Способ приготовления тотальных препаратов трематод

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК Я 38 А 1145 94 А ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ д ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Тепляков Л.Я Методика окрашивания дигенетических сосальщиков молочнокислым кармином.-Сб.,Материалынаучно-прризводственной конференциипо болезням сельскохозяйственныхживотных и птиц. Псков, 1968,с. 264-265.Ивашкин В,М Контрашавичус В.Н.,Назарова Н.С. Методы сбора и изучения гельминтов наземных млекопитающих. Окраска гельминтов и приготовление препаратов.-М.; Наука, 1971,с.44-45.(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ТОТАЛЪНЫХПРЕПАРАТОВ ТРЕМАТОД(57) Изобретение относится к ветеринарии, в частности к гельминтологии. Цель изобретения - обеспечениедифференциальной диагностики консервированных материалов. Мацерирование трематод ведут до появления белого налета, а после окрашивания 0,60,87-ным водным раствором молочнокислого кармина осуществляют окрашивание 3-3,57-ным водным растворомквасцового кармина. Просветлениеведут в диметилэстере фталевой кислоты. 1 з;п. ф-лы.Изобретение относится к области Гельминтологии, а именно к способам Окраски препаратов трематод. Целью изобретения является обеспе 5 Чение дифференциальной диагностики Консервированных материалов.П р и м е р 1, В качестве контроля используют способ приготовления репаратов, согласно которому окра О ивают взрослых трематод, фиксироанных спиртом (70 ) и скомпрессироанных между стеклами, после кратко". ременной промывки в дистиллированой воде, помещают в молочнокислый 15 армии 0,6%-ной концентрации на 2,5 чзатем промывают в дистиллированнойоде, После этого окрашенные тремата 4 ы проводят через спирты возрастаюей крепости 60, 70, 80, 90, 96, 1 00". 20 атем объект просветляют в гвоздичом масле и заключают в бальзам. Таой метод используют при окраске рематод рыб,При окраске трематод птиц по это Му способу без длительной мацерации Яе все трематоды разных родов впитывают в себя краску. Так, более нежые прокрашиваются лучше, более крупфе (эхиностомы, циклоцелиды) окра - 30аются хуже. Поэтому перед окрасой мацерируют трематод до белого алета.Приготовленные по этой методике препараты имеют однотонную оранжево-желтую окраску всех органов, что затрудняет дифференциальную диагностику.П р и м е р 2. Консервированный ьатериап мацерируют в дистиллированной воде со сменой ее в первые сутки. Пос.те этого воду больше не меняют до появления белого налета. В воде при такой мацерации трематод ощущается запах сероводорода. 45При появлении налета трематод ополаскивают в сменной дистиллированной воде, налет удаляют мягкими кисточками, дополнительно прессуют между предмеТными стеклами, сжимают и фиксируют нитками, сменяя обвязку через каждые сутКи, Мелких и нежных трематод прессуют 1 0-15 мин, толстых сем. Мсгосое 11 Ыае, Раяс 1 о 1 Ыае, ЕсЬ 1 пов бошами Ыае, С 1 с 1 осе 1 Ыае, РговгЬоцопппЫае, Иогосог 11 Ыае, несхолько суток, поместив в чашки Петри и залив свежей дистиллированной водой (22-24 С). После этого трематод подвергают окрашиванию молочнокислым кармином 0,6%-ной концентрации. Окраску коптролируют путем просмотра трематод в микроскопе МБР, МБР. Время окрашивания - от нескольких часов до нескольких суток при комнатной температуре (22-24 С)Как только цвет желточников, семенников и присосок становится оранжевым, окраску прекращают, трематод вынимают и промывают в воде.После кратковременной промывки водой (в течение 1-2 мин) препарат помещают в квасцовый кармин 3%-ной концентрации и выдерживают до выявления темно-фиолетовой окраски внутренних органов под контролем бинокуляра.При окраске семенников в темно-фиолетовый цвет трематод вынимают и промывают в воде. Затем пропускают через спирты возрастающей концентрации 50, 60, 70, 90, 96, 100. Далее просветляют трематод в диметилэстере фталевой кислоты, при помощи фильтровальной бумаги удаляют остаток просветляющего раствора, переносят на предметное стекло и заливают канадским бальзамом.П р и м е р 3. Консервированный материал мацерируют в дистиллированной воде со сменой ее в первые сутки, После этого воду больше не меняют до появления белого налета. В воде при такой мацерации трематод ощущается запах сероводорода. При появлении налета трематод ополаскивают в сменной дистиллированной воде, налет удаляют мягкими кисточками, дополнИтельно прессуют между пред. метными стеклами, сжимают и фиксируют нитками, сменяя обвязку через каждые сутки, Мелких и нежных трематод прессуют 10-15 мин, толстых сем. 01 сгосое 11 Ыае, Раяс 1 о 1 Ыае, ЕсЬ 1 поягощагЫае, С 1 с 1 осе 11 Ыае, РгоягЬодоп 1- щЫае, Иогосог 11 Ыае - несколько суток, поместив в чашки Петри и залив свежей дистиллированной водой (22- 24 С). После этого трематод подвергают окрашиванию молочнокислым кармином 0,8%-ной концентрации. Окраску контролируют путем просмотра трематод в микроскопе МБР, МБР. Время окрашивания - от нескольких часов до нескольких суток при комнатной температуре (22-24 оС) .Б контроле наблюдается однотонность в окраске вьппеперечисленных органов. Таким образом, предлагаемый способ облегчает изучение анатомических и морфологических особенностей трематод, что способствует определению их до вида. Формула изобретения Составитель Н. ДмитриченкоТехред М.Ходанич Корректор М,Самборская Редактор И. Рыбченко Заказ 7366/4 Тираж 422 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул . Проектная, 4 з 45433Как только цвет желточников, семенников и присосок становится оранжевым, окраску прекращают, трематод вынимают и промьвают в воде,5После кратковременной промьвки водой (в течение 1-2 мин) объект помещают в квасцовый кармин 3,5 Е-ной концентрации и выдерживают до выявления темно-фиолетовой окраски внут ренних органов под контролем бинокуляра. При окраске семенников в темно-фиолетовый цвет трематод вынимают и промывают в воде, затем пропускают через спирты возрастающей концентра ции 50, 60, 70, 90, 96, 100 . При помощи фильтровальной бумаги удаляют остаток просветляющего раствора, переносят на предметное стекло и заливают канадским бальзамом. 20Препараты, приготовленные предлагаемым способом имеют окраску, которая проявляется в нескольких тонах: тело трематод оранжево-желтое;половые органы мужской и женской сис тем (яичник,семенники) красновато- фиолетовые (могут быть фиолетовые);желточники на фоне оранжево-желтого тела имеют светло- и темно-коричневый цветВсе системы органов про сматриваются на препаратах полностью. 1. Способ приготовления тотальных препаратов трематсд, включающий мацерирование трематод, прессова"ние, окраску молочнокислым карминоми последующее просветление и заключение в канадский бальзам, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюобеспечения дифференциальной диагно-стики.консервированных материалов,мацерирование ведут до появлениябелого налета, а после окрашиваниямолочнокислым кармином осуществляютокраску квасцовым кармином, при зтомпросветление ведут в диметилэстерефталевой кислоты.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю-.щ и й с я тем, что для скрашиваниятрематод используют 0,6-0,87.-ный водный раствор молочнокислого карминаи 3-3,57-ный водный раствор квасцового кармина,