Способ моделирования стрессорных повреждений миокарда

(50 4 б 09 В 23 ИТЕТ СССР ИЙ И ОТНРЫТИГОСУДАРСТВЕННЫЙ Н ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕН г1 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 8(21) 3562978/2 14(54).СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ СТРЕССОРНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ МИОКАРДА(57) Изобретение относится к медицине, вчастности к экспериментальной патологии,может быть применено для моделированиязаболеваний сердечно-сосудистой системы.Цель изобретения - воспроизведение вялотекущего дистрофического процесса путем внутривенного введения натрнбвой соли циклического 3,5-аденозинмонофосфата. Для этого иммобилизованному животному прово-: дят инъекцию в вену хвоста. Вначале вводят 100-ный раствор кофеина-бензоата натрия из расчета 2,5 мг на 100 .г массы тела животного. Затем через 3 - 5 мин внутривенно вводят свежеприготовленный 1000-ный раствор натриевой соли 3,5-аденазннмонофосфата из расчета О - 20 мг на 100 г массы тела животного. Способ позволяет уточнить механизм повреждающего действия катехоламинов на сердце и.производить поиск новых лекарственных средств для защнтьь миокарда от повреждений и испытания их на модели.Изобретение относится к медицине, вчастности к экспериментальной патологии,и может быть использовано для воспроцз.веления в эксперименте заболеваний сердечно-сосудистой системы.Целью изобретения является воспроизведение вялотекущего дистрофического процесса путем вцутрцвеццого введения цатриевойсоли циклического 3,5-адецозццчоцофосфата.Способ осуществляют следующим образом,Ичмобилизцроваццочу животному про.изводят инъекцию в вену хвоста, предварительно расширенную путем согревания,Вначале вводят 100-цый раствор кофеинабецзоата натрия цз расчета 2,5 чг ца 100 гмассы тела животного, затем через 3 - 5 мицвнутривенно вводят свежепрцготовлецный1000-цый раствор цатриевой соли 3;5-адецозицмоцофосфата из расчета 10 - 20 чг ца100 г массы тела животного.Пример 1. Крыса белая беспородная,самец массой 180 г. Крысу иччобилизируют. Хвост животного согревают в теплой воде 45 - 50 С) для расширения вец хвоста,В боковую вену хвоста шпрццом медленно в течение 1 миц вводят 0,45 чл 1 Я-ногораствора кофецца-бецзоата натрия. Через3 миц в вену хвоста медленно в течение 1 чцц вводят свежеприготовлеццый цаводе для инъекций )00,-цый раствор натриевой соли циклического 35.адецозицмоцофосфата в количестве 0,18 чл (10 мг цаОО г массы тела).После инъекции животное цаходцлось вклетке.Крысу умертвляют деканцтаццей под легкич эфирным наркозом через 15 мицпосле инъекции. Сердце останавливаютпогружением в охлажденный физиологический раствор (4 С). Из боковых стенок правого ц левого желудочков ц чежжелудочковой перегородки через всю толщу миокарда продольно цссскают кусочки для фикса.ции в форглалице ц для ццзкотечпературного хранения, Кусочки, фиксированные в1 ОЯ-цоч забуферецном форчалцце, заливают в парафин ц серийные срезы толщиной 5 чкч окрашивают гематокснлиноми эозицоч; гечатокгцлицочосцовнымфуксином - пикриновой кислотой (ГОФФ).Для гцстохичцчсских и гцстоэцзцчолагичес.кцх исследований кусочки миокарда заморажцвают в цзооктаце, охлаждеццоч жидкимазотом ц ца параллельных криостатныхсрезах толщиной 10 чкч выявляют лцпидыпо 71 эоп, а к явность чогцяч ц шксцдазы(МАО), а-глцперофосфатдегцдрогеназы (а.ГФДГ), лактатлегцдрогецазы (ЛДГ), глюкозо-фосфатдегцдрогецазы (Г-ФДГ), сукцнцатдегидрогецазы (СДГ), цзгццтратдегцдрогецазы (ИДДГ), НАД- ц НАДФ-дегцдрогецаз, р-оксцбутцратдегидрогецазы (р ОБДГ)методами с использованием солей тетра 5 Ю 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 55 золця (ТНСТ); кислой фосфатазы по ВпгМопе. Для исследования состояния сокр- тцтельцого аппарата кардиомиоцитов используют метод поляризационной микроскопии. Степень коцтрактурных изменений кардиомиоцитов оценивают по известным критериям.При изучении полученного материала в миокарде боковых стенок левого и правого желудочков и, в меньшей степени, межжелудочковой перегородки выявляют изменения структуры, гистохимические и гистоэцзимологические особенности кардиомиоцитов. В сократительном миокарде преимущественно боковой стенки левого желудочка и межжелудочковой перегородки обнаруживают группы кардиомиоцитов и отдельные клетки с поляризационно-микроскопическими признаками контрактуриых повреждений 1, 11 и 111 степени. Кардиомиоциты с сегчецтарцыми контактурами И - 111 степени выглядят несколько укороченными, саркоплазма их не выявляет поперечную и продольную исчерченность, окрашивается базофцльцо и обнаруживает фуксиноррагию при окраске ГОФП, которая свидетельствует о нарушении проницаемости сарколеммы. Клетки сократнтельного миокарда с сегментарными контрактурными изменениями 1 степе- ни ц субсегментарнымн контрактурами отличаются неравномерной эозинофилией н так называемой бусовидной и зональной фуксццоррагией. Гистохимнческие особенности чоцтрактурцо поврежденных клеток включают также перераспределение гранул дифор. мазана вдоль мышечных волокон при выявлении ферментов, локализованных на митохондрцальюых мембранах (СДГ, р ОБДГ, НАД-дегидрогеназа), что может быть отражением смещения мнтохондрией из зон контрактуры.В целом гистохимические и гистоэнзимологические изменения миокарда свидетельствуют о быстрой утилизации внутри- клеточных запасов гликогена и угнетении активности ряда оксидоредуктаз, в особенности связанных с пластическим обменом (НАДФ-зависимой ИЦДГ, Г-ФДГ, НАДФ- дегидрогеназы) и обменом катехоламинов (МАО), Активность ферментов цикла Кребса, р-окисления жирных кислот и дыхательной цепи (СДГ, р-ОБДГ, НАД-дегидрогецаза) близка к таковой у интактцых животных.Изменения гемомцкроциркуляции в изученном материале были незначительны, в виде единичных, расширенных, переполненных кровью венул и капилляров,Оример 2. Крыса белая беспородная, самец массой 220 г, Методика проведения эксперимента н используемые гистологические, гнстохимические и гистоэнзимологические методы исследования соответствуют описанным в примере . Раствор кофеина-бензоата натрия вводят в количестве272348 Формула изобретенияСоставитель М. ПознякРедактор С. Патрушева Техред И. Верее Корректор М. МаксимишииеЗаказ 6341/49 Тираж 455 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий3035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патента, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 0,55 мл, раствор натриевой соли циклического 3,5-адено.".инмонофосфата - в количестве 0,22 мл (2 мг на 00 г массы тела).Крысу умерщвляют через 3 ч после инъекции,5Морфологическое изучение миокарда боковых стенок левого и правого желудочковсердца и межжелудочковой перегородки позволило выявить прогрессирование дистрофических изменений кардиомиоцитов до появления признаков необратимых повреждений не- Окоторых из них на фоне незначительныхнар шений гемомикроциркуляции.аряду с углублением контрактурныхповреждений клеток сократительного миокарда, увеличением количества сегментарныхконтрактур 11 степени при неизменном общем числе поврежденных клеток в них пригистохимическом и гистоэнзимологическомисследовании обнаруживают признаки повреждения митохондриальных мембран и:плаэматического пропитывания, В части кардиомиоцитов с сегментарными контрактурами 11 - 11 степени при выявлении активности СДГ, р-ОБДГ, НАД-дегидрогеназы иафоне перераспределения гранул диформазана обнаруживают участки диффузной закраски саркоплазмы, чередующиеся с неокрашенными. Вместе с тем в контрактурно поврежденных клетках сократительногомиокарда выявляют накопление ШИК-положительных амилазоустойчивых веществ, свидетельствующих о плазматическом пропитывании их.В целом в миокарде оставалась пониженной активность ферментов, сопряженных с процессами биосинтеэа (НАДФ-зависимой ИДДГ, Г-б-ФДГ, НАДФ-дегидрогеназы) Активность моноаминоксидазы во. 35всех исследованных отделах миокарда соответствует таковой у интактных животных,что косвенно указывает на нормализациюконцентрации биогенных аминов в миокарде. С этим связаны незначительные нарушения гемомикроциркуляции в виде спазмов единичных артериальных сосудов и нереэко выраженной очаговой гиперемии.Пример 3, 6 крысам белым бесцородным весом 100 - 120 г в вену хвоста вводят1-иый раствор кофеина-бенэоата натрия вдозе 2,5 г на 100 г массы теЛа живот ного и через 5 мнн производят инъекцию свежеприготовленным ОЯ.ным раствором натриевой соли циклического 3,5 аденозинмонофосфата в дозе 20 мг на 00 г массы тела. После инъекции у животных наблюдается учащенное дыхание н сердцебиение, электрокарднопрафически выявлены признаки гипоксии микарда,Материал для исследования забран черези 3 ч после инъекций, В, исследованном миокарде животных наблюдактся выраженные дисциркуляторные изменения в виде полнокровия миокарда, расширения капилляров и артерий наряду со спазмом некоторых из них, расширения капилляров и венул со стаэами в них, переваскулярного и интерстицмального отека, геморрагий и плазморрагий, преимущественно в стенке левого желудочка и перегородки. Изменения в миокардиоцитах выражаются в неравномерном окрашивании цитоплазмы их с чередованием слабо окрашенных участков с исчезновением поперечной исчерченности и появлением поперечной зернистости в цито- плазме и участков пересокращения миокардиоцитов. В миокарде формируются очаги повреждения из групп дистрофически измененных миокардиоцитов, частью гнстопографически связанных с очагами кривоизлия. ний, обнаруживаются отдельные мышечные волокна миокарда с явлениями очагового мноцитолизнса, Перечисленные изменения обнаружены преимущественно в стенке левого желудочка и межжелудочковой перегородки.Способ позволяет уточнить механизм повреждающего действия катехоламинов на сердце и производить поиск новых лекарственных средств для защиты миокарда от повреждения и испытание их на модели. Способ моделирования стрессорных по. вреждений миокарда путем введения животным кофеина-бензоата натрия, отличающийся тем, что, с целью воспроизведения вялотекущего дистрофического процесса, после инъекции кофеина внутривенно однократно вводят раствор натриевой соли циклического 3;5-аденозннмонофосфата в дозе 10 - 20 мг на 00 г массы тела животного.