Способ определения -токоферилхинона в биологической жидкости

оНС Н ъ- На ОЛ ЙСАНИ ИЗОБРЕТЕН И К АВТОРСКОМУ СВИДНЕЛЬСТВ ь.еюз ь.аеетскихСоциалистическихРеспублик 1679206(бЦ Дополнительное к авт. свнд(г 2)Заявлено 16.11.77 (21) 25 с присоединением заявки Ж - (23) Приоритет 195/28-13 51)М. Кл,А 61 В 10/6 01 й 33 Ъднннтла:ьй вылат асср аа доню азнарнтааа в нк тцаата опубликования описания 15 08. Сед айфутдиновс 1) Заявитель кий государственный медицинск ститутколичество до 25 млороформа и метан ем ют и доводят еедобавки смесиношении 2:1.К полученнодистиллированнванием и оставл ис- ер токоферилпутем экстра. шарив анием вания Пирки ра алия содержимое про фазы, верхняя из кые компоненты, а нн тс спечиваетя а.токофе оторых со.жняя - ли. ся нанелипидн слаивдержит10 виды. Верхнюю фазу отсасыванием с помощьюпипетки удаляют, а границу раздела промываютранее приготовленной смесью хлороформа, метанола и воды в соотношении 8:4:3, при этомдля промывки используют только верхнюю фа. зу даннон смесиПосле этого промытый экстракт липидовпомещают в емкость устройства, а емкость помещают в термостат и осуществляют процесс Ивыпаривания липидов с одновременной подачейазота и отгонкой растворителя через отвод ва.куум-насосом. Выпаривание осуществляют в двефазы. В первую фазу - до получения сгущен.ного остатка, а вторую фазу осуществляют п Изобретение относится к области биохимиии может быль использовано в медицине приследовании биологических жидкостей, напримк роли.Известен способ определения а.хинона в биэлогической жидкостигарования пробы с последующим вьи высупчваыем экстракта Щ,Однако известный способ не обеточного количественно-, э определенирилхинона.Целью изобре.ения является р.=,;поспектрометрирование целевого продукта.Цель достигается тем, что высушенньгй экстракт растворяют в спирте, затем обрабатьгвают щелочью.Способ осуществляют следующим образом,Из крвв, взятой у донора в количес 1 веИ , методом центрифугирования предваритеч:-:.- ;иготавлив.т сыворотку крови. Затеммь .лворотки смешивают в гробирке, содер.жнщ.й 20 мл смеси хлороформа и метанола,взятьх в соотношении 2:1, для экстракции лиьидов, После этого полученную смесь фвпаруола в,соот. экстракту добавляют 5 мл воды, перемешивают встряхи. ют его на 12 часов для отстаи.679206 Формула изобретения Составитель С. Малютина Редактор О. Торгашева Техред Э,Чужик - КорректорМ. ШарошиЗаказ 4638/2 Тираж 672 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4)5 Филиал ППП фПатент", г. Ужгород,ул, Проектная, 4 3ле перемещения сгущенного остатка из емкости/в ампулу. капилляр путем наклона емкости в сторону ампулы до полного перемещения сгущенно.го остатка иэ емкости в ампулу. Выпаривание вовторой фазе до остатка постоянного объема осу.ществляют в ампуле путем помещения его в термостат также в условиях вакуума с подачей азота.После выпаривания ампулу-капилляр отсоединяют от отвода, закрывают пробкой.шлифом,а затем лнпиды, находящиеся в ампуле, раство 1 Оряют в 0,1 мл этилового спирта, добавляют 5капель 1% КОН н тем самым осуществляют перевод а токоферилхинона в семихиноидное состояние, при этом процесс перевода осуществляют при одновременном продувании азотом в те"чение 2 мин. После этого ампулу с содержимымпомещают в резонатор радиоспектрометра "Рубин" и проводят исследование содержимого путем записи сигнала,первую запись сигнала осуществляют в ди. фапазоне мощности СВЧ 0,5 мВт, модуляции 7 э,Не 3540 э, ЬН 720 э, скорость развертки 30 э,г 0,03, Запись в виде синглета проводят дляколичественногй оценки по стандартному эталону мпфв решетке МдО.Вторую запись того же сигнала проводят првскорости развертки Зэ и модуляции 1 з. Уменьшение скорости развертки и модуляпии позво.лает выявить сверхтонкую структуру сигнала,Учитывая параметры, заданные радиоспектро 4 фметром, 17 компонент сверхтонкой структуры,константу связи 1,924 и 0,934, распределениеотносительной интенсивности линий, относят дан 4ныи сигнал к а.токоферилхинону, что подтверждается следующими данными: полученный сигнал при диапазоне мощности 0,5 мВт, Не 3540 э ЬН 720 э, скорости разверкти 30 э, г 0,03, модуляции 7 э, относится к классу свободных ра. дикалов. Это подтверждается быстрым насыщен. ным в микроволновом поле, и 2,005 1 0,001, шириной линии около 15 э.При записи в диапазоне скорости развертки, равной Зэ, модуляции 1 э выявляется сверхтонкая структура в 17 линий. После получения чет. кого спектра, с ясными компонентами, т.е, хо. рошим разрешением проводят расшифровку спектра, Расшифровка осуществляется по опре. деленным правилам.Предлагаемый способ является более чувствительным, обеспечивает высокую точность оп. ределения, требует меныпих материальных затрат, и времени для его осуществления. Способ определения а токоферилхипона в би. ологической жидкости путем экстрагирования пробы с последующим выпариванием н высушиванием экстракта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью радиоспектрометрирования целевого продукта высушенный экстракт растворяют в спирте, затем обрабатывают щелочью;Источники информации, принятые во внима. ние нри экспертизе1. Вопросы медицинской химии, т. 13, 61, 1967, а 44.