Способ определения иммуноглобулинов в биологических жидкостях “иммунокап

(51) 4 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕ МИТЕТ СССРИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ДЕЛЕНИЯ ИКУНОГЛО ИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ иммун еделе- гическ- ускоДля это исыво(21) 4034329/28-14(56) Оцс 1 п .1. ХпыпцпосЬешхса 1 апа 1 уяя оГ Ьцшап яегцш апй 1 гя ЙасСогя.11 11 ца 11 ГаС 1 чв апс 1 11 цапГ 1 Гаг.1 че апа 1 уядя оГ где Егасг 1 оп яо 1 цЫе 1 п гчо-гЬг 1 с 1 я яацгагей аншопцш яцНа ге. ТЬе я. оЕ 1 шшцпо 1 ояу, 1958, тт. 8, М 5, рр. 376-388.(57) Изобретение относится химии, предназначено для оп ния антипенов в разных биол жидкостях, Цель изобретения рение и упрощение способа. го готовят 10%-ный раствор ротки против иммуноглобулинов А, М,О. Агаровый столбик формируют 0,5%ным раствором агара, содержащим 10%антисыворотки с дополнительным введением полиэтиленгликоля мол.м. 6000или декстрана мол.м. 20000 до конечной концентрации 2-5%, Смешивают .агар с антисывороткой, заливают в капилляры в водяной бане при 50-56 ОС.Нарезанные капилляры длиной 2,5 смпомещают в пластиковые пробирки,куда заливают золь агара с антисывороткой. 11 осле застывания капиллярыцеликом помещают в пробирку с исследуемой сывороткой, а пробирку в термостат при 37 С на 40-48 ч. По окон.чании инкубации считывают результатизмеряя длину столбика преципитациис двух концов в капилляре. По стандартам с известной концентрацией белка строят калибровочную кривую, покоторой находят концентрацию иммуноглобулинов в исследуемой биологической жидкости.12484 2 нов в исследуемой биологической жидкости. К каждой партии капилляров прилагают соответствующую калибро" вочную кривую.Определение концентрации иммуноглобулинов.Приготовление капилляров против иммуноглобулинов классов М, А, 0 проводят аналогично вышеописанной процедуре. Сыворотку крови отсасывают в пластиковую пробирку разового пользования объемом от 0,5 до 1 мл. Три капилляря против 1 дА, М и О пинцетом помещают в пробирку. Для мар 15 20 кирования капилляров можно использовать любую краску по стеклу, например красную краску для 10, зеленуюдля 1 М, желтую для 1 яА. Пробиркус капиллярами помещают в термостатв горизонтальном положении и инкубируют смесь в течение 40 ч. По окончании инкубации с помощью лупы МБС определяют длину столбика преципитации с каждой стороны капилляра, определяют среднюю величину и по калибровочной кривой находят искомые цифры концентрации иммуноглобулинов.,П р и м е р 2. Определение концентрации секреторного иммуноглобулина А и сывороточных 1 дА, М, С с использованием 27. ПЭГв слюне.Капилляры с антисывороткой против секреторного иммуноглобулина А готовят так же, как в описании предлагаемого способа в примере 1. У доноров в пробирку собирают 2-4 мл слюны. Центрифугируют в течение 20 мин при 4000 я и 1 = 20 С. Затем надосадок помещают в пластико. 40, вые пробирки объемом 0,5-1 мл, туда же вкладываются подготовительныекапилляры. Проводят инкубацию при37 0 в течение 48 ч. Для исключениябактериального роста в слюну добавляют 1-2 капли 0,013 мертиолата. 45 Снятие результата и вычисление концентрации секреторного 1 цА проводят аналогично примеру 1.П р и м е р 3В качестве вещества, усиливающего контрастность преципитата используют декстран Т(мол.м. 20000),.приготовление капилляров и считывание результатов прова; дят аналогично предлагаемому способу с использованием ПЭГ.Метод в сравнении с известным способом прост в исполнении, требует гораздо меньше времени - до 48 ч, по известному способу - 7 дней. 1 13Изобретение относится к иммунохимии и может быть использовано для определения антигенов в различных биологических жидкостях.Целью изобретения является ускорение времени проведения способа и его упрощение.П р и м е р 1, Предварительно готовят 10/-ный раствор антисыворотки против иммуноглобулинов А, М и 8. Для этого антисыворотку определенного титра разводят в 1 мл дистиллированной воды, Затем к золю 0,57 агара добавляют полиэтиленгликоль мол.м.6000 в конечной концентрации 5 Е для улучшения контрастирования преципитата. В смесь вносят раствор антисыворотки в конечной концентрации 10% от общего объема, Для получения иссле- дуемой сыворотки берут венозную кровь 4-7 мл в пробирку без антикоагулянта и, после свертывания крови, отделяют сыворотку. Стеклянные капилляры диаметром 1 мм перед использованием выдерживают в смеси Никифорова 30 мин, высушивают и промывают 17. - ным водным раствором агара. Затем помещают в термостат и при 70 С выдерживают 30-40 мин. Цель данной процедуры - создать тонкий слой агарового геля на внутренней поверхности капилляра с тем, чтобы увеличилось сцепление столбика агара с ним.Смешивание агара с антисывороткой и заливку в капилляры проводят в водяной бане при 50-56 С. Нарезанные капилляры длиной 2,5 см помещают в пластиковые пробирки, куда заливают зопь агара с антисывороткой. Можно использовать капилляры различного диаметра, так как ни диаметр, ни дли на не влияют на конечный результат. После застывания капилляры осторожно извлекают пинцетом и помещают в пробирку с любым объемом исследуемой сыворотки, при условии, что весь капилляр (его концы) будут находиться,в ней.Пробирку помещают в горизонтальном положении в термостат при 37 С на 40 ч.По окончании инкубации считывание результата производят измерением дли ны столбика преципитации с двух концов в капилляреПо имеющимся стандартам с известной концентрацией белка строят калибровочную кривую на полулогарифмической бумаге, по которой находят концентрацию иммуноглобули"Составитель В.ЛитовченкоТехред Л. Сердюкова Корректор А. ТдскоРедактор Г.Волкова Заказ 1967/43 Тираж 777 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 3 13124При использовании предлагаемого способа исключается необходимость в специальной дорогостоящей аппаратуре. Немаловажным элементом является значительное удешевление единичного определения, которое достигается за счет резкого снижения расхода специфических антисывороток. Точность метода до 110 Х, она достигается эа счет считывания результатов с обеих 10 концов капилляра и выведения среднего арифметического значения.Хранение капилляров 2-3 мес при 4 С. Для предотвращения бактериаль-.ного загрязнения добавляют консер вант - метриолат 0,01 , 2-3 капли на 100 мл. Формула изобретенияСпособ определения иммуноглобу линов в биологических жидкостях,84 фвключающий формирование в цилиндрическом капилляре с прозрачными стенками и открытыми концами агаровогостолбика, содержащего специфическуюсыворотку, погружение капилляра в ис.следуемую жидкость и определвние концентрации антигенов по величине преципитата, образуемого в агаровыхстолбиках, отличающийсятем, что, с целью ускорения проведения способа и его упрощения, агаровый столбик формируют 0,53-ным раствором агара, содержащим 103 антисыворотки с дополнительным введениемполиэтиленгликоля с мол.м, 6000 илидекстрана с мол.м. 20000 до конечнойконцентрации 2-5%, при этомкапиллярполностью погружают в исследуемуюбиологическую жидкость и инкубируютв течение 40-48 ч в горизонтальномположении.