Способ криоконсервации спермиев тутового шелкопряда

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 19)А 01 К 67 04 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ ИОТНРЫТИ А ИЭОБРЕТ 4Ъ(54)(57) СПО СПЕРИИЕВ ТУТО введения спе замораживани ния, о т л и что, с целью ющей способн живание и хр в копулятивн из оплодотво пературе жид 15 путе ктор хран е воря ораедут еннь темное осе- Автореф И. Искусствен о шелкопряда нт, 1960, с.(56) Осташко фживание и длитепроизводителей1978, с. 254,Шевякова И,менение тутовогканд.дис. Тапке Бюл. В 27А.А.Бегма,Н,Кириченконаучно-производствен"Укрплемгрена"8.8)И. Глубокое заморальное хранение спермыКиев "Урожай" 1168170 ОБ КРИОКОНСЕРВАЦКВОГО ШЕЛКОПРЯДАрмиев в криопротеи последующегоч а ю щ и й с яповышения оплодости спермиев, замнение спермиев вых сумках, извлеченных самок,.приого азота.Изобретение относится к сельскомухозяйству , в частности к щелководству, и может быть использовано вселекционной и племенной работе стутовым шелкопрядом. %Цель изобретения - повышениеоплодотворяющей способности спермиевтутового шелкопряда при длительномхранении.П р и м е р. Сразу же после получения копулятивных сумок их помещаютв криозащитную среду следующегосостава: сахароза 11,5 г, глицерин5 мг, желток куриного яйца 20 мл,вода 100 мп. Затем копулятивные сумки 1со средой помещают в холодильник при+5 С на 5 ч. Замораживание проводятв форме гранул объемом 0,2 мл вячейках фторопластовой кассеты,ф оохлажденной в парах азота до -80 С, 20В каждой грануле замораживают однукопулятивную сумку. После полнойкристаллизации гранулы переносят вжидкий азот (-196 С), в котором ихохранят, 25Для оттаивания замороженную гранулу помещают в 2,9 Х-ный раствор лимоннокислого натрия, предварительноподогретого до 40 С, После этогофлакон сразу же переносят в водную ЗОбаню при 25 С,Биологическую полноценностьспермиев тутового шелкопряда определяют по следующим показателям:активность спермиев определяют визу- Зально (под микроскопом с увеличением 100-200 раэ) и выражают в процентах живых спермиев; выживаемостьспермиев определяют.по ГОСТ 20,909.4-75, принятому для спермиев быков,показатель выражает время жизни спермиев в часах при оптимальных условиях (= 25 С).Оплодотворяющую способность спермиев определяют сразу же после оттаивания копулятивных сумок. Для этогооттаивающую копулятивную сумкупомещают в 2,9 Х-нцй раствор цитратанатрия, прокалывают пастеровской микропипеткой, отсасывают спермии,а затем вводят пипетку в копулятивное отверстие неоплодотвореннойсамки и вдувают спермии внутрь отверстия самки. Одновременно неоплодотворенных самок той же партии осеменяют спермой, полученной из копулятивных сумок без замораживания(опыт 1 ). Базовым контролем (опыт у )служит естественное осеменение самокпутем спаривания их с самцами. Продолжительность спаривания 120 мин.Опыты проводили с породой Бул.в 1981"82 гг. Проведено две серииопытов по приведенной методике замораживания спермиев тутового шелкопряда. В первом опыте спермии хранили30 дн, во втором - 180. Осеменяли по50 самок на вариант. Результаты опытов замораживания на качество спермиев тутового шелкопряда представлены в табл. 1.Данные табл. 1 свидетельствуюто том, что в процессе замораживанияпо разработанной методике сохраняется живыми до 50 Х спермиев (до замораживания подвижных в опыте 1 -53,5 Х, после оттаивания 34,58 Х, вопыте 5 - 80 Х до замораживания и38,9 Х после оттаивания).Результаты оценки оплодотворяющейспособности спермиев при искусственном осеменении представлены втабл. 2,Из приведенных данных видно, что спермии тутового шелкопряда, хранящиеся по предлагаемому способу по оплодотворяющей способности не уступают контрольно, используемым для осеменения сразу после извлечения из копулятивной сумки (беэ замораживания).Таким образом, предлагаемый способ длительного хранения спермиев тутового шелкопряда позволяет сохранить их высокую биологическую активность в течение длительного времени хранения,1168170 фТаблица 1 Опыт при и = 20 Показатели езамороженной спермы:сть спермиев Х ачество 1 + 4,72 3,5 13 тив 78 + 2,5,25 + 1,149 ыживаемост ачество замороженной сперм копулятивных сумкахф 8,9 + 6,11 тивность спермиев78 + 0,40 выживаемость,ачество замороженной спермыне капсул: 15,81 14,25 Д,2 активность спермиев31 + 0,20,03+ 0,18 ыживаемость,ачество замороженной спермыри 5 С (по известному способу тивность спермиев,0 выживаемость,блица ариант хранения спермиев сего плодотвоенные размороженной 43,7 ф 2,1 453,0 Осеменение свежей спермой(без хранения, опыт 1) 07,0 8 ф 1,5 Естественное спаривание ( семенениезовый опыт и) 548,3 5 99,2 ф Составитель И. Марченкобкова Техред С.Мигунова КорректорО. Тигор едакт Подписное Заказ 4529/ аж 743 ВНИИПИ Государствен по делам изобретен113035, Москва, Ж Р ого комитета Сий и открытий ушская наб д Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Осеменениспермой 34 ф 58 Ф 4 в 381 3,08 +0,256 еднее количествоиц в кладке, шт. Оплодотворенныеяйца в кладке, Х