236365

афффщимьсреотоэма.щ 7ттатент е-,И САН И 236365 Союз Советских Социалистических РеспубликК ПАТЕЯТУ Зависимый от патента М Заявлено 24.17.1967 (Лв 1152461/28-13) Г 1 риорцет 25.К 1966, Л 586466, Япошя,1 ПК С 121 Комитет по делам зобретений и открытий при Совете Министров СССРлцковацо 24.1.1969. Вктллетсць ЛЪ 6 К 663.11:577.155.2 1088.8) нця 27 А.196 та опубликования опц Авторизобретсш ИностранеМасао Тана (Япония) Заявитель Иностранная фцрв Кийова Хакко Когио К Япониятд.,ОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТИАМ И НАДЕНИ НД И НУКЛЕОТИДО пособов, на менцой смо вестных и цоцо жидкости одним цз пример путем обраб лой,ма, продуццрующеотцд, используют шпошаоетеэ АТС 1 т температуре 30 С льной среде, содерпептона, 1% дрождорцстого натрия ц 5 В качестве мц го тцахтцнадеь штамм Вге Ьа 6872. Его выра в гсченцс 21 час 10 жащей 2 оо глю жевого экстракт 30.т бцотцна.рооргаццзццдцц 5 клесс шп ащцвают прна пцтатсозы, 1 оа, 0,3% Получение тиаминадснцндинуклеотидов микробиологическим способом оыло неизвестно.Предлагаемый способ заключается в том, что тиамицадсццндшуклеотид получают путем культивирования в аэробных условиях микроорганизмов, например Вге Ьасегцпт агпгпошадепез и СогупеЬас 1 егцгп д 1 а 1 апттсцз, в воднои питательной среде, содержащей источник углерода, напрмер глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу, крахмал, гидролизат крахмала, мелассу, глицерин, сорбит, органические кислоты, источник азота, например мочевину, аммоццевые соли, пдролцзат казецна, жидкость от замочки кукурузы, дрожжевой экстракт, лспой экстракт, пептон, рыоцо:су в присутствии неорганических веществ, необходимых для роста продуцентов, например сульфата магния, фосфата натрия.К культуральцой среде добавляют тиамцн или его фосфорнокислый эфир и аденцн или соответствующее его производное. Их вводят сразу или периодически в культуральную среду в процессе ферментации, которую проводят прц температуре 20 - 40 С и рН среды 5,5 - 9,0.По окончании ферментации тиаминадениндинуклеотид отделяют от ферментационной Выращеннуо посевную культуру (втатерц ал) в количестве 10/о вносят в ферментационную культуральную среду, содержащую 100 г глюкозы, 10 г дцкалийфосфата, 10 г семиводного сульфата магния, 0,1 г двухосновного хлорида кальция, 10 г дрожжевого экстракта, 20 30. бцотцна ц 6 г мочевццы. Всю среду, заисключением мочевцны, стерилизуют под давлением 1 кг,с,ттз в течение 10 лтин, Мочевину стерцлцзуют отдельно в виде 12/,-ного водного раствора и д,обавляют в среду в таком ко лцчсстве, чтобы концентрация ее достигла6 г/.т.Дальнейшее выращивание осуществляютпри температуре 30 С в аэробных условиях в231) 31) 5 Предмет изобретения Состав ии, гв Т. Полянск ав 1 еил Л. Я, ЛевинаРелактор Э, Рубан Корректор А. П. Василь ева Э,)кив 7 ЬО,г 16 Рго тписиоеЦНИИПИ 1(омитета ио делам изобретений и открвпий ири Совете Мииистрои СССРМосква, Центр, ир, Серова, л. 4 Типографв. ир. Сапунова, 2 гечение 72 час с добавлением по 2 ггл тиамина и аденина и продол)кают выращивать еще 24 час,Через 96 час от начала выращивания вырабатывается 0,92 лггглл тиаминадениндинуклеотида. Затем фермента ционцую )кидкость освобо)кда)от от бактериальцых клеток путем фильтрации, рН доводят до 7,0 и пропуска)от через колонку, заполненную 2 л анионообмсцной смолы даиайон ЯА 2 ТВ (в хлоридцой форме) для адсорбции тиаминадениндинуклеотида. Ионообменную смолу элюируют водным раствором милицормальцой соляной кислоты и 0,02 ц. раствором хлорида лития, в результате чего получают 500 )гл элюата.Последний концентрируют в вакууме, осаждают ацетонмстанолом, получая таким образом 0,71 г литиевой соли тиаминадениндицуклеотида. Соль очищают повторным растворением, высаливают и получают продукт, по физическим и химическим свойствам сходный с тцамицадснццдпнуклеотидом. Способ получения тпампцадецпцдицуклеотцдов бпосиггтезом, ог,гтсчпюагийся тем, что его 5 производят путем аэробного культивированиямикроорганизмов Вге)Ьас 1 сг)цпт агптпопгацепез и СогупеЬас 1 сгшгп д 1 а 1 аппсцз в водной питательной среде, содержащей источник углерода, например глгокозу, фруктозу, сахарову, 10 крахмал, гидролизат крахмала, мелассу, глицерин, сорбит, органические кислоты, источник азота, например мо гсипну, аммониевые соли; гидролизат казеица, жидкость от замочки кукурузы, дрожжевой экстракт, мясной 15 экстракт, псптоц, рыбную муку г др. в присутствии неорганических веществ, необходимых для роста продуцентов, например сульфата магния, фосфата натрия; к культуральной среде добавляют тиамин или фосфорнокислый 20 эфир и аденин или соответствующее его производное, причем их вводят сразу или периодически в культуральную жидкость в процессе ферментации, которую проводят при температуре от 20 до 40=С и рН около 5,5 - 9,0.