Способ определения рецессивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью

Б И С 01 Н 33 48 АНИЕ Н АВТО ОМУ СВ ЕПЬСТВУ(21) (22) (46) (72) 0 НОГБЕЛнен атыповевной би ство СССР, 1979. те /4 3415123/ 30. 03. 82 23,07,83 Э.Б. Все Ю,ф. Мартынов (71) Институт ологии АН Каз (53) 575.113 (56) 1. Автор Р 681373, кл. Бюл. Р 27олодов, И.Ф.и К.М. Разозэкспериментахской ССР088. 8)кое свиде лС 01 И 33 8 РЕТЕНИЯ 54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЦЕССИВО ГЕНА ПИГМЕНТАЦИИ У ЖИВОТНКХ С Ой ШЕРСТЬЮ путем измерения измеий ее характеристик после облучеия ультрафиолетовыми лучами, о т и ч а ю щ и й с я тем, что, с цеью повышения точности и быстроты пособа, в качестве измеряемой хаактеристики используют интенсивость люминесценции пробы шерсти.,сельскохозяйственных животных, преимущественно овец, и может быть использовано для проверки отбираемыхдля племенного использования животных на гомозиготность по белой масти и для отбора из стада гомозиготных или гетерозиготных особей дляпроведения генетических экспериментов.Известен способ определения рецессивного гена пигментации шерсти уживотных с белой шерстью, основанныйна изучении изменения сигнала электронного парамагнитного резонанса после ультрафиолетового облучения образ цов шерсти ) 1),Недостатком этого метода являетсяустановление присутствия гена уданной особи по результатам корреляционного анализа, т.е. по результа- Отам обязательного исследования образцов шерсти от (как минимум) нескольких десятков животных.Целью изобретения является повышение точности и быстроты способа,В способе определения рецессинного гена пигментации у животных с белой шерстью путем измерения изменений ее характеристик после облученияультрафиолетовыми лучами в качествеизмеряемой характеристики используютинтенсивность люминесценции пробышерсти.П р и м е р. Для осуществленияпредлагаемого способа можно испольэовать в качестве флюориметра, например, люминесцентный микроскоп МЛсмикрофотометрической насадкой ФМЭЛ 1 у 4.2 ( н состав которой входит фотоэлектронный умножитель ФЭУА, со.единенный с электрометрическим усилителем У 5-7), а в качестве ультрафиолетового облучателя - терапевтическую установку ОРКсо ртутнокварцевой лампой высокого давленияПРТ. Образцы состриженной весной 45шерсти из нижней защищенной сохранившимся жироотом части штапеля моютн трех сменах ксилола, высушивают прикомнатных условиях, нарезают ножницами на короткие отрезки длиной около 0,5 мм, помещают в дистиллированную воду, налитую на чистоепредметное стекло, и, по возможности, равномерно распределяют на предметномстекле. Препарат хранят в темнотеили при слабом рассеянном освещениидо полного высыхания в течение нескольких часов. Далее препарат устанавливают на столик люминесцентногомикроскопа, предварительно отьюстиро"ванного для наблюдения волос в свете 60их люминесценции при освещении сверху через объектив светом ртутной лампы сверхвысокого давления ДРК,пропущенным через светофильтр УФС 3(5)(зона пропускания 300-400 нм).Вы 65 бор чувствительности прибора диафраг-. мы осуществляется с таким расчетом, чтобы темновой ток ФЭУ не превышал 10-20 длины шкалы гальнанометра усилителя У 5-7,а помещение на столик микроскопа эталона яркости люминесценции - уранового стекла ЖСтолщиной 1,5 мм,при использовании зонда 0,1 мм насадки ФМЭЛУ 4.2 при объек тине 40 х и запирающем светофильтре ЖС(2) с зоной пропускания больше400 нм вызывает дополнительное отклонение стрелки гальнанометра еще на 1/3 шкалы. Для измерения яркости. люминесценции волос устанавливается зонд 0,5 мм. При этих условиях диаметры наблюдаемых в окуляр изображений волос оказываются немного большим, чем диаметр иэображения зонда.Перемещая предметный столик микроскопа, последонательно устанавливают изображения 100 волоскон так, что центр зонда оказывается на продольной оси.нолоса, и для каждого волоска регистрируют показания гальванометра, соответствующие яркости его люминесценции. Затем стекло с волосками подвергают облучению лампой ДРТ(лучистый поток при длиневолны 240-320 нм равен 30 Вт) с расстояния 05 м в течение 1 ч, после чего вновь наливают на препарат дистиллированную воду и после высушивания стекла с волосками в темноте или на рассеянном свету в течение несколь ких часов. повторяют процедуру измерения яркости люминесценции 100 волосков, Далее для 100 волосков вычисляют среднюю яркость по (31) ипосле ( Зф ) облучения лампой ДРТи разность средних яркостей выражают в процентах исходной яркости3 иь-ЭЬЭ"- - -100На чертеже представлен график осуществления способа,Животные, образцы шерсти которыхимеют Ь 3 больше 29, являются гомоэиготнымй по доминантной белой масти, т.е. лишены рецессивного гека пигмен-. тации шерсти, а образцы с ДЗ меньше 21 принадлежат гетерозиготам, т.е. животным, несущим рецессивный ген пиг ментации. В силу стохастических флюктуаций в редких случаях возможно получение значений Д.Э меньше 30 и больше 21, В этом случае необходимо произвести повторные измерения Э 1 и Зф на новом препарате шерсти от того же животного и взять среднее значение прежнего и нового значения ь.), которое неизменно оказывается или больше или равно 30 или меньше 21.Преимуществом предлаГаемого способа является возможность определить наличие у данного животного рецессивного гена пигментации шерсти, ограничившись исследованием шерсти только1030726 Составитель А. МакаровТехред А.Ач Корректор О. Билак Редактор Н. Лазаренко Тираж 873 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5Заказ 5203/45 филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 этого животного без исследования многих десятков других животных, как это.го требует существенный способ, основанный на ЭПР-спетрометрии образцовшерсти с последующим корреляционныманализом. Это существенно, когда возникаЕт необходимость исследоватьконкретное животноенамеченное дляширокого генетического использования,на наличие рецессивного гена пигментации шерсти, О В этом случае предлагаемый способ снижает .необходимость в трудовых затратах на сбор шерсти от многих десятков особей, расходы времени и ма териалов и взвешивание большого числа образцов шерсти, необходимых для проведения корреляционного анализа,н потребность в самом проведении десятков записей ЭПР-сигналов и ихкорреляционном анализе. Процедураприготовления препарата шерсти дляфлюориметрического исследования нетребует такой медленной процедуры,как взвешивание образцов на аналитических весах, без которого нельзяобойтись при ЭПР-спектрометрическомспособе определения рецессивногогена. Время измерения яркости люминесценции одной пробы шерсти составляет 30 мин. Эа три рабочих дня квалифицированный лаборант может исследовать 10 образцов с учетом необходимости двухкратного флюориметрирования образца, мытья, смачивания, сушки шерсти и настройки прибора по эта"лону яркости.