Способ размножения гречихи in viтrо

(71) Казанский иго филиала АН С(57) Изобретение относится гии и может быть использова и семеноводстве растений дл размножения ценных геноти Целью изобретения является ускорение процесса раэмнож личении выхода регенеранто стоит в том, что в качестве используют узлы растений, а к ние и субкультивирование осу одной и той же модифициро тельной среде Гамборга В 5, в полнительно вносят 6-БАП 5-10 мг/л. 1 э.п. ф-лы. 1 табл. А.В. Богушеви8.8) СССР,5,54) СПОСОБ РАЧТЙО НИЯ ГРЕЧИХИ 1 Й ной среде Гамборга /л 6-БАП, Эта вели- ментальным путем. ества 6-БАП в пита- размножения идет и больших затратах едующих субкультиуменьшают д ультивирования и в растений гречиО 1325150 2837,3 стери- еняют уэеЗа 0,02 д ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ И К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ ститут биологии Казанс(56) Каз. институт биологии ККазань, 1985, Рукопись деп. 1М 8674-В. Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции и семеноводстве растений, в частности для ускоренного размножения ценных экземпляров и сортов гречихи, а также в исследованиях по генетике и физиологии растений,Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса размножен. я при увеличении выхода регенерантов,Способ состоит в том, что в качестве эксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование их осуществляют на одной и той же модифицированной питательной среде Гамборга В 5 с 6-,бенэиламинопурином (6 - БАП) из расчета 5-10 мг/л среды, при последующих субкультивированиях концентрацию 6-БАП уменьшают до 1-2 мг/л.Способ осуществляют следующим обраэ донорных стерильных или пр анных растений гречихи выч с частью стебля и листом (1,5 м узлы растений культивируют н фицированнои питателВ 5, содержащей 5-10 мчина получена эксперПри уменьшении количтельной среде процесменее интенсивно и првремени, хотя при послвированиях концентр1-2 мг/л.Состав среды длясубкультивирования узхи следующий, мг/л:МакросолийаН 2 Р 02 Н 20КЙОзМ Н 4)2304М 9504 7 Н 20СаС 2 2 Н 20Ге 504 7 Н 20йа 2 ЭДТА 2 Н 20МикросолиНзВОзМп 304 4 Н 20СОО 2 6 Н 20 биотехнолоно в селекцииускоренного пов гречихи.упрощение и ения при увев, Способ созксплантатов ультивироваществляют на ванной пита- которую дав количествеСц 504 5 Н 207 п 504 7 Н 20ИагМоО 2 Н 20КВитаминыТиамин-НС 2Пиридоксин-НС 1Никотиновая кислота 1Миоинозит 100Гидролиэат казеина 2000 10Сахароза 30000Агар 7000БАП 5-10Вода ОстальноеПеред автоклавированием рН среды 15доводят до 5,8-6,0,Материал инкубируют в условиях 16-ча.сового фотопериода при освещении 7000 лки температуре 24 ":2 С в закрытых прозрачных сосудах, В случае появления на эксплантатах бактериальной или грибнойинфекции их удаляют с частью прилегающей к ним питательной среды,Эксплантаты находятся на питательнойсреде 3 - 4 нед. К концу этого периода из 25пазух листьев образуется 3 - 8 проростковдо 2-5 см длиной, узел и нижняя часть стебля утолщаются, на нижней части стебля образуется каллус. Размножившиеся из пазухлисгьев регенеранты рассаживают на агаризованную, разбавленную вдвое питательную среду Мурасиге и Скуга безгормонов для доращивания и укоренения.Корни начинают образовываться приблизительно на 10-й день, а выращивание растений на данной среде продолжают 3-4 нед,после чего их переносят в почвенно-торфяную смесь.Оставшуюся часть эксплантата разрезают на 2 - 3 части, отдельные кусочки пересаживают на исходную среду длярегенерации и культивируют в укаэанныхусловиях. При этом в течение 3-4 нед объемэтих кусочков увеличивается и образуютсястеблевые почки, кучки проростков до 3 - 10 45мм длиной, отдельные листья на черешках,После чего эксплантаты расчленяют на отдельные регенеранты и клоны почек ивысаживают на среду Мурасиге и Скуга споловинной дозой ее компонентов, но без 50гормонов, для доращивания и укоренения.Подобное дробление эксплантатов состеблевыми почками и попеременное культивирование на среде регенерации и насреде для доращивания и укоренения можно проводить неСколько раэ, что в случаенеобходимости увеличивает количествополучаемых растений-регенерантов от одного эксплантата. П р и м е р 1, В работе исследуется применение способа для сортов гречихи культурной Казанская групнозерная и Майская, Работа осуществляется по указанной методике, при этом в среду Гамборга Вь вводят 6-БАП в количестве 1 мг/л.П р и м е р 2-4, Осуществляют аналогично примеру 1, результаты представлены в таблице.Таким образом, наибольший выход регенерантов наблюдается при использовании б-БАП в концентрации 5 - 10 мг/л. Следует отметить, что инициация развития проростков при этих концентрация б-БАП начиналась на неделю раньше. Эти побеги отделяют и рассаживают на агаризованную разбавленную среду Мурасиге и Скуга без гормонов для доращивания и укоренения, При тех же температурных условиях и фото- периоде выращивание на данной среде продолжают 3 - 4 нед, после чего их можно высаживать в почвенно-торфяную смесь,Оставшуюся часть эксплантата разрезают на части и отдельные кусочки опять помещают на исходн/ю среду для регенерации и культивирования в названных условиях, При этом за 3-4 нед. размеры этих кусочков увеличиваются, образуя конгломераты проростков разных размеров, стеблевые почки, отдельные листья на черешках, Затем опять повторяют операцию отделения регенерантов от клонов почек с недоразвитыми проростками, Регенерационная способность эксплантатов сохраняется в течение длительного времени (часть эксплантатов культивируется уже около года), однако чеРез 3 - 4 субкультивирования на среде для регенерации наблюдают появление морфоэов, которые нарастают от пассажа к пассажу, особенно на среде с содержанием 6-БАП 10 мг/л. Предотвратить появление морфозов возможно путем снижения количества 6 - БАП в среде для регенерации до 1-2 мг/л) при последующих субкультивированиях.Таким образом, используя при последующих субкультивированиях пониженные концентрации б-бенэиламинопурина в среде для регенерации можно получить большое количество регенерантов от одного эксплантата.Формула изобретения 1, Способ размножения гречихи и чтго, включающий вычленение эксплантатов, культивирование и субкультивирование их на модифицированной агариэованной питательной среде Гамборга ВБ с последующим доращиванием и укоренением стеблевых почек и побегов на беэгормональной среде Мурасиге - Скуга с умень1658928 Влияние различных концентраций 6-БАП на морфогенез гречихи Составитель В, ДемкинТехред М,Моргентал Корректор Т. Палий Редактор Н. Швыдкая Заказ 1793 Тираж 360 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 шенным вдвое содержанием компонентов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса размножения, в качестве эксплантатов используют узлы растений, а культивирование и субкультивирование осуществляют на одной и той же среде, в которую дополнительно вносят 6-БАП в количестве 5 - 10 мг/л.2, Способ по и 1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что. с целью увеличения выхода регене рантов, после 3 - 4 пассажей проводят снижение количества 6 - БАП до 1-2 мг/л.