Способ оценки пролиферации лимфоцитов

Н 4 Г О 1 т 33/ И КОМИТЕТ И ОТНРЫТИ ГОСУДАРСТВЕНН ПО ИЗОБРЕТЕНИ ПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ(53) 612,015 (088,8 тикикам е цт.тЫ ПрСЛ.;.Г 1;цц и.Мут." НЫХ КЛЕТОК, 1 Е.тЬ цнаб; СтК, .1 ИЧЕСтНЕННая С 1 с ГКа )1; тЕН. Г 1. ПРО;ЦфЕРании ЛЦМфапитан ттса - цаотц аЕтСя Пу ГСМ ИРМЕ)ЕН.: .1;.ОСтц ГтРОЛЦфс 1 РаЦЦЦ;Р, Л тци канканавалина А н дозах 10 мкг мл ц апре;те; с нця углов а к асц абсцис прям х) саетт -(56) Лабора с, 62 т, (54) С 110 СОЬ ФОЦИТОВ с, 1985,е ЕНКИ ПРОЖФЕ АИ 1 ПИМие относит 57 Изо и ас бретение относитс гх с кривой, тОлучт.ннс,;анании норма.нных к .: -медицине,.раннинаюрц культин а так,На фиг.1 принелены да ленця динамики изменения оси абсцисс кривой раста дцаактиннастц при измене ные наклона к чрання р 1 лиферац Спасщим абствляют ти .";азы мцлоран на)я ц теисснПР здарадвух да 1: ые пралифер варов ираных фиг,2 ностит 1 ЕНт, гру; опрсдаццц нбольнг гх аст иненмс -н ИРИ,П р Кр р оных дана рон, разводят н 2 раза т физцал л м и (пло , 08),45 мц леарнь цколл вераграастнара 00 об/с ц манон ногопрц 1 рак ся над Ой от центр По сле ронавших днухкрат,=.:.ф РЕСПУБЛИК ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ н частности к способам диа в частности к иммунологии,Цель изобретения - количестнен оценка нарушений интенсивности прразом.К мононуклеарным клеткам кроки да" бавляют конканавалин А н дозах О, 2, 5 и 10 мкг/мп) культивируют клетки 72 ч при 37 С, добавляют к нимН-тимидин за 4 ч до окончания культивирования, переносят на стекловолоконные фильтры, на сцинтилляционном счетчике определяют уровень связанной с клетками радиоактинностц, регистрируют показатели интенсивности пролиферации в виде углов наклона к оси абсцисс кривой роста уровня, связанной с клетками радиоактивности при изменении доз конканавалина А от 0 до 2 от 2 до 5 и от 5 до 10 мкг/мл баллет "т.Н 1 Юруен 1; ан двух здон каличестнеОГИтЕС 1) РаСт ивалт на сРсь тнасть ГалуРн ЦЕ НТР ИСУ 1 Ц" тЮгс н, собирают х клеток, скан .Оем фцкалла, сГЫВКИ В ф 1 ЦСЛСгическом растворе моьоцуклеярцыеклетки ресуспецдируют в среде 19 с),дополненной эмбриоцальцой телячьеисывороткой (57), пенициллином/мл), гентамицином (2 мт /мл) и по 1,дят их концентрацию до 1 1 О в 1 тл.6Мононуклеарные клетки кажгтогсдонора культивируют 72 ч в ячейки;.планшета агля иммунологических ис следований, в которые добавляют по0,02 мл конканавалина А в следующихконцентрациях: О, 2, 5 и 10 мкг/мл,За 4 ч до окончания культивированияв ячейки вносят по 0,02 млН-тимидина, а затем содержимое ячеек с помощью автоматического сборщика клеток переносят на стекловолоконныефильтры. Фильтры помещают во флэкогтысо сцинтилляционной жидкостью и насцинтилляционном счетчике на каждом фильтре определяют уровень, связанный с клетками радиоактивности(имп/мин/10 клеток), Определяют уро 5вень, связанный с клетками радиоактивности, для каждой дозы митогенаи углы наклона к оси абсцисс кривойизмельчения величины пролиферации,Поноры отличаются между собой по ве-.личине углов наклона этой кривой приувеличении дозы конканавалина А от0 до 2, от 2 до 5, от 5 до 10 лкг/ и(фиг.),П. р и м е р 2. Проводят исспепсвание интенсивности пролиферациигр1 з 1 1 здоровых ЛО)ров иб, л 1,1111;, острой тцевмстциет, Срел 1 О вс и;ицы углов наклона у здоровых11 Оц и больных острой пневмонией;11:1 ямлкя этого показателя в обеихгрупах была достоверно различной:зп, ровые доноры отвечают увеличением 1 О интенсивности пролиферации на увеличение дозы митогеца от 2 до 5 мкг/м.т.Олцако пролиферятивный процесс лимфоцитов больных острой пневмонией отличается одинаковыми значениями уг лов наклона при всех дозах митогена(фиг,2). Формул а изобретенияС по соб оце цк и про лтлферации лимфо цитов путем реакции блас твой трас: .формации, ицдуцировяццой митогецом, с последующей оцецкси лгТенсивцости пролиферации, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с ;елью колцчествс.ц й 25Оц:нки нарушений интенсивности нролиферации, в кячестне митогеця испо:тьзуют конкацявялиц А, строят график зявтлсимости ицвиситности ттроттфлфер:1 тии От дстэн митОГс ця у а р эулг т(" ю.тц цивают по измененпв ве ти иглы углов наклона к оси абсцисс прям 1 х, со.дицякгщих цачецие интенсивности ролиферапии при Позах коцканявалиця 2 мкг/мл, .". и 5 мкг/мл, 5 и тст тлкг/мл в 1.рявцеции с: показателямикотропе.3 Ъ Ь 4 Ц ь Я.о дО) ОЗыР доиО)Б/ Больные остроиювУ/;"ониеи 0-Г 2-5 5-10Итер 3 ал измен я дозы митогенаФиг. Г Редактор С,Пекарь Техреду М,Ходаннч Корректор М Васильева Заказ 5080/55 Тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Проиэводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101