Разбавитель для сухой вирусвакцины против болезней марека

п 1 563)75 Свез Советских Социалистических РеспубликГосударственный комитет Совета Министров СССР 53) Ъ 576.8,094(088.8) о делам изобретений крытии 72) Авторы изобретен 71) ЗаявителЭ, ф, Токарик, Т, Б, Слепенко, Т. А. Авдеева и А. А, Потемкин сесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности54) РАЗБАВИТЕЛЬ ДЛЯ СУХОИ ВИРУСВАКЦИ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА 15 альное Изобретение относится к разбавителям сухой вирусвакцины против болезни Марека из вируса герпеса индеек.Сухая вакцина против болезни Марека отличатся от других тем, что вирус в ней неустойчив и плохо сохраняется в свободном от клеток состоянии. Использование эффективного разбавителя вызвано необходимостью сохранить исходную активность разведенной вакцины, предназначенной для вак цинации 500 в 10 цыплят, в течение всего периода вакцинации (2 ч), Поэтому особое значение приобретает разбавитель для сухой вакцины.Известны разбавители для нативной вак цины против болезни Марека, представляющие собой солевой сбалансированный физиологический раствор с добавлением сыворотки крупного рогатого скота до концентрации 10% 11. Однако он оказался малоэффек тинным для сухой вирусвакцины. Сухая вакцина, суспендированная в этом разбавителе, уже через 1 ч при комнатной температуре сохраняет только 60% исходной активности, а через 2 ч - 30%. 25Известны также разбавители - фосфатный буфер или среда 199 с добавлением и без добавления 4% триптозофосфатного бульона; смесь СФГА, представляющая сахарозофосфатный буфер с добавлением аль бумина и глютамата натрия, сахарозофосфатный буфер с альбумином (СФА) 21. Наиболее эффективным оказались разбавители, содержащие стабилизатор альбумин и сахарозофосфатный буфер в качестве его растворителя (СФГА, СФА). Однако этн разбавители обладают антигенной активностью, очень дороги (цена 1 кг бычьего сывороточного альбумина - 3,4 тыс. руб.; альбу- мина из сыворотки крови человека - 8,6 тыс. руб.) и технология их изготовления сложна тем, что общепринятый метод стерилизации - автоклавирование - непригоден. Все это ограничивает их применение, особенно в промышленном масштабе.Цель изобретения - разработка разбавителя, повышающего длительность сохранения исходной активности вируса, дешевого, простого в изготовлении и не обладающего антигенной активностью.Это достигается тем, что в качестве стабилизирующего вещества разбавитель содержит цеобладающий антигенностью и устойчивый к воздействию высоких температур пептон, а в качестве его растворителя - глициновый буфер с рН 7,0 - 7,2 при следующем соотношении компонентов, %:Пептон 1 - 10 Глициновый буфер с рН7,0 - 7,2 Ост563175 Активность вакцины после разбавления, в фОЭ/мл физиологический раствор включающий 10% сыворотки крупного рогатого скотаКорректор Л, Брахнина Редактор Н. Богатова Заказ 1667/6 Изд Ма 590 Тираж 693 Подписное НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 3Предлагаемый разбавитель значительно дешевле известных (цена 1 кг пептона - 13,руб.) и эффективность его действия не ниже СФГА, являющегося в настоящее время лучшим разбавителем для вакцины против болезни Марека,При получении предлагаемого разбавителя навеску пептона для получения 2 в 10%- ного раствора растворяют в бидистиллированной воде. Для осветления раствора его подкисляют 1 н. соляной кислотой до рН 5,5 и кипятят в течение 30 мин, фильтруют и нейтрализуют 2 М глициновым буфером (рН 8,б) до рН 7,0. После этого разбавитель расфасовывают, герметически укупоривают Из данных таблицы видно, что предлагаемый разбавитель (2%-ный раствор пептона на глициновом буфере) так же, как и СФГА, хорошо сохраняет титр вакцины в течение 2 - 3 ч, в то время как разбавитель, включающий 10% сыворотки крупного рогатого скота значительно, снижает титр вакцины уже в момент разбавления (на 50% от исходной активности). Формула изобретенияРазбавитель для сухой вирусвакцины против болезни Марека, содержащий стабилизатор и растворитель его, отличающийся тем, что, с целью повышения длительнои стерилизуют автоклавированием при 1 атм в течение 1 ч, Разбавитель обладает надежными стабилизирующими свойствами при концентрации пептона- 10%, но для прак тического применения наиболее пригоденразбавитель с концентрацией пептона, равной 2%. Б таблице приведены примеры сохранения 10 активности вакцины в предлагаемом разбавителе в течение 2 - 3 ч после ее растворения в сравнении с другими известными раэбавителями (в разбавители вносили равное количество вирусвакцины; данные в скобках - 15 % от исходной активности в СФГА). сти сохранения исходной активности вируса и снижения стоимости разбавителя, в качестве стабилизатора разбавитель содержит пептон, а в качестве его растворителя - гли циновый буфер с рН 7,0 - 7,2 при следующемсоотношении компонентов, %:Пептон 1 - 10 Глициновый буфер с рН7,0 - 7,2 Остальное 25 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1, Биологические и химиотерапевтическиеветеринарные препараты. М., 1963, с. 65.2. Патент США3783098, кл. 195-1.1, 30 1974.