С, и также выдерживали 2 ч, По истечении этого срока цыплята обеих групп были возвращены в птичник, Из крыловой вены через 3, 48 и 96 ч с начала опыта отбирали пробы в стерильные стеклянные пробирки, орошенные антикоагулянтом - раствором лимоннокислого натрия,Ц отобранных пробках крови определяют МАЛ по методике, описанной выше,Изменения МАЛ крови цыплят при воздействии холодом (мм) представлены в табл,1.Как видно из табл,1, МАЛ у опытной группы цыплят резко падает после воздействия стресс-фактором и составляет через 4 и 48 ч соответственно 6,2 и 74,7;4 от уровня МАЛ до воздействия, Далее МАЛ увеличивается и полностью восстанавливается через 96 ч после оканчания воздействия стресс-фактором, У контрольной группы цыплят, не подвергавшейся воздействию стресс-фактором, особенно процесс взятия крови практически не повлиял на величину МАЛ,Проводили статистическую обработку полученных данных с использованием критерия Стьюдента, что позволило сделать вывод о достоверности полученных результатов через 48 ч после окончания стресс- фактора.Таким образом, по изменению МАЛ судят о развитии общего адаптационного синдрома у цыплят опытной группы вследствие действия стресс-фактора.П р и м е р 3. Стресс, вызванный голодом и жаждой,Берут пробы периферической крови у 15 голов 18-дневных цыплят контрольной группы и 15 голов опытной группы, отобранных по методу аналогов. 24 ч цыплята опытной группы не получали корм и воду, В остальном режим содержания, микроклимата, рациона кормления и поения, методика определения МАЛ идентичны условиям опыта, описанного в примере 2, Через 24, 32, 110 ч с начала опыта отбирают пробы периферической крови у цыплят обеих групп аналогично примеру 1, Результаты определения МАЛ в отобранных про 5 10 15 20 30 35 40 45 50 55 бах приведены в табл.2,Как видно из табл,2, действие стресс- фактора вызывает резкое снижение МАЛ (на 65,8 ) уже через 24 ч с начала опыта. У контрольной группы цыплят собственно процесс отбора крови практически не повлиял на величину МАЛ.Через 32 ч после начала опыта констатировано дальнейшее уменьшение МАЛ, После этого срока искомый показатель к 110 ч от началам опыта практически восстановился до нормы.Как видно из представленных материалов, стресс-фактор (суточное голодание и жажда) вызывает статически достоверное уменьшение МАЛ, восстанавливающееся до нормы за 3,5 сут, после завершения действия стресс-фактора, Следовательно, наблюдая за изменением уровня МАЛ, представляется возможным выявлять состояние стресса у птиц,П р и м е р 4, Стресс, вызванный облучением гамма-квантами,Берут пробы периферической крови у 28 голов 30-дневных цыплят, отобранных по методу аналогов,По завершении подготовительного периода, длившегося 2 суток, 14 голов цыплят контрольной и 14 голов цыплят опытной групп поместили в картонные коробки и на автомашине перевезли на установку "Гамма-поле", Расстояние в один конец около 40 км, температура окружающей среды в периодтранспортировки 25 С, Источником излучения на установке является Кобальт. Цыплят опытной группы облучали дозой 750 Р, при мощности дозы 350 Р/мин, По завершении облучения цыплят обеих групп перевезли обратно в виварий и поместили в соответствующие клетки, Условия содержания, микроклимата, рационы кормления и поения, методика определения МАЛ тождественны условиям опытов 2 и 3.Пробы периферической крови отбирали у цыплят обеих групп перед началом опыта, а также через 24, 48, 72, 120 и 144 ч.Результаты измерений МАЛ в отобранных пробах представлены в табл,3,В контрольной группе отмечено уменьшение МАЛ через 48 ч после транспортировки цыплят на расстояние 80 км на 14 по сравнению с величиной МАЛ до перевозки цыплят, В последующие четверо суток наблюдения за величиной МАЛ установлено постепенное восстановление показателя до нормы.1663547 Таблица 1 Таблица Таблица В опытной группе через 24 ч после облучения отмечено уменьшение МАЛ до 3,02+0,64, а через трое суток до 2,50+0,77 мм (Р0,01). В последующем, завершающем 5 периоде опыта обнаружено увеличение МАЛ. Однако и по прошествии 114 ч после облучения искомый показатель в опытной группе был на 13,2 фниже, чем в контроле. Очевидно,это обстоятельство обусловлено 10 развитием лучевых реакций у цыплят после облучения дозой 750 Р.Таким образом, во всех примерах стресс-факторы, разные по своей природе, вызывали сходные изменения МАЛ: умень шение с последующим восстановлением практически до нормы.В контрольных же группах величина МАЛ остается неизменной, что свидетельствует о том, что собственно процесс взятия 20 проб крови у особей на величину этого показателя не влияет. Следовательно, по уровню МАЛ представляется возможным определить состоятие стресса у птиц, что . позволяет рационально применять средст-ва, аттенуирующие стресс, а также по воэможности планировать технологические приемы и массовые ветеринарные обработки, вызывающие вынужденные стрессы.Таким образом, предлагаемый способ позволяет с большей точностью определять состояние стресса у птиц, так как собственно процесс взятия крови практически не влияет на уровень миграционной способности лейкоцитов.Формула изобретения Способ диагностики состояния стресса у птйц путем исследования проб периферической крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, в пробах определяют уровень миграционной активности лейкоцитов до и после действия стрессорного фактора, сравнивают их и по отклонению судят о наличии общего адаптационного синдрома.