Способ определения вида грамотрицательных микроорганизмов

(19) П 51)5 С ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ба. Исследуемые культуры высевают на. питательные среды, содержащие один из субстратов, в отношении которого определяют ферментативную активность, в частности среды с углеводами, аминокислотами, среды для определения образования сероводорода и индола, Параллельно делают посевы на контроль ные среды (не содержащие субстраты). После инкубирования посевов определяют изменение цвета сред и индикаторов. Для определения утилизации аминокислот лизина, орнитина и аргинина к посевам добавляют реактив Несслера . При утилизации аминокислот образуется осадок, в контроле осадок отсутствует. Я Время проведения анализа 18-24 ц, ложно положительные результаты исключаются. усовершенс ан оводствоПокровского,(57) Изобретение оской микробиологиипользовано для дионных заболеванийповышение точност тся к медицинжет быть ис" ики инфекциизобретения корение спосоагнос Цел и и ук медицинст быть иси инфекцион о одыьтурывать зации аминокислот им образом. Готоберут 10 мл ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Центральный институтвования врачей(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯРИЦАТЕЛЬНЬХ ИИКРООРГАНИЗ Изобретение относитсякой микробиологии и можепользовано для диагностикных заболеваний,Цель изобретения - повыш ности и ускорение способа. Способ осуществляют следующим разом,Способность утилизировать углев определяют посевом исследуемых кул на среды Гисса,способность образов НБ и индол на среде Клиглера. По зания этих тестов учитывают через 24 ч по изменению окраски индикат в этих средах,Определение утили осуществляют следующ вят реактив Несслераводы, 1 г иодистой ртути, растирают вступке с небольшим количеством воды,переносят в темный стеклянный флакон,ступку ополаскивают водой и сливают втот же флакон, куда добавляют 0,5 г иодистого калия. В оставшейся воде растворяют 2 г гидроксид натрия, и послеохлаждения раствор щелочи выливаютво флакон, Дают отстояться осадку втецение нескольких цасов. Надосадоцную жидкость сливают и хранят е темном флаконе с притертой пробкой. Среды готовят известным методом: с аминокислотами и без аминокислот (контрольные), Посев испытуемых культурпроводят известным методом, культурыинкубируют 18-24 ч в термостатепри 37 С.Реактив Несслера в объеме 0,15- 0,25 мл добавляют в каждую пробирку под слой вазелинового масла.Реакцию считают положительной, если сразу после добавления реактива в опытную пробирку образуется объемный белый осадок в случае продукции микроорганизмами декарбоксилаэы орнитина или лизина, и большое количе О ство белого или желто-коричневогоосадка при продукции аргининдигидролазы, Появление легкой опалесценции расценивается как отрицательный результат. 15В контрольной пробирке после добавления реактива происходит изменение цвета индикатора беэ образования осадка.П р и м е р 1, Выявление вида культуры рода К 1 еЬв 1 е 11 а рпецпоп 1 ае.Определение исследуемой культуры начинают с посева в две пробирки со средой Гисса, содержащей глюкозу и лактоэу, в пробирку со средой Клигле 25 ра, на которой определяют образование Н Я и индола, а также на средус аминокислотой. Первая пробирка среда с.лизином (опытная), вторая пробирка - среда без лизина (контроль.зО ная). Исходный цвет сред - светло-зеленый. Пробирки заливают стерильнымваэелиновым маслом для создания анаэробных условий.Посевы ставят в термостат и инкубируют при 37 С 24 ч. Изменение окраски индикатора на средах Гисса свидетельствует о способности микроорганизма утилизировать глюкозу и лактозу, Отсутствие почернения среды Клиглера и отсутствие изменения индикаторной бумажки,на индол свидетельствует о неспособности исследуемой культуры образовывать сероводород и индол, Через 21 ч инкубации в контрольной пробирке (среда беэ лизина) происходит изменение цвета среды из зеленого в желтый, а цвет опытной пробирки (среда с лизином) приобретает желтый цвет с зеленоватым оттен 50 ком. Такое изменение цвета не позволяет четко интерпретировать резуль"таты. В пробирки добавляют реактивЙесслера в количестве 0,15 мл подвазелиновое масло. В опытной пробирке сразу появляется объемный белый осадок. В контрольной пробирке при добавлении 0,15 мл реактива образование осадка не наблюдается. П р и м е р 2, Выявление видамикроорганизма Рзецйошопаз аегцц 1 поза.,Определение начинают с посева исследуемой культуры в две пробирки сосредой Гисса, содержащей глюкозу илактозу, в пробирку со средой Клиглера, на которой определяют образование Н Я и индЬла,а также на двепробирки - опытную и контрольную,соответственно с аргинином и без аргинина. Пробирки с аминокислотамизаливают вазелиновым маслом, и всепосевы инкубируют в термостате при37 С 18-21 ч.Изменение окраски индикатора насреде с глюкозой говорит о способности культуры утилизовать глюкозу.Неизмененная окраска среды с лактозой, отсутствие почернения средыКлиглера и изменения индикаторнойбумажки на индол свидетельствуют оботрицательных реакциях, Через 1821 ч инкубации с аминокислотами происходит изменение цвета посева вопытной пробирке (среда с аргинином)в сине-зеленый, а в контрольной(среда без аргинина) - в зелено-синий,что не дает возможность интерпретировать полученные результаты.Добавляют в пробирки с аминокислотами по 0,25 мл реактива Несслерапод масло. В опытной пробирке сразуобразуется желтовато-коричневый осадок, в контрольной осадка не наблюдается.Использование способа позволяетповысить точность определения видамикроорганизма за счет модификацииопределения утилизации аминокислот,По сравнению с известным способом ускоряется определение на 2-3 сут.Формула и э о б р е т е н и яСпособ определения вида грамотрицательных микроорганизмов путем посева исследуемых культур на питател.ьные среды, предназначенные для определения утилизации углеводов и аминокислот, образования индола и сероводорода, с последующим инкубированием посевов и определением вида микроорганизма пс совокупности биохимических свойств, о т л и.ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, утилизацию аминокислот лизина, орнитина и аргининаСоставитель Г.СмирноваТехред М.Дидык Редактор Н.Рогулич Корректор О.Кравцова Заказ 145 Тираж 474 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 15376906определяют по образованию осадка пос= выросшей культурой реактива Несслеле добавления в питательную среду сра.