Способ диагностики гетерозиготных форм и -талассемии

,ЯО,Щ 4935 ЦИАЛИСТИЧЕСНИХ.СПУБЛИН С 01 Н 1/2 В ЕННЫЙ КОМИТЕТНИЯМ И ОТКРЫТИЯМСР ГОСУДПО ИЗОПРИ ГКНТ уллюз д В.1. Ь 9 ЮЙЛ 1;Й. . , :.Ф".,л 1 ЬйдИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ее(46) 15.05.91. Н Р 18 о-исследоватлогии и пер ельскии инст еливания кров Г.М.Мухадзе естиашвили, идзе и Ц.Ш., .89.9 (088,8(54) СПО НЫК ФОРМ 1венаце И тение относится к медицине к гематологии.изобретения является повыности способа,осуществляют следующим именно Целью ение то Спосообразом.У лиц с подозрением на гетерози готную- или 3 -талассемию берут кровь из пальцев, готовят тонкие мазки и определяют морфологические характеристики эритроцитов: их форму размеры и насыщенность гемоглобином.Особое внимание обращают на наличие патологических Форм эритроцитов, таких как мишеневидные, шлемовидные, узкоэллипсоидные с зазубренными края ми, эритроциты с базофильной пунктацией, макропланоциты. Одновременно определяют содержание эритроцитов с ИЬГ в мазках крови по методу К 1 е. - Ьаиег Вгацп, Вег 1 е (1957 г.), уроа не ак ув тр(71) Научи тут гемато им. акад. (72) И.Г.М И.Ш. Зедгин (53) 616-0 1,т1 (56) И.И.З гемоглобин с. 101. едгинидзе и др, Диагностопатий. Тбилиси, 1975,(57) Изобретение относится к медици не, а именно к гематологии, Цель изобретения - повышение точности диагностики наследственных Форм 0- и -талассемии. Наряду с определеем в крови изменений Форм эритропитов уровня НЬА, и НЬГ гемоглобина дополнительно определяют содержание Иа - и К-зависимой АТФ-азы и фракционный состав нейтральных липидов мембран эритроцитов, При значении содержания АТФ-азы 0,6 мм/мг и ниже и увеличении фракции триглицеридов до 2+ - 3 , а также при наличии из менений в содержании НЬА и НЬР и форме эритроцитов диагностируют забо- Я левание. ь НЬА 2 методом электрофореза натит-целлюлозных пленках, уровень НЬ методом щелочной денатурации (ЯЫ 8 ег, 1951 г.), Параллельно провводят инкубацию крови с бриллиантовым крезиловым синим красителем для выявления ВВ нестабильного гемоглобиДополнительно из вены берут кровь объеме 15 мл, выделяют мембраны1- + итроцитов, определяют (Ма + К ) Ф-азную активность (белок), фоср, а также фракционный состав йтральных липидов припомощи тонслойной хроматографии (по методу алью).При выявлении пониженной по сравнию с нормой (Иа+ + К ) - АТФ-азно тивности и визуально определяемого еличения липидной Фракции в зоне иглицеридов в сочетании с наличием51 О 15 20 30 35 40 45 50 При цитологическом изучении мазкапериферической крови эритроциты,содержащие НЬР 10%, При инкубациикрови с бриллиантовым крезилоньщсиним красителем внутриэритроцитар 55 специфических морфологических изменений эритроцитов (мишеневидные, овальные, узкоэллипсоидные, базофильнопунктированные на Фоне пойкилоцитоза) с повышенйым уровнем НЬА и НЬР, наличием эритроцитов, содержащих НЬР, подтверждают диагноз гетерозиготной -талассемии, в сочетании же с наличием специфических морфологических нарушений эритроцитов (мишеневидные планоциты, шлемовидные, овальные, базофильнопунктированные на йоне макроцитоза) и наличием ВВ на фоне нормального или пониженного уровня НЬА, и НЬР и отсутствием эритроцитов с НЬР - подтверждают ди,агноз О(-талассемии В сочетании с отсутствием характерных морйологических нарушений эритроцитов и ВВ при нормальном содержании НЬА и НЬР и отсутствием эритроцитов с НЬР ставят диагноз К-талассемии - латенЯ тной йормы заболевания, а при сочетании с наличием характерных морфологических нарушений эритроцитов эритроцитов, содержащих НЬР и нормального содержания НЬА и НЬР- ставят диагноз латентной гетерозиготной -талассемии.П р и м е р 1. Больной 20 лет, Дмагноз: гетерозиготная ф-талассемня, Жалобы на общую слабость, утомляемость, иногда боли в лебом подреберье.Анализ крови: НЬ - 126,0 г/л, эр. 4,81 О /л, цветовой показатель 0,79, РОЭ 3 мм., лейкоциты 5,0 х х 10 /л, тромбоциты 50%, ретикулоциты 30%, базофильная сетчатость в толстой капле , отмечается выраженный анизоцитоз за счет микроцитов и макроцитов; умеренный пойкилоцитоз, небольшая полихромазия, часть эритроцитов гипохромна. Встречаются овалоциты - 10-16 и/зр, мише- невидные эритроциты - 0-8 и/зр, шлемовидные 2-3 и/зр, слезовидные -0-3 п/зр, базофильнопунктированные - единичные в препарате. Лейкоцитарная Формула, %: миелоциты 0-5: сегм. " 5,5; пал. 3,5; моноциты 9,5; эозинофилы 4,5; лимфоциты 31,5ные включения нестабильного гемоглобина не обнаружены,При изучении йракции гемоглобинаметодом злектрофореза на бумагеНЬА составляет 3,6%. При исследовании медотом щелочной денудации уровень НЪР составляет 2,2%.Сывороточное железо ЗО,З мкмоль/л,общая железосвязывающая способность -70,9 мкмоль/л свободный трансфер,рин 40,6 мкмоль/л, коэффициент насыщения трансйеррина железом 43%.На основании проведенных исследований пробанду бып поставлен диагноз гетерозиготной 3-талассемии. При специальном исследовании мембраны+ эритроцитов оказалось, .что (Ма+ К )- АТФ-азная активность мембран эритроцитов понижена и составляет 0,60 мМ/мгб.ч., а при Фракционировании нейтральных липидов мембраны эритроцитовметодом тонкослойной хроматографиилипидная Фракция в зоне триглициридов.увеличена (2 ).П р и м е р 2. Больной 37 лет,жалобы на общую слабость,.легкие боли в коленях, небольшое увеличениеселезенки при тяжелых простудныхзаболеваниях.Объективно: склеры желтушны, печень и селезенка не прощупываются.Анализ крови: НЬ 122,0 г/л, эритроциты 5,2 10 /л, цветной показатель 0,69, РОЭ 6 мм, лейкоциты 7,0 хх 109 /л, тромбоциты 51%, ретикуло-.цнты 19%, базофильная сетчатость втолстой капле (+). Отмечается склонность эритроцитов к макроцитозу,встречаются овалоциты 8-12 п/зр.,шпемовидные эритроциты - единичные ви/зр. Лейкоцитарная формула, %: миелоциты 0,5; сегм, 66,5; моноциты4,5; эозинойилы 4; базойилы 0,5;лимфоциты 24,0,При цитологическом изучении мазкапериферической крови эритроциты,содержащие НЬР не обнаружены. Приинкубации крови с бриллиантовымкрезиловым синим красителем внутриэритроцитарные включения нестабильного гемоглобина - 5%.При исследовании гемолизата методом электройореза на бумаге НЪАсоставляет 1,5%, при исследованииметодом щелочной денатурации уровень .НЬГ составляет 0,5%.Термостабильность гемоглобина75,0%.Тираж 405 Заказ 1516 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,10ч Уровень сывороточного желеэа 18 мкмоль/л, общая желеэосвязывающая способность 64,8 мкмоль/л, свободный трансферрин 46,8 мкмоль/л,коэффициент насыщения 27 Х,У больного поставлен диагнозЫ.-талассемии.Дри проведении диагностики гетерозиготных форм О- и 3-талассемии оказалось, что у больных, подозревающихся на носитель гена О- или ф -талассемии, в 907 были выявлены признаки 0(- или 3-талассемии.Точность диагностики гетерозиготной талассемии значительно выше.Предложенный способ имеет большоепрактическое, а также теоретическоезначение для понимания механизмовпроявления генетических заболеваний,Способ. диагностики гетерозиготных форм ф- и ф-талассемии путемвыявления в кро 6 и измененных формэритроцитов и определения уровняНЬА и НЬГ гемоглобина, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности способа в случаях латентных и стертых форм заболе"вания, в крови дополнительно определяют содержание Иа - и К -зависимой+ +АТФ-аэы и фракционный состав нейтральных липидов мембран эритроцитов,и при значении содержания АТФ-аэы0,6 мМ/мг и ниже и увеличении фракции триглицеридов до 2 - 3 диаг+ - ностируют заболевание.20