Способ постановки непрямой гемоагглютинации

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИяК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ16 ОЮОЗ Союз Советских Социалистических(45) Дата опубликовани 1) Ч, КлА 61 В,1 акоев Гасударственных комитет Совета Министров СССР(088,8) 8. Бюллетень М 1 описапля 31.05.78 ло делам изобретений и открытий72) Авторыизобретения В. А. Клименко и Н, В. Софр 71) Заявитель Казахский научно-исследовательский ветер арный инсти СПОСОБ ПОСТАНОВК ПРЯМОЙ ГЕМОАГГЛЮ АЦИИ АКЦ вление постатабильности ее Изобретение относится к микрооиологци,в ча "тности к способу постановки реакции непрямой гемоаггл 1 отинации, и может быть ис пользо 1 вано для серологической диагностики инфекционных заболеваний, в частности бру целлеза.Известен снособ постанозки реакции непрямой гемоагглютцнацци (РНГА) по оощепринятой методике, включающий разведенле исследуемых сывороток крови забуференным физиологическим раствором с обязательным добавлением к нему стабилизатора - свежей сыворотки здорового кролика для придания среде определенной вязкости 11.Недостатком извесгного способа является 15го, что подготовка к постановке реакции требует больших затрат времени на содержание кроликов и получение от них свежей сыворотки, Кроме того, невозможно стандартизировать этот компонент. 20Цель изобретения - удешеновки реакции,и повышение срезультатов.Это достигается тем, что в способе постановки реакции непрямой гемоагглютинации, 25 включающем разведение исследуемых сывороток забуференным физиологическим раствором со стабилизатором, внесение сенсибилизированных эритроцитов с послед 1 ующим тщательным перемешиванием и выдерживанием ЗО смеси в течение двух часов,при комнатноц температуре, в качестве стабилизатора используют глицерин, который добавляют к физиологическому раствору в соотношении 1:200.. гример осуществления этого способа.Реакцию ставят в полцстироловых пластцнах с луночками. Для реакции необходимы следующие компоненты: формалинизцрованные эрцтроциты, сенсцбцлцзцрованные антигеном;,50 О 1 О-ные формалцнцзцрованные эритроциты для адсороццц нормальных агглютцнинов; контрольные формалцнцзцрованные, танизцрованные эритроциты, испытуемые ц контрольные сыворотки крови ц физиологический забуференный раствор с дооавленцем глицерина в соотношении 1: 200.В "е сывороткц, предназначенные для реакции, предварительно разведенные 1: 20, инактивируют при 56" С в течение 30 л 1 ся, затем адсорбцруют 50%-ными формалцнизированными эритроцитами путем смешивания двух капель эритроццтов, на 1 л 1 л разведенной сыворотки ц выдержцванця в термостате при температуре 37 - 38 С в течение часа, с последующим центрцфугированцем илц отставанием в рефрижераторе 15 - 20 ч.Отценгрифугцрованные илц отстоявшиеся сыворотки разливают з лунки полистироловых пластин в разведениях 1: 20, 1: 40, 1: 80 н т. д. до предельного титра, Разведение производят60003 3 Формула изобретения Составители В. Радькова Редактор Н. Скворцова Текред И, Рыбкина Корректор В. ГутманЗаказ 184/35 Из,. Р" Тираж 708 НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Подписное Тип. Харыс. фил. пред. Патент забуференным физиологическим, раствором с добавлением глицерина в соотношении 1: 200, В последней лунке пер 1 воначальное разведение сыворотки (1: 20) пе изменяется.Во все лунки, кроме последней, вносят по 5 одной калле сенсибилизированных эритроцитов, а в последнюю - по одной калле контрольных эрнтроцитов.После тщательного перемешивания пластины оставляют на дза часа при комнатной тем- О пературе. Учет рзултаов реакции проводят не ранее чем через два часа. Оценку результатоз реакции проводят по четырехкрестовой системе в завиимости от диаметра агглюти национного зонтика. Контролем служит зазе домо отрицательная и положительная с известным предельным титром сыворотка.Применение глицерина вместо нормальной кроличьей сыворотки имеет следующие преимущества: сокращается время на проведение 20 реакции; разница в стоимости нормальной кроличьей сыворотки и глицерина медицинского удешевляет массовое исследование сыворотки крови методом РНГЛ в сотни раз; использование химически стандартного вещестда позво ляет получить большую степень достоверности и сопоставимости.Исследования, проведенные на 984 пробах сыворотки крови крупного рогатого скота на бруцеллез методом РНГЛ с антигеном Каз НИВИ в двух вариантах; в первом г, добавлепнем в качестве стабилизатора нормальной кроличьей сыворотки (1: 100) и во втором - но данному способу Казахского НИВИ с тобазлением стабилизатора глицерииа (1: 200), показали почти полное совпадение реакций в первом и во втором вариантах. Всего реагировало в разных титрах 22 пробы, причем у 6 проб имелось расхождение в титрах на одно разведение в сторону увеличения чувствительности в варианте с глицерином. Способ постановки реакции непрямой гемоагглютинации, включающий разведение исследуемых сывороток забуференным физиологическим раствором со стабилизатором, внесение сенсибнлизированньх эритроцитов с последующим тщательным персмешиванием и выдерсмеси,в течение двух часов комнатной температуре, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью удешсвления постановки реакции и повышения стабильности ее результатов, в качестве стабилизатора используют глицерин, который дооавляют к физиологическому раствору в соотношении 1: 200. Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:1. Ветеринарная энциклопедия, т. 2, 1969, с, 330 - 331.