Способ определения нарушений внешнесекреторной функции поджелудочной железы

(50 4 0 01 Б 33/48 ГОСУДАРСТВПО ДЕЛАМ ПИСА Е ИЗОБР Н АВТОР РУ 1 ПЕНИИПОДЖЕЛУНЦЙ НОМИТЕТ СССР РЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ У СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии и Институт биологической и медицинской химии АМН СССР(56) Тимошина И. В. Клиничес чение ферментных методов иссл ния внешнесекреторной функции поджелудочной железы. Автореф, канд. дис. М., 1981.Ф (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАВНЕШНЕСЕКРЕТОРНОЙ ФУНКЦИИДОЧКОЙ ЖЕЛЕЗЫ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике заболе ваний поджелудочной железы. Цель изобретения - повышение точности и информативности способа путем определения скорости секреции холесте ролэстеразы после гормональной стимуляции поджелудочной железы. Дпяэтого исследование проводят натощак,двухканальным гастродуоденальнымзондом, контролируемым рентгенологически. Непрерывно, раздельно откачивают желудочный сок, дуоденальноесодержимое. Затем проводят стимуляцию поджелудочной железы (панкреозимин в/в - 2 ед/кг веса больного исекретин в/в - 1 ед/кг веса больного). После стимуляции панкреозиминомсобирают дуоденальное содержимое(порция Р 2), после введения секретина берут еще 3 порции (М 3-5).Всего получают 5 порций, измеряют ихобъем и определяют активность холестеролэстеразы флюориметрически, используя в качестве субстрата холестериловый эфир О-кумаровой кислоты.По измерению прироста интенсивностифлюоресценции определяют активностьхолестеролэстеразы. За ед. активности холестеролэстеразы условно принимают кол-во фермента, которое за15 мин инкубации приводит к образованию 1 мкг О-кумаровой кислоты вО,1 мл инкубационной смеси, 1377740Изобретение относится к медицине,а именно к диагностике заболеванийподжелудочной .железы.Целью изобретения является повы"шение точности и информативностиспособа путем определения скоростисекреции холестеролэстеразы послегормональной стимуляции поджелудочной железы. 10П р и м е р 1. Больной К.,48 лет. Поступил с жалобами на тупые,ноющие боли в левом подреберье с иррадацией в спину, тошноту. Из анализа известно, что в течение 5 лет 15страдает постоянными болями в верхней половине живота опоясывающегохарактера, При осмотре: рост 168 см,масса тела 60 кг, При пальпации жи-вот мягкий, печень и селезенка не 20пальпируются.В анализе крови и мочи измененийнет. Амилаза, липаза и трипсин в сыворотке крови в норме. При дуоденографии отмечены косвенные признаки 25увеличения головки поджелудочной железы. УЗИ: повышение эхогенности поджелудочной железы, Проведено опреде.ление нарушений внешнесекреторнойфункции поджелудочной железы с определением в дуоденальном содержимомхолестеролэстеразы по предлагаемомуспособу.Способ осуществляют следующим образом. 35Исследование проводят после 14 чголодания. Дуоденальное содержимоеполучают двухканальным гастродуоденальным зондом типа Лагерлофа). Положение зонда контролируют рентгенологически, Оливу, указывающую на положение конца дуоденального канала,устанавливают. в нижнегоризонтальномотделе двенадцатиперсной кишки. Непрерывно, раздельно откачивают желудочный сок, дуоденальное содержимоес помощью водоструйного отсоса. После полной аспирации желудочного сокав течение 20 мин в пробирку, помещенную в контейнер со льдом, собираютбазальную порцию дуоденального содержимого (порция 9 1), Затем проводятстимуляцию поджелудочной железы. Вкачестве стимулятора применяют панкреозимин внутривенно в дозе 2 ед/кгвеса больного и секретин внутривеннов дозе 1 ед/кг .веса больного. После стимуляции панкреозимином собирают дуоденальное содержимое в течение 20 мин (порция 9 2), а затем еще три20-минутные порции после введениясекретина (порции Р 3-5), Всего получают 5 порций дуоденального содержимого, измеряют объем каждой порциии во всех определяют активность холестеролзстеразы. Активность холестеролэстеразы дуоденального содержимого определяют флюориметрическимметодом, используя в качестве субстрата холестериловый эфир О"кумаровойкислоты, Растворяют 1 мг холестерилового эфира и смешивают с 40 мкл .тритона х. Добавляют 1 мп буферного раствора, содержащего 0,3 Мфосфата калия и 5 мМ холата натрия(рН 6,6). Смесь тщательно перемешивают, избегая пенообразования. Полученная таким образом дисперсия субстрата стабильна в течение 1 сут,затем 0,02 мл субстратной смеси добавляют к 02 мл указанного буферного раствора и 0,02 мл дуоденальногосодержимого. Инкубируют реакционнуюсмесь при 37 С. Отбирают пробы по0,1 мл и фиксируют их прибавлением0,5 мл буферного раствора, содержащего 0,2 М К СО и 0,2 М НзВО (рН10,4). Затем добавляют 5 мл дистиллированной воды и измеряют приростинтенсивности флюоресценции на флюориметро-ВИАН 130 при 365-470 нм. Вконце измерений добавляют 1 мкг О-.кумаровой кислоты в кювету с цельюопределить, какое количество О-кумаровой кислоты соответствует единицепоказаний флюориметра. Измеряют прирост интенсивности флюоресценции на линейном участке кинематической кривой за 15 мин инкубации реакционной смеси, По измерению прироста интенсивности флюоресценции определяют активность холестеролэстеразы, За 1 ед. активности холестеролэстеразы условно принято такое количество фермента, которое за 15 мин инкубации приводит к образованию 1 мкг О-кумаровой кислоты в 0,1 мл инкубационной смеси.Оценка результатов исследования активности холестеролэстеразы дуоденального содержимого проводится по показателям скорости секреции, определяемой по формуле СЧ/Т, где С- концентрация фермента, ед.; Ч объем порции, мл; Т - время, за которое получена порция, мин,1377740 Анализ крови, мочи и кала - без изменений. В сыворотке крови - повышение уровня липазы 2,2 ед. (н. 0,5- 1,6 ед), содержание остальных ферментов не изменено. Рентгенологическое исследование желудка и двенадцатиперсной кишки: косвенные рентгено. Составитель Л. СоловьевРедактор Э. Слиган Техред Д.Олийнык Корректор Н. Король Тираж 847 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Б, Раушская наб., д. 4/5 Заказ 865/40 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 У больного К. скорость секреции холестеролэстеразы составляет 0,2 ед/мин, что соответствует гипосекреции поджелудочной железы.Следовательно, у данного больного скорость секреции холестеролэстераэы оказалась единственным измененным показателем, позволившим диагностировать хромический панкреатит с нарушением внешнесекреторной функции поджелудочной железы.П р и м е р 2. Больной Т., 37 лет. В течение 5 лет страдает частыми рецидивами болей в левом подреберье. Поступил спустя 3 недели после очередного приступа с жалобами на тупые боли в левом подреберье, иррадиирующие в спину. При осмотре рост 174 см, масса тела 61 кг. Язык обложен белым налетом. Печень и селезенка не пальпируются. При пальпации живота отмечается болезненность в области проекции поджелудочной железы. логические признаки увеличения головки поджелудочной железы.Проведено исследование ферментовтакже в дуоденальном содержимом. Вьгявлено повышение уровня липазы,.амилазы, трипсина. При исследовании активности холестеролэстеразы установлено по методике, приведенной в при 10 мере 1, значительное повышение скорости секреции холестеролэстеразы(2,5 ед/мин). В предлагаемом способеопределение скорости секреции холе-.стеролэстеразы позволяет подтвердить15 диагноз хронического панкреатита сгиперсекреторной функцией поджелудочной железы,Формула и э о б р е т е н и яСпособ определения нарушений внеш 20 несекреторной функции поджелудочнойжелезы путем исследования активностиферментов в дуоденальном содержимом,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения точности и информа 25 тивности, в дуоденальном содержимомопределяют скорость секреции холестеролэстеразы с использованием в качестве субстрата холестерилового эфира,О-кумаровой кислоты и при уровне сек 30 реции 0,8 ед/мин и ниже определяютгипосекрецию поджелудочной железы,а при уровне 2,2 ед/мин и выше - гиперсекрецию.