Способ получения а-дегидрокортизона (преднизона)

ООИСАййЕ 323975ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 18.Ч 1.1970 ( 1451444/31-16)с )рисоединением заявкиПриоритет 3/00 Комитет по делам изобретеиий и открытий при Совете Министровубликовано 21 1 Х.1972, Бюллетень28 К 57,17:576.8.093,1 (088.8) Дата опубликования описания 13.Х.19 Авторыизобретени; Корзинкина,Андреев, еенко, Л. В.ыжкова, Г. КЕ. М.т биохимии и Соколова, Е. А Скрябин, Н, Н айсман и П. А физиологии м Борман, Н, А.Суворов, И, А.Гангрскийкроорганизмов АН Иист аявител ЧЕНИЯ Л-ДЕГИДРОКОРТИЗОНА(П Р ЕДН ИЗОНА) ОСОБ Изобретение относится к медицине, д именно к микробиологическим способам получения лекарственных препаратов.Известен способ получения )реднизона )утем микробиологического превращения ацетата кортизоца с помощью смеси чистых культур МусоЬас 1 епцш д 1 оЬг 1 огт)е 193 и МусоЬдс 1 еггц)г аЬтгт) 726.Исходная концентрация ацетата кортизона )ри использовании указанного способа сравнительно невелика, что приводит к низкой эф фективности ферментационного процесса,Цель изобретения - интенсификация )роцесса. Это достигается тем, что культуру МусоЬас 1 еггцт) роЬг 1 оггпе 193 выращивают в присутствии индуктора в течение 1 - 2 суток, культуру МусоЬас 1 епцт) аЬцг) 726 выращиваютт без индуктора до фазы затухающего роста, и процесс трансформации проводят в )рисут. ствии поверхностно-активного соединения, В качестве индуктора используют ацетат корти- зона или )рогестерон в количестве 10 лсг нд 100 лсл среды, а в качестве )оверхностно-активного соединения - антифомсилан в коли. честве 0,1 - 0,3 лсл 60%-ного раствора в эфирена 100 лсл среды.П р и м е р 1. Исходные культуры хранят ца кукурузно-глюкозном агаре и выращивают в течение 4 - 5 суток на этой же среде. Бактериальной сус)ензией с косяков засевают колбы емкостью 250 лсл с 50 тс.г среды, со держащей в 1 л водопроводной воды )рц р 1 6,8 - 7,2 осле стерилизации) 1 - 1,5% кукурузного экстракта (на сырой вес) ц 1% 5 глюкозы. МусоЬдс 1 еггпгп д 1 оЬг 1 оггпе 193 вырдщцвшот 20 - 24 час, затем вносят 1%-цый метацольный раствор дцетата корт)зонд до концентрации 100 лсг/,г ц продолжают выращивдть еще 20 - 24 час до концентрации бцомас сы 4 - 4,5 лсг/лс.г. МусоЬдс 1 еггцш а 1 Ьцг) 726культцвуруют без цндуктора в течение 1 суток до достижения фазы затухс)ощего роста (колцчество биомассы достигает 3,5 - 4 лсг/лсл), По окончании культ)в)ровдя смешивают 15 50 лс,г первой культуры, 100 лсл второй и350 гил стерильной водопроводной воды, добавлягот 0,2 лс.г ацтцфомсцланд, тщательно )еремешгггтагот ц добдвляют 1 г ацетата корт)зона, растворенного в 30 лсл кипящего метанолд, 20 )рц энергичном )еремешцвацци. Трансформацию проводят )рц 28 С ца качалке )рц 200 об/,цин в течение 26 - 32 час. Ход реакции контролируют методом бумажной хроматографии в системе бе)зол - формамцд, а реакцию 25 дегидрцрованця - методом )олярографиц.Выход )реди)зона 90 - 95%, Выделение преднизона проводят )ериодцческой экстракцией.1,8 л культуральцой жидкости экстрагируют равным объехгоч хлористого метцлеца 4 раза. ЗО Экстракт у)аривают в вакууме ца роторном323975 Предмет изобретения Составитель В. Таратута Техред Л. БогдановаРедактор Н. Воликова Корректор А. Васильева Заказ 3451/9 Изд.345 Тираж 40 б Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж.35, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 испарителе до объема 18 мл, выдерживают в холодильнике 15 - 20 чпс, выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают охлажденным хлористым метилсном и сушат над серной кислотой. Получают 2,83 г преднизона (83,5% ) с т. пл. 222 С, а после перскристаллизации из изопропплового спирта с углем (с последующим испарением растворителя) 2,57 г препарата с т. пл. 225 С. П р и м е р 2. Выращивание культуры МусоЬас 1 сгшгп аЬцгп 726 происходит, как это указано в примере 1, а для выращивания культуры МусоЬас 1 ег 1 пгп роЬ 11 оггпе 193 в качестве индуктора применяют прогестерон, проводят выращивание в течение 1 суток. Полученные культуры смешивают в соотношении 2: 1 (по биомассе), разбавляют водой в 3 раза и добавляют поверхностно-активное вещество и горячий метанольный раствор ацетата корти- зона. Через 32 - 36 яас процесс микробиологической трансформации оканчивается. Выход преднизона (по данным бумажной хроматографии) 85 - 90% 1, Способ получения Л-дегидрокортизона(преднизона) путем микробиологического 5 превращения ацетата кортизона с помощьюсмеси чистых культур МусоЬас 1 ег 1 цгп доЬ 11 огше 193 и МусоЬас 1 егшт а 1 Ьцгп 726, отличаюиийся тем, что, с целью интенсификации процесса, культуру МусоЬас 1 ег 1 цгп доЬ 11 оггпе 10 193 выращивают в присутствии индуктора втечение 1 - 2 суток, культуру МусоЬас 1 ег 1 цгп аЬцгп 726 выращивают без индуктора до фазы затухающего роста, и процесс трансформации проводят в приоутствии поверхностно активного соединения.2, Способ по п, 1, отличающийся тем, чтов качестве индуктора используют ацетат кортизона или прогестерон в количестве 10 мг 100 мл среды,20 3. Способ по п. 1, отлнчаощийся тем, что вкачестве поверхностно-активного соединения используют антифомсилан в количестве 0,1 - 0,3 лл 60%-ного раствора в эфире на 100 ля среды.