Способ определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскикСоцнапнстнческнкРеспублнк пи 946549//А 61 В 10/00 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 300782(71) Заявитель Астраханский государственный медицинский и ститрЖЬЛИОТЕЫй ж. А,В. Луначарского(54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ СПЕРМЫ ПРИ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЕ Изобретение относится к медицине, а именно к иммунохимии, и может быть йспользовано в судебной медицине.Известен способ определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе путем экстракции содержимого исследуемых пятен с последующим анализом полученного экстракта 13.Однако известный способ не обладает высокой точностью из-за низкой специфичности: содержание кислой фосфатазы в сыворотке крови, лейкоцитах, соке, некоторых растениях.Цель изобретения - повышение точ 5 ности способа.Поставленная цель достигается тем, что в способе определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе путем экстракции содержимого исследуемых пятен с последующим анализом полученного экстракта, экстракцию проводят буфером, содер.жащим 0,1-0,5 тритона Хв течение 18-24 ч при 18-20 С, в экстракте. выявляют простатический (5 -глобут лин в реакции иммунэдифузии в агаре и при положительной реакции определяют наличие спермы.Способ осуществляют следующим образом. О наличии спермы в пятнах судят по выявленному простатическому бетаглобулину, Простатический бета-глобулин ( ПБГ) выявляют в составе тканевых экстрактов предстательной железы человека и в сперме иммунохимическими методами с помощью кроличиьих антисывороток, полученных иммунизацией кроликов тканевыми. экстрактами предстательной железы по общепринятым схемам с применением полного Адьюванта Фрейнда. Перед . применением антисыворотки абсорбируют . сывороткой крови и смесью экстрактов органов ( печень, почка, селезенка, мозг, легкое ) взрослого человека. Получив моноспецифическую тест- систему на ПБГ, проводят анализ распространения этого антигена в тканях человеческого организма. Этот антиген постоянно выявляется в экст" рактах предстательной железы и семенной плазме. Определение физико-хими- ческих свойств ПБГ показывает, что это белковый антиген с относительной электрофоретической подвижностью 0,36, обладающий молекулярным весом 31700+2200 (по данным гельхроматографии на сефадексе ф),и коэффициентом диффузии 1,0 бх 10смфсПБГ946549 Формула изобретения Составитель Т. Журавкина Редактор Н. Кешеля Техред М. Рейвес . Корректор А. ГриценкоЗаказ 5388/7 Тираж 714 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Филиал ППП фПатент", г. Ужгород, ул.Проектная, 4 высаливается сульфатом аммония при50-ном насыщении, не осаждается0,4-ном раствором риванола, устойчив к воздействию хлорной кислоты,трихлоруксусной частично осаждается), устойчив к воздействию температуры (при .65 Св течение 30 мин),не обладает фосфатазной, эстеразнойи протеазной активностью.Выявляют следующие этапы очистки.1, Приготовление экстрактов ткани 1 Она дистиллированной водев соотношениивес/объем 1:3.2. Осаждение ПБГ сульфатом аммония при 50-ном насыщении.3Гель-Фильтрация на колонкесефадекса 9 -200, уравновешенной0,5 М раствором НаСЯ на фосфатномбуфере рН=7,4,4. Фракции, содержащие ПБГ, сливают и после диализа подвергают ионнообменной хроматографии на. сефадексе Атриссолянокислый буфер рН -=8,0) 0,01 М,ПБГ при этих условиях несвязывается с ионообменником и выходит в объеме стартового буфера.Чистоту препарата проверяют в опытахиммуноэлектрофореза и дискэлектрофореза,П р и м е р. Поступивший на исследование в судебно-медицинскуюэкспертизу материал в виде кусочков ткани с пятнами белесого цветапомещают в пробирки и вносят по1,0 мл трис-глициринового буферарЙ, содержащего 0,1 тритонаХ. Экстракция продолжается 18 ч З 5Опри комнатной температуре 18 С. Затем полученные вытяжки из пятен отделяют от ткани-носителя пятна центрифугированием 1000 об/мин в течение10 мин и используют для исследования 40в реакции преципитации. Для этогона предметных стеклах, залитых 1-нымраствором агара на 0,85-ном хлориденатрия пробивают штампом "семерка",В центральную лунку наливают моно,специфическую кроличью антисывороткук простатическому бета-глобулину,В две диаметрально противоположныепериферические лунки вносят препаратпростатического бета-глобулина, кото рый служит тест-антигеном.В оставшиеся периферические лунки .вносят три исследуемые пробы и одну лунку заполняют контрольным раствором. Таким образом заполняют триштампа, поставив в реакцию одновременно все 9 исследуемых проб. На другой день оценивают результаты реакции. Оценку проверяют по подгибу линии прецнпитации сформировавшейсятест-системы,Предлагаемый способ определенияналичия спермы в исследуемых пятнахобладает высокой точностью. При положительном результате реакции судято наличии спермы в пятне. Способне требует для своего осуществленияморфологических методов окраски полученных отпечатков. Способ значительно прост по сравнению с ранееизвестными и сокращает затраты времени. При осуществлении способа нетребуется дополнительных затрат нареактивы и оборудование, Белок, проба на который положена в основуреакции, устойчив к действию органических кислот, этанола, высокойтемпературы, т.е. тех воздействий,которые могут разрушать сперматозоиды. Длительное хранение высушенныхпятен не изменяет результатов реакции. Предлагаемым способом можно исследовать одновременно несколькопроб. Способ определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе путем экстракции содержимого исследуемых пятен с последующим анализом полученного экстракта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, экстракцию проводят буфером, содержащим 0,1 - : 0,5 тритона Х, в течение 18- 24 ч при 18-20 С в экстракте выявляют простатический )5 -глобулин в реакции иммунодифузии в агаре и при положительной реакции определяют наличие спермы.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1, Чарный В.И. О примеНении количественной реакции на кислую фосфатазу при исследовании семенных пятен,В кн.Актуальные вопросы судебной медицины и криминалистики. Л "Медицина", 1966, с.141-142.