Способ изготовления аллергена вви для диагностики лептоспироза свиней

(5)5 А 61 К 39/00, 39 ИСАНИЕ ТЕН В Тут в ветериСправочдр Всеок-,ЛЛЕРГЕ ТОСПИ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(71) Витебский ветеринарный инст(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АНА ВВИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛЕПРОЗА У СВИНЕЙ Изобретение относится к области ветеринарной иммунологии, в частности к способам получения биологических препаратов и может быть использовано при изготовлении аллергенов для постановки внутрикожной аллергической реакции у животных с целью определения специфической гиперчувствительности замедленного типа к возбудителюю лептоспироза,Известен способ серологической диагностики лептоспироза у свиней с помощью реакции микроагглютинации (РМА). Недостатком известного метода является то, что он трудоемок. требует постоянного поддержания в лаборатории живых лептоспирозных культур, что представляет определенную угрозу здоровью лабораторных специалистов,Известен также способ изготовления лептоспирозного аллергена озвучиванием культур лептоспир 3 серогрупп и его приме(57) Использование: ветеринарная иммунология, Сущность изобретения: изготовление аллергена ВВИ для диагностики лептоспироза заключается в выращивании лептоспир серогрупп ,Ропопа, .Тагаззоч, 1 . ссегопасгпоггадае, 1 .Сапсо а, ,ЯахкоеЫп 9,.(3 грротурпоза на водно-сывороточной питательной среде, Дезинтеграцию проводят при частоте 20 кГц, мощности 100 Вт в течение 20 мин, дезинтеграт автоклавируют при 1 атм в течение 20 мин. Отделение аллергена осуществляют центрифугированием при 25000 об/мин, в течение 30 мин, полученную надостадочную жидкость фильтруют. нением для диагностики лептоспироза свиней.Цель изобретения - повышение качества аллергена,Способ осуществляется следующим образом.Лептоспиры серогрупп помона, тарасови, гриппотифоза, иктерогеморрагия, кэникола и сакскебинг каждый отдельно,выращивают в бутылях с водно-сывороточной питательной средой рН в пределах 7,27,4, Инкубирование посевов проводится втермостате при 28-30 С в течение 7-10 дней.Вначале макроскопически в проходящемсвете, а затем микроскопически отбираютбутыли с нужной концентрацией лептоспир(50-100 микробных тел в поле зрения микроскопа), Отобранные культуры разных серогрупп смешивают в одной емкости,Полученную смесь лептоспирозных культурподвергают воздействию ультразвуковогодиспергатора УЗДПпри частоте 20 кГц,1796190 30 1, стегоЬастоггЬацае, 1 . Сап соа, 5 ах 1 оеЬпц, 1,6 грро 1 урЬоза на водно-сывороточной питательной среде, дезинтеграцию проводят при частоте 20 кГц, мощности 100 Вт в течение 20 мин, дезинтеграт автоклавируют при 1 атм в течение 20 мин, отделение аллергена осуществляют центрифугированием при 25000 об/мин в течение 30 мин, полученную надосадочную жидкость фил ьтруют. Формула изобретения Способ изготовления аллергена ВВИ для диагностики лептоспироза свиней, включающий выращивание культур лептоспир, их дезинтеграцию ультразвуком, отделение полученного аллергена от микробной массы, отличающийся тем;что,сцелью повышения качества аллергена, проводят выращивание лептоспир, серогрупп Е. Рогпопа, 1.,Тагаз зоч 1,Составитель Я. ИммиевТехред М. Морге нтал КоРРектоР Н Бучок Редактор И. Иванова Заказ 608 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственною комитета по изобретениям и открытиямпри ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 мощности 100 Вт/см ультразвуковых волнзв течение 20 мин. После озвучивания лептоспирозный дезинтеграт подвергают автоклавированию при 1 атм в течение 20 мин, затем его центрифугируют при 25000 об/мин в течение 30 мин, надостадочную часть фильтруют через стерилизующий фильтр, разливают в ампулы, запаивают и вновь автоклавируют.Контроль аллергена проводят на сте- "0 рильность, безвредность; активность и специфичность.Для проверки на стерильность берут 5 ампул аллергена и из них делают высевы на МПА, МПБ, МППБ, среду Сабура, За посевами наблюдают 15 дней, все они должны быть стерильными, Безвредность аллергена проверяют на пяти белых мышах, им вВодят внутрибрюшинно по 0,3 см аллергена. За животными наблюдают 15 дней, в течение 20 которых они должны оставаться живыми.Сенсибилизирующие и антигенные свойства изучают на подсвинках, серонегативных к возбудителю лептоспироза.Аллерген вводят внутрикожно в дозе 0,2 см в область наружной поверхности ушной раковиньь Учет реакции проводят через 24 ч, У всех животных местная реакция должна быть отрицательной. Через 30 дней после начала опытов у данных животных исследуют сыворотку крови на наличие антител к возбудителю лептоспироэа в РМА и одновременно повторно производят внутрикожное введение аллергена в дозе 0,2 см . При исследовании результаты должны быть отрицательные,Специфичность препарата проверяют на неиммунных подсвинках зараженных за три недели до опыта внутрибрюшинно вирулентными культурами лептоспир и имеющим в сыворотке крови по РМА антитела к возбудителям лептоспироэа в титре 1:100 и выше,Аллерген вводят подопытным животным внутрикожно в дозе 0,2 см в областиэнаружной поверхности ушной раковины. Реакцию учитывают через 24 ч, у подопытных животных положительная реакция в месте введения аллергена сопровождается образованием гиперемированной отечности величиной 2,0 х 2,0 - 2,5 х 2,5 см 2.У здоровых свиней аллергическая реакция отсутствует или может сопровождаться образованием плотного узелка величиной 0,3 х 0,3 - 0,5 х 0,5 см 2,