Способ фиксации образцов биологических тканей для гистологического исследования

(594 СО Я 1 28 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Запорожский государственныймедицинский институт(56) Лилли Р. Натогистологическаятехника и практическая гистохимия,1969, с, 40-645,(54) СПОСОБ ФИКСАЦИИ ОБРАЗЦОВ БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ(57) Изобретение относится к гистологии. Цель изобретения - улучшениекачества фиксации тканей, Образцыбиологических тканей обрабатываютжидкостью, содержащей формалин, ледяную уксусную кислоту, этиловыйспирт и галаскорбин, Затем осуществляют обработку материала по известным методикам, Способ позволяет лучше сохранить ряд микроструктур и повышает Сродство к красителям,3-5 1 13Изобретение относится к медицине,а именно к гистологии.Цель изобретения - улучшение качества фиксации тканей.Способ осуществляют путем обработки образцов биологических тканейв течение -5 сут при 15-25 С жидкостью, содержащей формалин, ледянуюуксусную кислоту и 967.-ный этиловыйспирт, а также галаскорбин при следующем соотношении компонентов,мас,7:Галаскорбин 3-5ФормалинЭтиловый спирт967 32-52Ледяная уксуснаякислота ОстальноеПо окончании фиксации материалобрабатывают по известным методикам -обезвоживают в 967-ном и 1007-номспирте, заключают в парафин, изготавливают срезы, окрашивают известными методами окраски,Дополнительное улучшение окраскидостигают обработкой полученных после указанной фиксации гистологических срезов 1-2 -ным водным растворомчетырехокиси осмия в течение 5 минпри 15-25 С, после чего окрашиваютпа известным методикам,П р и м е р. Кусочки органов итканей толщиной 0,3-0,5 см фиксируют в течение 1-5 сут при 15-25 С методом погружения в фиксирующей жидкости, приготовленной следующим образом,4 г галаскорбина растворяют в47,5 мл ледяной уксусной кислотыдо полного растворения, добавляют3,6 мл концентрированного формалинаи 52 мл 967-наго этилового спирта,.Объем фиксатора должен в 7-10 разпревышать объем фиксируемого материала, Оптимальный срок фиксации3 сут, Фиксацию проводят в плотнозакрывающихся емкостях, Хорошо профиксированные кусочки приобретаюткоричневый оттенок в связи с подкрашивающим эффектом галаскорбина.Повторно фиксатор не используют. После фиксации кусочки, не промывая нводе, обезноживают в двух порцияхэтилового спирта в течение суток,заключают в парафин и приготавливают срезы толщиной 3-О мк па известным методикам,Окраску депарафинираванных срезов проводят па известным методикам, 14251 2 55 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 например гематоксилином и эозином,азур-эазином, крезил-виолетам поНисслю, галлоцианином по Эйнарсону,железным гематоксилином по Гейденгайну, с сокращением сроков выдержки в красителях н 2-10 раз и болеераз по сравнению с принятыми, контролируя визуально достаточность прокрашивания, или после депарафиниронания и промынки в воде срезы вначале обрабатывают 1-27-ным воднымраствором четырехокиси осмия в течение 5 мин при 15-25 С, промывают вводе 1 мин и затем окрашивают поизвестным методикам, При окраскепротравными красителями предпочтительно использовать 27-ный растворчетырехакиси осмия, при окраске другиии красителями - 17-ный,Сравнительное исследование проводили на образцах тканей толщиной0,3 - 0,5 см из головного мозга,(сердца, печени, почек и легких, Образцы из каждого органа обрабатывали раздельно по известному и предлагаемому способам фиксации, Все последующие этапы подготовки материалак исследованию проводились тождественна,Варианты фиксатора, в которыхсоотношения ингредиентов выходятза пределы предлагаемого диапазона,дают менее эффективные результаты,В частности, увеличение концентрации галаскорбина приводит к грубозернистой фиксации,Предлагаемый способ в более пол-ном объеме обеспечивает стабилизацию и сохранение в тканях белков инуклеиновых кислот, эффектиннее предохраняет ткани от возникновенияартефактов, связанных с заключениемобразцов в парафин (н частности, разрывов ткани), лучше сохраняет некоторые легка разрушающиеся микрастуртуры, например щетачную каемку эпителия извитых канальцев почки, повышает сродство к красителям, что позволяет сокращать время окраски в 210 и более раз, повышает прочностьсвязывания тканеных структур с красителями, что препятствует быстромуныцветанию срезов, а также позволяетвыявлять с помощью обычных общегисталагических окрасок (гематоксилином и эозином, азур-эазинам) ряд микроструктур, которые при фиксации по известному способу выявляются только при использовании специальных1314251 методов окрасок, например тигроиднервных клеток и поперечную исчерченность кардиомиоцитов,Составитель А, РыбинаРедактор А, Лежнина Техред Л.Сердюкова Корректор.А. Тяско Заказ 2207/45Тираж 777 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Формула и з о б р е т е н и яСпособ фиксации образцов биологических тканей для гистологического исследования путем обработки их жидкостью, содержащей формалин, ледяную уксусную кислоту и спирт этиловый, о т.л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью улучшения качества фиксациитканей, фиксатор дополнительно содержит галаскорбин при следующихсоотношениях компонентов, мас.Х:Галаскорбин 3-5Формалин 3-5Спирт этиловый 967 32-52Ледяная уксуснаякислота Остальное Ю при этом фиксацию проводят в течение1-5 сут при 15-25 С,