Способ стимуляции полиморфоядерных лейкоцитов

(71) Киевский ордКрасного Знамениский институт тубелогии и грудной хиФ.Г. Яновского(54) (57) СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ПОЛИМОРФОЯДЕРНЬИ ЛЕЙКОЦИТОВ путем постановки реакции миграции полиморфоядерныхлейкоцитов в агарозе в присутствиистимулятора с последующим учетомполученных результатов, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения функциональной активностилейкоцитов и ускорения способа, в качестве стимулятора используют аскорбиновую кислоту в конечной концентрации ее в агарозе 7-12 мг.7. при этомаскорбиновую кислоту добавляют непосредственно в агарозу и реакцию ставят в т.чение 2,5-3 ч.1 95245более эффективно влияют на функцио 45 50 55 Изобретение относится к медицине,: а именно к иммунологии, и может быть использовано в клинической практике для определения состояния функциональной активности полиморфоядерных лейкоцитов (далее ПЛ) у больных с легочной патологией.Цель изобретения - повышение функциональной активности лейкоцитов и ускорение способа. Способ осуществляют следующим образом.У пациентов из пальца берут каплюкрови в гепаринизированные стандартные стеклянные капилляры. Герметичнозакрытые капилляры с кровью центрифугируют 3 мин при 1500 об/мин. Приэтом на границе плазмы - эритроцитыобразуется слой ПЛ (полиморфоядерных лейкоциТов). Осторожно отрезаюткапилляр до уровня расположениялейкоцитов. Отверстие, противоположное лейкоцитарному столбику, герметизируют расплавленным сургучом. Дляпостановки методики необходимы опытная и контрольная агарозные среды.Растворяют агарозу в деионизированной воде до концентрации 25 мг/мл,прогревают при 100 С в течениео,20 мин, охлаждают до 50 С и добавляют прогретый до 50 С равный объемдвукратной среды Игла МЕМ с 207-нойтелячьей сывороткой в контрольныеи пластиковые чашки, разливают по5 мл приготовленной агарозы. Затемсогласно предлагаемому способу вопытные чашки разливают агарозу,предварительно добавив в нее раствор иммуностимулятора в определенной концентрации, например 0,067-ныйраствор аскорбиновой кислоты (АК) израсчета 7-12 мг конечной ее концентрации в агарозе. После застыванияагарозы с помощью шприца и иглы, диаметр которой равен диаметру капилляра, делают лунки, в которые вставляют капилляры с ПЛ. Чашки инкубируют 2,5-3 ч при 37 С во влажной атмоосфере 57 СО и 957. воздуха. Миграциюклеток до и после взаимодействия сАК оценивают с помощью окуляр-микрометра, измеряют дистанцию продвижения ПЛ в трех противоположных направлениях и определяют среднюю величинукак в стимулированных, так и в нестимуллированных АК ПЛ, Для определения индекса стимуляции миграции(далее ИСМ) вычисляют соотношение 1 О 15 20 25 30 35 40 между средней дистанциеи стимуллированных и нестимуллированных ПЛ. ИСМ позволяет определять способность ПЛ воспринимать стимулирующее . влияние иммуномодуляторов, в частности АК. Методика позволяет произвести под бор иммуномодуляторов, которые наинальную активность ПЛ, что является важным критерием в подборе лекарственных веществ при лечении больных с заболеваниями легких, в патогенезе которых доминирующим является фагоцитоз.П р г м е р 1, Донор крови Качалов Д.А., 25 лет, поступил на донорский пункт. Донору было проведено клиническое обследование. Заключение терапевта: донор умеренного питания, нормального телосложения, кожные покровы чистые, тургор кожи хороший, слизистые влажные, розовые. Лимфоузлы во всех группах не пальпируются. Печень - у края реберной дуги. Живот на всем протяжении мягкий, безболезненный. Пульс - 78 уд/мин хорошего наполнения и напряжения. В сердце тоны ясные, чистые. На всем протяжении легочных полей перкуторный звук не изменен, дыхание везикулярное. Общий анализ крови: Э - 5 млн; Гемоглобин 140 г/л; Лейкоциты 6 10 л; Э - 1,П-З; С; Л; М; СОЭ - 2 мм/ч. Общий анализ мочи без патологии. Исходя из результатов клинического обследования следует, что донор, взятый для проведения иммунологического обследования, практически здоров. В дальнейшей работе по обследованию больных с легочной патологией данные показатели считать нормой. Иммунологическое исследование крови выполнено согласно предлагаемому способу: определение миграции ПЛ до взаимодействия крови с АК при инкубации 3 ч при 37 С; определение миграции ПЛ крови после взаимодействия с АК также при инкубации 3 ч при 37 С; определение миграции ПЛ крови до взаимодействия крови с левамизолом при инкубации 3 ч прио37 С; определение миграции ПЛ крови после взаимодействия крови с левамизолом при инкубации 3 ч при 37 Со Таким образом, постановка реакции определения миграции ПЛ до взаимодействия с АК равнялась 6,7 усл.ед., апосле трехчасовой инкубации с АК - 3,13 усл.ед. ИСМ - 1,21 усл,ед, Исходя иэ величины полученного ИСМ, можно установить, что у данного донора ПЛ могут воспринимать активирующий стимул АК, что указывает на способность этих клеток осуществлять фагоцитоз, обеспечивающий полно, ценный иммунный ответ. Таким образом, постановка реакции определения миграции ПЛ до взаимодействия с левамизолом равнялась Ь,7 усл.ед., а после трехчасовой инкубации с левамизолом - Ь,7 усл.ед. Стимулирующего эффекта не произошло, у данного донора ПЛ не могут воспринимать активирующий стимул левамизола.П р и м е р 2. Донор крови Гордиенко А.П., 27 лет. Донору было проведено клиническое обследование, Заключение терапевта: донор умеренного питания, нормального телосложения. Кожные покровы чистые, тургор хороший, слизистые розовые, чистые. Лимфоузлы во всех группах не пальпируются. Печень пальпируется в края реберной дуги. Живот на всем протяжении мягкий, безболезненный. Пульс - 72 уд/мин, ритмичный, хорошего наполнения и напряжения. В сердце тоны ясные, чистые, На веем протяжении легочных полей перкуторный звук неизменен, дыхание везикулярное. Общий анализ крови без патологии. Анализ мочи нормальный. Исходя из результатов клинического обследования следует, что донор, взятый для проведения иммунологического обследования, практически здоров. В дальнейшей работе по обследованию больных с ле 1 гочной патологией данные показатели можно считать нормой.Иммунологическое исследование крови выполнено согласно методике, предлагаемой в изобретении: определение миграции ПЛ до взаимодействия крови с АК при инкубацин 3 ч при 37 ОС; определение миграции ПЛ крови после взаимодействия с АК также при инкубации 3 ч при 37 оС; определение миграции ПЛ крови до взаимодействия крови с левамиэолом при инкубации 3 ч при 37 С; определение миграции ПЛокрови после взаимодействия крови с левамизолом при инкубации 3 ч при 37 С. Таким образом, постановка реоакции определения миграции ПЛ до взаимодействия с АК равнялась 4,1 усл. ед., а после трехчасовой195245 4инкубации с АК - 8,83 усл. ед.8,83ИСМ = в= 2 15 усл. ед. Поста 4,1 50 55 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Исходя иэ величины полученного ИСМ, можно установить, что у данного пациента ПЛ не способны достаточно активироваться АК, что указывает на угнетенное состояние функциональ-. ной активности ПЛ, осуществляющих1реакцию фагоцитоза, которая обеспечивает полноценный иммуиный ответ, Препарат левамизол ке производит стимуляции ПП крови.