Способ электрофоретического разделения полиионов

(59 4О 1 И,27/26 П 57 0 Щ(Ь,."1,-", Ц ф Яа 131 ВИЬЛИОТЕЫА САНИЕ ИЗОБРЕТЕН 5 Бюл. У 2олекуляраэССРишев и О88. 8)Диск-элек ологии о сов.Ф офор идетельство СССР 01 М 27/62, 197 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Институт ии биохимии АН К(54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГОРАЗДЕЛЕНИЯ ПОЛИИОНОВ(5) Способ электрофоретического разделения полиионов позволяет повыситьэффективность разделения и ускоритьпроцесс за счет дополнительно накладываемого импульсного напряженияпилообразной формы с плавным нарастанием крутизны переднего фронта ирезким спадом заднего фронта, причемнарастание напряжения осуществляютот базового постоянного напряжения40-600 В . 1 ил .Изобретение относится к областибиологии, в частности к биохимическим способам исследования гетеро. генности полиионов .Целью изобретения является повы шение эффективности и сокращение вре. мени разделения.Способ осуществляют следующим образом.Раствор исследуемых полиионов наносят на поверхность разделяющей среды, в которой находятся электроды, подключенные к источнику тока.Подают импульсы напряжения пилообразной формы и формируют плавное нарастание крутизны переднего фронта . и резкий спад напряжения заднего фрон та, причем нарастание напряжения осуществляют от базового постоянного напряжения 40-600 В. При этом ускоре ние электрофореза достигается тем, что увеличивается величина тока через гель за счет уменьшения, препятствующего этому эффекту поляризации и образования двойного электрического слоя на электродах, в результате импульсного характера напряжения, пода.ваемого на электроды. Повышение концентрирующего эффекта и значительноеувеличение разрешения осуществляет- З 0 ся за счет формы импульса, т.е. плавное нарастание по параболе и резкий обрыв на заднем фронте импульса, Врезультате плавного нарастания напряжения начало движения макромолекул с 35 разной электрофоретической подвижностью в разделяющей среде - неодновременное, а отличается на некото. - рое значение времени лТ в длительности импульса. Параболическая 40 форма позволяет максимально удалить точки на оси времени при минимальном изменении напряжения по оси напряжения, Иаксимальная крутизна задне- . го Фронта обеспечивает устранение 45 обратного эффекта, так как последовательное торможение макромолекул и, следовательно, сохранение ЬТ зависит от крутизны заднего фронта. Прикуполообразном импульсеТ = 0 иэффект отсутствует. При одной и той же длительности импульса для максимального эффекта разделения необходимо добиться минимально возможного пикового напряжения, при максимально возможном базовом напряжении в этом случае л Т имеет максимальное значение.П р и м е р, Электрофоретическое разделение с 6 -амилазы проводят в сравнительном плане с использованием источника питания постоянного тока и импульсного источника питания.Были опробованы следующие режимы разделения." 100150,200,250,300,350, 400, 450 и 500 В на пяти электрофорезных трубках.Установлен оптимум эффективности разделения компонентов при 300 В. При этом режиме эффективность разделения комбинированным постоянным и импульсным методом выше, чем при постоянном напряжении.Электрофореграммы 4 -амилазы, полу ченные двумя сравниваемыми методами, показывают, что импульсный способ разделения позволяет за то же время (1,5 ч) достичь большего продвижения компонентов 1,0,5 см), чем при постоянном режиме разделения. Кроме того, использование импульсного способа электрофореза позволяет при одинаковом нанесении белка добиться более узких зон активности фермента, что указывает на больший концентрирующий эффект способа, т.е. его эффективность, а точнее большую разрешающую способность.ф о р м у л,а и з о б р е т е н и я,Способ электрофоретического разделения полиионов, включающий нанесение образца на разделяющую среду и воздействие на среду электрического напряжения, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения эффективности разделения и ускорения процесса, дополнительно накладывают импульсное напряжение пилообразной Формы с плавным нарастанием крутизны переднего фронта и резким спадом заднего Фронта, причем нарастание напряжения осуществляют от базового постоянного напряжения 40-бОО,В.1239578 Составитель И.Клешнина.дакторВ.Иванова Техред Л.Олейник Корректор М, Максимишине ПодписноеССР роектная,4 оизводственно-полиграфическое предприятие,г.Ужгород Заказ 3388/42 Тираж 77 ВНИИПИ Государственног по .делам изобретений 113035, Москва, Ж, Ра