Способ определения грибов при грибковом поражении древесины растений

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) П) 3 б 1) С 12 И 100 АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 3320716/30-15 17.06.81 07.01.84. Бюл С.М. Майданик Украинский на кий институт 634.0.844.4 ((56) ческ дова етоды микологических иссле 166-168. Н. А атол 937,Наумо ит й Ванин С.И. Метоибных болезнейИнститут защиты 2 ний сины 1930 исследоваса и древеастений,СУДАРСТВЕННЦЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРИБОВПРИ ГРИБКОВОМ ПОРАЖЕНИИ ДРЕВЕСИНЫРАСТЕНИЙ, включающий выделение мицелия грибов из мест поражений сполучением чистых культур моноспоровых изолятов и их идентификацию, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности,идентификацию осуществляют путемсравнения культуральных и морфологических признаков моноспоровых изолятов с эталонами для гомоталличных грибов или скрещиваний моноспоровых изолятов с моноспоровымиизолятами-эталонами для гетероталличных грибов.45 50 60 65 Изобретение относится к микологии и фитопатологии и, в частности, к способам обнаружения, выделения в чистые культуры и идентификации грибов-патогенов живой древесины.Известен способ микологического анализа пораженной древесины произрастающих деревьев, включающий проращивание внутридревесного мицелия во влажных камерах и проведение последующей его идентификации по культуГально-морфологическим признакам 1 .Недостатком способа является его низкая точность,Наиболее близким к изобретению по технической сущности является способ микологического анализа, включающий отбор проб (небольших кусочков древесины) из центральной части поражения, размещение проб на твердых питательных средах в чашках Петри, переведение проросшего из проб мицелия грибов в чистые культуры, проведение идентификации выделенного из пораженной .древесины мицелия (чистых культур) грибов путем сравнения по культурально-морфологическим признакам с мипелием имеющихся чистых культур-грибов разрушителей древесины (или их .описаниями), выделенных непосредственно из траммы их плодовых тел 2 .Недостатками известного способа ,являются низкая точность и достовер", ность. Так, можно обнаружить, выделить и идентифицировать патоген только в том случае, когда весь процесс поражения древесины от момента ее заражения и до полного разложения осуществляется одним грибом, когда внутридревесный мицелий этого гриба не претерпевает никаких морфологических изменений (остается идентичным по культурально-морфологическим признакам с мицелием, проиэрастаемым непосред.ственно из траммы его плодового тела) и в культуральных условиях хорошо отличается от мицелия других дереворазрушающих грибов. Однако поражение живой древесины, как правило, осуществляется несколькими следующими в определенном порядке друг за другом грибами - разрушителями древесины; гриб-патоген, проникнув в живую древесину и продвигаясь в продольном, поперечном и тангенциальном направлениях, использует в основном простые, растворенйые в клеточном соке и сосудах питательные вещества и затем уступает место. грибам-сапрофитам, использующим в уже мертвой древесине ее сложные компоненты: лигнин, целлю 5 30 15 20 25 30 35 40 лозу. Поэтому при отборе проб только из центра поражения не исключена воэможнось упустить патоген и принять за паразита следующий за ним гриб-сапрофит. Гетероталличные виды деревораэрушающих грибов, которые в данной группе грибов составляют большинство в стадии мицелия полиморфны, отдельный вид может иметь до 4-х хорошо различающихся по культурально-морфологических признакам форм мицелия. Все эти возможные формы мицелия деревораэрушающих грибов широко распространены в природе и большинство из них идентифицировать по культуральноморфологическим признакам практически невозможно.Еще одно обстоятельство, затрудняющее проведение идентификации мицелия деревораэрушающих грибов по культурально-морфологическим признакам, состоит в том, что многие виды этих грибов даже в стадии нор. - мального диплоидного мицелия, особенно близкородственные виды, мало различимы в культуральных условиях.Целью изобретения является повышение точности и достоверности мико- логических анализов пораженной древесины.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу микологического анализа поражений древесины произрастающих растений, включающему выделение мицелия грибов иэ мест поражений с получением чистых культур (моноспоровых изолятов) и их идентификацию, идентификациЮ осу; ществляют путем сравнивания культуральных и морфологических признаков моноспоровых иэолятов с эталонами для гомоталличных грибов или скрещиваний моноспоровых изолятов с моноспоровыми изолятами-эталонами для гетероталличных грибовП р и м е р. С больного дерева, например с его пораженной многолетней ветви, берут образцы длиной 20-30 см. В лаборатории образцы протирают спиртом и освобождают от коры. Затем на отдельно взятом образце в 10-15 см от одного иэ концов делают поперечный срез и из открывшейся в его плоскости пораженной зоны, начиная со здоровой древесины и последовательно до оси продольного (центрального) распространения поражения при помощи стерильного ножа вырезают дифференцированно до 10 .кусочков (проб), которые помещают на твердые питательнье среды в чашки Петри. Проросший из проб мицелий переводят в чистые культуры, Перед этим предварительно подготавливают монаспоровые изоляты-эталоны изплодовых тел грибов, обнаруженных1065474 Составитель А. МакаровТехред С. Легеза Корректор О, Билак Редактор Т, Кугрышева Заказ 11008/30 Тираж 525 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 на деревьях исследуемой породы.Выделенные из древесины чистые культуры грибов разделяют на репродуктивные и стерильные, Репродуктивныекультуры в свою очередь разделяютпо культурально-морфологическимособенностям их моноспоровых изолятов на гетероталличные и гомоталличные. Гомоталличные грибы идентифицируют путем сравнения их моноспоровых изолятов по культурально-морфологическим признакам с моноспоровыми изолятами гомоталличных грибовэталонов. Гетероталличные грибыидентифицируют путем скрещиванияих моноспоровых изолятов с моноспоровыми изолятами-эталонами гетероталличных грибов: образованиемоноспоровьЫ изолятом исследуемогогриба с одним из моноспоровых изолятов-эталонов репродуктивной культуры дает полное право отнести исследуемый гриб к виду, характеризующему этот эталон, стерильный мицелий идентифицируют путем скрещивания его с мицелием моноспоровых изолятов-эталонов гетероталличных грибов: образование стерильным мицелием с одним из эталонов репродуктивной культуры дает право отнестиего к характеризующему этот эталонвиду гриба. Анализ должен иметьдесятикратную повторность.Для анализа были взяты 9 образ цов древесины яблони;, пораженной"млечным блеском" (8 егецв рцгРцгецшРегв). Микологическим анализом попредложенному способу патоген БСегеит Ригрцгечш был выявлен во всех 15 9 образцах, в то же время известнымспособом патоген удалось выявитьтолько в одном образце.Как показано в примере осуществления, способ микологического ана О лиза поражений древесины произрастающих растений обеспечивает повышение точности и достоверности анализа.