Экзогиалуронидазы

314787 ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОВСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУЗависимое от авт. свидетельства-явлено 28,1,1969 ( 1310666/28-13 ПК С с присоединеиием заявки-Комитет по делам изобретений и открыти при Совете Министров СССРитет -Опубликовано 21,1 Х.1971. Б)оллетець28Дата опубликования описания 1.Х 11,1971 ДК 577,15.07 Авторыизобретеиия Елинов и иностранец Адель Эль СуккарОбъединенная Арабская Республика) Заявитель нии ОБ ОЧИСТКИ ГИАЛ УРОН ИДАЗЪ 2 Изобретение от) фермецтцых препарИзвестен способ зы путем ввсдеция активных веществ. очистки фермецтцо высока. обам очстк осится к сп тов. очистки экз ее растворПо такому с)о препарата огиалуроцида цоверхцостцо особу степень цедостаточцо ет повыситьврата. П ювср хвосто-акть пара-метилч-аммоций - броруктурцу)о форедложецо в качестве о вещества использова -диоксоэтил-гексил-деци имеющий следующую ст тивцофени.мид,Н14- Х - С Н)о ь1СН)к, - СН Н -Способ состои Пример, В аигепз (штамх луро)идазу) ца агаре в пробирк 37 С, Получеццу бирок переносят бульона в колбе в следу)о)с ыращивают 9, продуцир скошенном х в течение о биомассу в 120 мл и оставляют м.ьбар)в осо ующий экзо мясо-пспто1 суток из четь)рех мясо пептоц в стаццоцар ца цом п 1 цр- юго цх Предлагаемый способ позвотепець очистки фсрмецтцого и ский химико-фармацевтический иист условиях црц 3 С в течсцце 18 кис. После этого культуру в бульоне пцателыю взбалтывают до образовашя гомогеццой суспсцзц5 Вышеуказанную суспецзцю в количестве25 ил перецосят в колбу, содержащую 200 л среды след ющего состава:Дрокжевой экстрактг.Гидролизат казспца 1 г.10 Мясопептоццый бульон 200 .л.Используют четыре такс колбы, содерк- мое которых после засева хорошо смешивают, выдерживакт в цачале црц 37 С в тсчсццс 18 час, затем - при 24 С в течсццс 3 дцсй.Полученную биомассу цецтрифугируют прц 6000 оО.иан в тсчецце 5 лин и в кльтрал) - цой жидкости определяют активность гцалуроцидазы вцскозиметрческцм методом, а также содержание белка по Лоурц.К 800 лл культуральцой жидкости добавляют 5,44 г ацетата натрия ц 8 ял 0,5 Ч уксусой кислоты, смесь переносят ца лед ц охлаждают до тех пор, пока темцсратура сс )в цс снизится до 2 С. После этого добавляют5560 лл охлажденного до этой жс температуры 96 этацола и оставляют ц морозцльцой камере рефрцкс 1 атоя ца 18 час. Охлакдсццую смесь затем цсцтрцфугируют прц Г 000 од,).ан в течее 5 л)ан.30 Получеццый осадок растворяк)т в 40 ял314787 Предмет изобретения Саста п п сд ь Еп Дун ье Редактор В. Смирнгина Техрод Л. Я, Левина Корректор Е. Н, Зимина Заказ 448/796 Иад, .Й 1254 Тираж 473 Подписное 11.1 ИИ 11: Коьппгста по делам изобретений и открытий при 1",овстс Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб., д. 45Тип Харьк. фпп пред. атспт дистиллированной воды и повторно цсвтрнф, - гируют при тех жс условиях.К 35 лл полученной жидкости добавляют 35 лг пара-метил-фенил-лиоксоэтил-гекс;1 лдецил-аммонпй-бромида и оставляют прн 5" С 5 в течение 1 суток, цснтрифугируют при 1000 обI,1 ин в течение 5 1 ин и еще раз осаж;1 ают фермент этанолом из налосадочюй анкил ост и, как это1 азано выше.Осадок экзогиалуронидазы промывают 10 ацетоном, эфиром и после этого порошок фермента собирают пз центрифужных пробирок, Экзогиалуронидаза имеет белый цвет, легко растворима в воде, содержит от 500 до 600 единиц вязкости (за единицу вязкости прини мают минимальное количество фермента, которое расщепляет гиалуроновую кислоту;1 о 1/г ее первоначальной вязкости в течение 5 гяин при 22 - 24 С).Степень очистки экзогиалуронидазы с по мощьо поверхностно-активного вещества достигает кратности не менее, чем в 800 раз и пересчете на конечную активность фермента 1 сравнении с активностью его в исходюй культуральной жидкости. Выход экзогиалуронплазы составляет около 22 дг (44%) от псрвоначального осадка (при осаждении этаилом).Приготовленный указанным способом фермент не содержит свободных аминокислот, к раствору его можно добавлять мертиолат (1: 5000) в качестве консерванта, которь 1 й пе снижает активности гиалуронидазы. Способ очистки экзогиалуронилазы путем введения в ее раствор поверхностно-активных веществ, отличающийся тем, что, с целью по вышеьиия степени очистки препарата, в ка 1 сстве поверхностно-активного вещества используют пара-метил-фснил - диоксоэтил - гекспллецпл-аммоний-бромид, имекнций следуон ю структурную формулу: НСН. "Ь - О, Нц - О -1-1 -- С Ьо г