Способ определения концентрации антибиотика

(5115 С 12 0 1 ТЕНИЯ ЛЬГТВ ьск антиби 54-157 НЦЕН обиолоицине и делении изобрести споцествляется следуюГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ И К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕ(71) Всесоюзный научно-исследоват институт прикладной микробиологи(54) СПОСОб ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОРАЦИИ АНТИбИОТИКА(57) Изобретение относится к микр гической промышленности и мед может быть использовано при опре концентрации антибиотиков. Цель тения - повышение чувствительно Изобретение относится к микробиологической промышленности и медицине и может быть использовано при определении концентрации антибиотиков,Цель изобретения - повышение чувствительности способа и его ускорение,В основу способа положено подавление хемотаксической активности клеток антибиотиками. Регистрируемой величиной является расстояние, на которое смещается фронт тест-культуры бактерий. Присутствие в жидкости антибиотика тормозит процесс миграции бактериальной популяции, при этом, чем выше концентрация антибиотика, тем ниже скорость миграции.тактериальной полосы,Способ определения концентрации антибиотика тилозина с использованием в качестве тест-культуры штамма ВасНов соба и его ускорение. Для осуществления способа используют в качестве тест-культуры бактерии, обладающие хемотаксисом, например В, зоЬтйз, Е, соП и другие. Разведения антибиотика разливают в пробирки или кюветы, под слой антибиотика наслаивают суспенэию тест-культуры и инкубируют при комнатной температуре в течение 4 ч (оптимальное время для стандартизации способа). Затем определяют смещение фронта тест-культуры от границы с разведением антибиотика и по его величине определяют концентрацию антибиотика. Определение проводят по сравнению с контролем на основании калибровочной кривой. 1 з.п,ф-лы, 1 табл,Брйаепсоз - 1966 осущим образом,Для построения калибровочной кривой ряд одинаковых емкостей правильной формы заполняют физраствором, содержащим известные концентрации антибиотика, Размер стеклянных кювет равен 5 Х 10 х 40 мм, Затем на дно каждой иэ кювет с помощью микрошприца наслаивают по 100 мкл суспенэии вегетативных клеток тест-культуры при оптической плотности суспензии 0,3 - 1,0 и выдерживают при комнатной температуре.Через 4 - 5 ч в кюветах наблюдают распределение клеток, образуется полоса бактерий, мигрирующая вверх. Замеряют расстояние, на которое сдвинулась бактериальная полоса в кюветах. В соответствии с измеренными значениями строят калибровочную кривую зависимости расстояния, 1650702пройденного полосой, от концентрации антибиотика за контрольное время."Искомую концентрацию тилозина определяют на построенной калибровочной зависимости смещения полосы бактерий 5 ВасНцз Ярйаегсоз - 1966 за контрольное время (4 ч), Для этого измеряют расстояние, на которое смещается полоса бактерий через 4 ч. За это время бактериальные полосы хорошо формируются и проходят расстоя ние порядка 10 мм, что удобно для измерения, Из этой точки на оси ординат проводят линию параллельно оси абсцисс до пересечения с графиком калибровочной кривой, из точки пересечения опускают перпендику ляр на ось абсцисс и по шкале концентраций находят искомое содержание тилозина в неизвестном растворе. В данном примере искомая концентрация тилозина равна 0,7 ед/мл. 20П р и м е р 2. Концентрацию тилозина можно определять и с использованием бактерий В, ыЬ 11 Нз - 720, Все операции, их последовательность и количественное выражение аналогичны примеру.1. Концентра ция тилозина 0,7 ед 1 мл.П р и м е р 3. Измерение концентрации грамицидина С с использованием бактерий В. тпог п 91 евзз - 752 осуществляют аналогично примеру 1. Концентрация грамициди на 29 10" г)млП р и м е р 4. Концентрацию тетрациклина определяют в соответствии с примером 1, но используют бактерии Е, со 11 Мза 4 ч, 35П р и м е р 5. Концентрацию стрептомицина определяют в соответствии с примером 1 с использованием бактерий Е. соН Мэа 4 ч.Сравнительные данные по чувствитель ности определения концентраций антибиотиков приведены в таблице.При этом точность определения аналогична известному способу ошибка 10.45 Способ может быть использован для определения концентрации антибиотика в культуральной жидкости. Перед определением концентрации антибиотик экстрагируют из культуральной жидкости, Например, в случае использования культуральной жидкости, содержащей тилозин, экстракцию проводят с помощью 0,2 н. раствора НС 1. микробные клетки осаждают и определяют концентрацию тилозина в жидкой фракции,Использование предлагаемого способа при сохранении точности определения позволяет повысить его чувствительность, а также ускорить определение с 18-24 до 4 ч и менее ч (4 ч выбрано для стандартизации способа, тогда как хемотаксис можно наблюдать уже через 5 мин после введения культуры под раствор антибиотика).Формула изобретения1. Способ определения концентрации антибиотика, включающий инкубирование раствора антибиотика с суспензией тест- культуры микроорганизмов с последующим учетом результатов в сравнении с контролем, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа и его ускорения, в качестве тест-культуры используют микроорганизмы, обладающие хемотаксисом, суспензию тест-культуры вводят под раствор антибиотика, после инкубирования фиксируют расстояние смещения фронта тест-культуры от границы микробных клеток с раствором антибиотика и по его величине определяют концентрацию антибиотика,2, Способ по и 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве тест-культуры микроорганизмов, обладающей хемотаксисом, используют штамм ВасНоз Ярпаегсоз 1966, ВасВоз ыЬОНз 720, ВасНЬз Фигпцепз 1 з 252 или ЕзспепсЫа соН М,1650702 Составитель Г.СмирноваТехред М.Моргентал - Корректо Ре ле унько 584 Тираж 369 ПодписноеИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 водственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул, Гагарина, 101В случае с тилозином используют навеску заводского препарата бацихилла (1 ед/м соответствует 1 мкг/мл).